陈春琳
- 作品数：17 被引量：61H指数：5
- 供职机构：陕西理工大学更多>>
- 发文基金：陕西省教育厅科研计划项目国家大学生创新性实验计划博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 重组大肠埃希菌外膜蛋白C的表达、纯化及多克隆抗体制备被引量：2
- 2015年
- 采用分子克隆方法获得大肠埃希菌外膜蛋白Omp C表达菌株;利用SDS-PAGE电泳切胶纯化、尿素梯度复性获得Omp C蛋白,免疫小鼠制备Omp C蛋白多克隆抗体。ELISA法证实Omp C抗血清滴度达1∶6 400倍,Western blotting发现Omp C抗血清具有很好的特异性。通过DNAMAN软件对Omp C序列同源性分析显示不同细菌间存在较高同源性,采用MEGA软件对Omp C的系统进化分析发现肠道致病菌亲缘关系更近。为Omp C蛋白免疫学功能研究奠定基础。
- 俱雄陈春琳刘祥王成祥王令吴三桥张涛
- 关键词：多克隆抗体WESTERNBLOTTING
- 一种溶藻弧菌外膜蛋白OmpK原核载体构建方法
- 本发明公开了一种溶藻弧菌外膜蛋白OmpK原核载体构建方法，包括如下步骤：S1、根据NCBI公布的基因序列，设计ompK基因引物；S2、提取溶藻弧菌基因组DNA；S3、以溶藻弧菌基因组DNA为模板，进行ompK基因的PCR...
- 刘祥陈春琳俱雄
- 文献传递
- 猪重要感染病毒蛋白的二级结构、抗原表位分析及三联表位多肽疫苗的重组预测被引量：4
- 2017年
- 为设计猪重要感染病毒的蛋白表位多肽疫苗,选取猪感染病毒的候选疫苗蛋白:猪繁殖与呼吸综合征病毒的GP5蛋白,猪圆环病毒2型的CAP蛋白,猪瘟病毒的E2蛋白。综合ABCpred和Bepi Pred方案,预测候选蛋白的B细胞表位;利用神经网络与量化矩阵法预测蛋白的CTL表位;采用MHC-Ⅱ类分子结合肽在线程序预测蛋白的Th表位。使用SOPMA方法与DNASTAR软件分析候选蛋白的二级结构,进一步验证B/T细胞表位预测结果的准确性。然后,通过Protean程序重组拼接获得的B/T细胞抗原表位。结果显示GP5蛋白具有4个优势B细胞表位,CAP、E2蛋白分别具有5个B细胞表位;GP5、CAP与E2蛋白各具有1个CTL表位;GP5、E2蛋白分别具有2个Th表位,CAP蛋白存在1个Th表位。二级结构分析显示预测获得的B/T细胞表位均处于蛋白易于产生表位的暴露表面、无规则卷曲与转角等位置,验证了B/T细胞表位预测结果的准确性。Protean程序重组拼接获得优势的B/T细胞抗原表位。最终设计获得抗原性较好的猪病毒三联表位多肽,为猪易感病毒的多联疫苗开发奠定基础。
- 刘祥陈琛陈春琳吴三桥
- 关键词：猪病毒表位疫苗抗原分析
- 小鼠骨桥蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定被引量：5
- 2015年
- 为探索骨桥蛋白(OPN)调控骨代谢及与肿瘤的关系,本试验利用DNAMAN与Mega 5.02软件分析OPN蛋白系统进化关系;采用RT-PCR与分子克隆方法制备OPN蛋白表达载体;利用SDS-PAGE电泳切胶纯化、尿素浓度梯度复性获得OPN蛋白,免疫小鼠制备OPN蛋白多克隆抗体;采用ELISA法检测抗体滴度,Western blotting检测抗血清特异性。OPN序列的同源性比对分析发现,在不同进化层次动物中均存在Arg-Gly-Asp(RGD)短肽重复序列;OPN序列系统进化分析显示,OPN在动物间具有明显的进化趋势;提取小鼠肝脏RNA,OPN重组载体双酶切、DNA测序鉴定结果及蛋白表达、纯化条带大小均与预测一致;ELISA法确认OPN抗血清滴度达1∶1 600;Western blotting证实抗血清具有很好的特异性。结果表明本试验对OPN序列进行了遗传进化分析,成功克隆、表达、纯化及复性OPN蛋白,并制备、鉴定了小鼠多克隆抗体。
- 刘祥陈春琳王杨科俱雄吴三桥张涛
- 关键词：多克隆抗体ELISAWESTERNBLOTTING
- 重组大肠埃希菌外膜蛋白OmpT的载体构建和表达条件优化及多克隆抗体制备被引量：6
- 2015年
- 通过分子克隆,获得了Omp T蛋白的表达菌株;利用切胶纯化,获得了Omp T蛋白。用Omp T蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体,采用ELISA法检测抗体滴度为1∶1 600,用Western Blotting法检测抗血清特异性较好。采用正交试验,获得Omp T菌株的适宜表达条件为诱导菌液OD600 nm为1.0,IPTG添加终浓度为0.3 mmol/L,诱导时间为8 h,诱导温度32℃;适宜培养条件为葡萄糖质量分数0%,转速230 r/min,装液量50 m L。
- 刘祥俱雄陈春琳
- 关键词：大肠埃希菌多克隆抗体
- 重组铜绿假单胞菌外膜蛋白OprI的原核表达及多克隆抗体制备被引量：7
- 2015年
- [目的]构建铜绿假单胞菌外膜蛋白OprI原核载体,表达、纯化OprI蛋白,制备并鉴定小鼠多克隆抗体。[方法]通过分子克隆获得OprI蛋白的表达菌株;利用SDS-PAGE电泳切胶纯化、尿素梯度复性获得OprI蛋白,免疫小鼠制备OprI蛋白多克隆抗体;采用ELISA法检测抗体滴度;Western blotting检测抗血清特异性;DNAMAN与MEGA软件分析OprI蛋白系统进化关系。[结果]OprI重组载体双酶切、DNA测序鉴定结果,以及蛋白表达、纯化条带大小与预测一致。ELISA法获得OprI抗血清滴度达1:3200倍,Western blotting证实抗血清具有很好的特异性。OprI序列的系统发生分析发现不同细菌存在很高的同源性。[结论]成功克隆、表达与纯化OprI蛋白,制备并鉴定小鼠多克隆抗体。为OprI蛋白免疫学功能研究奠定基础。
- 陈春琳刘祥王成富王令俱雄张涛吴三桥张晓娟
- 关键词：多克隆抗体WESTERNBLOTTING系统发生分析
- 重组绿脓杆菌外膜蛋白OprF的表达、纯化及多克隆抗体制备与鉴定
- 2015年
- 绿脓杆菌外膜蛋白Opr F可有效激活机体的免疫机制对抗细菌的感染,在疫苗上有很好的应用前景。采用分子克隆方法获得绿脓杆菌外膜蛋白Opr F表达菌株;利用SDS-PAGE电泳切胶纯化、尿素梯度复性获得Opr F蛋白,免疫小鼠制备Opr F蛋白多克隆抗体。ELISA法表明,Opr F抗血清滴度达1∶12 800倍,Western blotting证实抗血清具有很好的特异性。通过DNAMAN软件对Opr F序列同源性分析发现其C端在不同细菌间存在较高同源性;采用MEGA软件对Opr F的系统发生分析发现假单胞菌属细菌的亲缘关系高于其它属细菌。
- 陈春琳刘祥俱雄
- 关键词：多克隆抗体BLOTTING系统发生分析
- 铜绿假单胞菌外膜蛋白Ⅰ的原核表达、纯化及免疫保护作用研究被引量：8
- 2015年
- 铜绿假单胞菌外膜蛋白Opr I具有较强的免疫原性,在疫苗上具有开发前景。利用分子方法获得Opr I蛋白的表达菌株。Western blotting验证表明抗体能与Opr I蛋白特异性结合。SDS-PAGE电泳切胶纯化获得Opr I蛋白。将Opr I蛋白免疫小鼠并攻毒铜绿假单胞菌,发现Opr I蛋白激活的特异性免疫对小鼠铜绿假单胞菌感染的保护率达到57.14%,与对照组相比较达到显著性。采用正交试验设计,获得Opr I菌株最佳诱导表达条件为:加IPTG菌夜OD600值0.8,加IPTG终浓度0.3 mmol/L,诱导时间8 h,诱导温度28℃;菌株最佳培养条件为转速230 r/min,葡萄糖浓度0%,装液量50 m L。
- 陈春琳刘祥王成祥张晓娟俱雄张涛吴三桥
- 关键词：铜绿假单胞菌免疫保护正交试验
- DNA条形码技术在食蚜蝇科系统发育中的应用被引量：1
- 2015年
- 随着食蚜蝇科昆虫系统学研究的深入,单纯的形态学特征分类方法已显得不足,DNA条形码技术已为食蚜蝇科系统学研究提供了一条新途径并获得了较为广泛的应用。对国内外学者利用线粒体COI、18S rRNA和28S rRNA基因序列,以及ITS序列等在食蚜蝇科系统发育中的应用研究进行了总结。
- 陈春琳霍科科
- 关键词：DNA条形码食蚜蝇科系统发育
- 大肠埃希菌外膜蛋白OmpC的原核表达与免疫保护作用研究被引量：11
- 2015年
- Omp C蛋白为大肠埃希菌主要外膜蛋白,具有提高宿主免疫能力的作用,在疫苗上有很好的应用前景。通过分子克隆获得Omp C蛋白的表达菌株;Western-blotting法证实Omp C抗体可与表达的重组蛋白很好的结合。利用切胶纯化获得Omp C蛋白,免疫小鼠产生抗体,然后攻毒大肠埃希菌肠道致病菌,结果显示保护率达到63.64%,与对照相比较具有显著差异。利用正交试验,获得Omp C菌株的最佳表达条件为:诱导时菌液OD600值0.5,IPTG终浓度0.3 mmol/L,诱导时间8 h,温度32℃;最佳培养条件为:葡萄糖浓度0%,转速230 r/min,装液量50 m L。为Omp C工业发酵、蛋白功能与疫苗开发研究奠定了基础。
- 俱雄陈春琳刘祥张涛吴三桥张晓娟
- 关键词：免疫保护
