林祥芳
- 作品数：5 被引量：10H指数：2
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 轮状病毒非结构蛋白4的克隆、表达及其对胞内钙离子的干扰被引量：4
- 2013年
- 目的构建轮状病毒（rotavims，RV）非结构蛋白4（nonstructural protein4，NSP4）和其第86—175位氨基酸肽段（86 to 175 amino acid peptide of nonstructural protein4，NSP486加5）基因的原核表达系统，初步证实重组表达产物的生物学活性。方法胶体金法筛选A组轮状病毒抗体阳性粪便，提取病毒RNA并逆转录为eDNA，PCR扩增出NSP4和NSP486-175基因，插入到表达载体pET-28a（＋）。构建pET-28a（＋）-NSP4和pET-28a（＋）-NSP486-175原核表达载体，转化E．coliB121（DE3），IPTG诱导表达，Ni-NTA亲和层纯化及Western blot鉴定。Fluo-3AM标记Caeo-2细胞内游离的ca2＋（in—traneellula rcalcium，[Ca2＋]i），激光共聚焦显微镜检测NSP486-175蛋白对[Ca2＋]i的效应。结果NSP4和NSP86-175DNA测序结果与NCBI中相关基因一致。完整的NSP4在大肠埃希菌中难以表达。NSP486-175，蛋白主要以可溶性方式存在，相对分子质量为10000。外源性添加NSP486-1755蛋白至Caco-2细胞荧光强度和分布改变。结论构建了pET-28a（＋）-NSP4和pET-28a（＋）-NSP486-175表达载体，目的蛋白能够导致细胞内游离的Ca^2＋失衡，初步证实具有生物学活性，可进一步用于轮状病毒致病机制及疫苗的相关研究。
- 林玲张盼林祥芳刘彩霞杨锦红李向阳
- 关键词：轮状病毒克隆表达细胞内游离钙
- 肺炎链球菌血清分型方法与毒力基因转录水平差异的研究
- 目的: 本课题通过采用不同方法对肺炎链球菌进行血清分型，旨在找到较快速、准确、方便及经济的分型方法，同时对本地区肺炎链球菌血清型的分布有个初步的了解。通过对肺炎链球菌5个毒力基因(psaA、ply、lytA、cbpA、...
- 林祥芳
- 关键词：肺炎链球菌血清分型毒力基因转录活性
- 两种肺炎链球菌血清型分型方法比较
- 李向阳林祥芳张盼杨锦红刘彩霞
- 产NDM-1、IMP-4和KPC-2碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌耐药特点被引量：2
- 2015年
- 目的探讨本院临床分离的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)耐药基因的携带情况及对17种常用抗菌药物的耐药特点。方法采用VITEK Compact-2全自动微生物分析系统进行菌株的鉴定和药敏试验,收集耐碳青霉烯类药物肺炎克雷伯菌24株,采用改良Hodge试验筛查碳青霉烯酶;PCR技术扩增耐药基因,包括碳青霉烯酶、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和Amp C酶基因,并对扩增产物进行测序和BLAST比对分析。结果菌株对头孢菌素类、单环内酰胺类、β-内酰胺酶抑制剂复合物、氟喹诺酮类和呋喃妥因等抗菌药物表现出较高的耐药性,但对氨基糖苷类药物丁胺卡那和妥布霉素的敏感性较好,敏感率分别为100.0%和62.5%。24株耐药菌株中,有16株改良Hodge试验阳性,阳性率为66.7%;PCR扩增结果显示:12株检测出blaKPC-2基因,3株检测到blaIMP-4基因,2株blaNDM-1阳性,所有菌株都携带blaSHV基因,12株携带blaTEM基因,13株携带blaCTX-M基因,7株携带blaDHA基因。结论本院CRKP以产KPC-2为主,但同时还出现了NDM-1和IMP-4金属酶。
- 张盼林祥芳刘彩霞林玲余坚李向阳
- 关键词：肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶改良HODGE试验
- 52株侵袭性肺炎链球菌血清型分布及耐药性分析被引量：4
- 2015年
- 目的了解本院临床分离的侵袭性肺炎链球菌的血清型分布及耐药情况,为临床用药提供参考。方法采用荚膜肿胀试验检测2009年1月-2013年5月临床分离的52株侵袭性肺炎链球菌的血清型,采用最小抑菌浓度(MIC)稀释法检测药物敏感性。结果 52株侵袭性肺炎链球菌共鉴定出15个血清型/群,常见的血清型有14(21.2%)、19A(15.4%)、6B(11.5%)、19F(9.6%)、23F(9.6%)、3(9.6%)、6A(5.8%),其中有1株用此方法无法确定血清型;所有的侵袭性肺炎链球菌对万古霉素和左氧氟沙星均敏感,红霉素、四环素、氯林可霉素的耐药率分别为96.2%、64.7%、89.5%。结论本院临床分离的侵袭性肺炎链球菌的血清型主要集中在14、19A、6B、19F、23F、3、6A,对红霉素、四环素、氯林可霉素等耐药情况较严重。
- 林祥芳刘彩霞杨海蔚李方去李向阳杨锦红
- 关键词：血清型耐药性
