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青岛地区2012—2014年甲型H1N1流感病毒基因特征被引量：10: 2016年; 目的了解2012—2014年山东省青岛地区人群甲型H1N1流行性感冒(流感)病毒流行株基因特征及变异趋势。方法收集2012年4月—2014年3月青岛地区流感样病例咽试子2 100份,分离鉴定136株,随机抽取51株,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)、基质蛋白(MP)3个基因片段全长,并进行序列测定,对各基因片段进行系统发育分析及基因和氨基酸位点变异分析。结果 HA、NA进化树分析发现,2012—2014年青岛地区流行的甲型H1N1流感病毒分为3个分支;HA蛋白的氨基酸位点分析显示,部分毒株在抗原决定位点,受体结合位点以及其他位点上发生一定程度的变异,涉及15个氨基酸位点变化;NA蛋白的氨基酸位点分析显示,与疫苗株比较有10处氨基酸位点发生了明显变异;M2蛋白分析显示所有毒株均对金刚烷胺类药物耐药。结论 2012—2014年青岛地区流行的甲型H1N1流感病毒在抗原和受体结合位点均发生基因变异及抗药毒株的出现对流感防控提出更大的挑战。; 赵丹苏志磊于萍柴青宫金伶史晓燕汪照国; 关键词：HA基因 NA基因基因特征

2009-2011年青岛市甲型H1N1流行性感冒病毒全基因组特征分析被引量：3: 2013年; 目的了解2009-2011年青岛地区甲型H1N1流行性感冒病毒（简称流感病毒）的全基因组特征.方法选取2009-2011年青岛地区流行的甲型H1N1流感病毒35株,提取病毒RNA,应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）扩增各基因片段,并进行序列测定;用Sequencher软件完成序列拼接.选取GenBank收录的25条全球同期甲型H1N1流感病毒血凝素（HA）基因全长序列作为参照,用Mega 5.0软件对各基因片段进行系统发育分析及分子特征分析;下载2010年8月至2011年3月间全球分离的1068条该型HA序列用于氨基酸变异分析.结果在HA基因进化树上,2009-2010、2010-2011年监测季毒株各分列4个分支,每监测季各有一个优势分支.2009-2010年监测季优势分离株HA基因核苷酸同源性为99.6％～99.9％,编码氨基酸同源性为99.1％～ 99.8％,2010-2011年监测季优势分离株HA基因核苷酸同源性为99.1％～ 99.6％,编码氨基酸同源性为98.2％～99.1％,两季优势分离株间HA基因核苷酸同源性为98.8％～99.8％,编码氨基酸同源性为98.0％～99.6％.病毒HA蛋白与疫苗株比较,各监测季分别有14、12处氨基酸变异,涉及10个抗原位点及5个阳性选择位点.神经氨酸酶（NA）蛋白247位、274位氨基酸均分别为丝氨酸（247S）、组氨酸（274H）,M2蛋白31位氨基酸均为天冬酰胺（31N）.结论 2009-2011年青岛地区流行的甲型H1N1流感病毒在持续不断地发生变异而产生抗原漂移;毒株全部为烷胺类药物耐药株,但对神经氨酸酶抑制剂敏感.; 汪照国杨婷婷柴青于萍刘晓琳段海平弋英; 关键词：流感病毒A型基因组抗原变异

2010-2012年青岛地区手足口病病原谱及柯萨奇 A10型的分子流行病学研究被引量：13: 2014年; 目的：阐明2010-2012年青岛地区手足口病（ HFMD）病原谱及相关柯萨奇病毒A10（ CVA10）型基因特征。方法用荧光RT-PCR法对HFMD患者咽拭子标本进行总肠道病毒（ EV）、柯萨奇病毒A16（CVA16）型和肠道病毒71（EV71）型检测，然后用半巢式反转录PCR进行肠道病毒VP1基因部分序列扩增，再结合序列分析鉴定血清型；对CVA10阳性分离株进行VP1基因全长序列扩增及基因序列测定，用MEGA5．0软件进行系统发育分析及分子特征分析。结果2010-2012年间，共检测1919个手足口病门诊轻症病例和1336个住院重症病例；门诊轻症病例中，2010年和2012年以CVA16为主，各占轻症病例总阳性数的53％和73％，而2011年以EV71为主，占轻症病例总阳性数的78％；住院重症病例中，EV71为2010年和2011年主要病原，各占重症病例总阳性数的70％和86％；其他型别（非CVA16、非EV71）肠道病毒在2012年住院重症病例中成为主要病原，占重症病例总阳性数的44％；2010-2012年分别检出其他型别肠道病毒19株、16株和22株，其中CVA10检出率最高；23株CVA10的VP1全长基因序列进化分析表明这23株CVA10病毒全部属于C基因型，它们VP1基因氨基酸序列同源性为97．3％～100．0％，与其他地区同期参考株相比无显著差异。结论2010-2012年间，CVA16和EV71是引起青岛地区手足口病流行的主要病原，同时伴有多种其他型别肠道病毒流行，其中C基因型CVA10分离率较高，它们相互间同源性较高，与其他地区同期参考株相似。; 柴青宫金伶赵丹史晓燕于萍汪照国; 关键词：手足口病系统进化分析

2006—2011年青岛地区B型流感病毒全基因组进化特征分析被引量：8: 2014年; 目的：了解2006-2011年间青岛地区流行的B型流感病毒的全基因组进化特征。方法选取2006-2011年间青岛地区分离的B型流感病毒，提取病毒RNA，应用逆转录聚合酶链反应（ RT-PCR）扩增各基因片段，并进行序列测定；Sequencher 软件完成序列拼接。 MEGA5.0软件对各基因片段进行系统发育分析及分子特征分析。结果在血凝素（ HA）基因进化树上，Victoria系V1分支为B/Malaysia/2506/2004样毒株，包含2006-2009年13个毒株，V2分支为B/Brisbane/60/2008样毒株，包含2009-2011年12个毒株；Yamagata 系全部为 B/Florida/4/2006样毒株， Y1分支包含2006-2008年5个毒株，Y2分支包含2010-2011年7个毒株。全基因组分析表明V2分支3个毒株发生了5＋3重配，1个毒株发生了1＋7重配，重配株均与前一季及当季疫苗株同亚型；HA进化树上处于Yamagata系的毒株全部属于基因型2，处于Victoria系的毒株全部属于基因型15；HA1蛋白与疫苗株进行比较：Victoria系分离株主要变异位点包括H14Q、L58P、N129S、I146V、N171D、R279K；Yamaga-ta系分离株主要变异位点包括R48K、K88R、P108A、N116K、S150I、N165Y、D196N、N202S、S229G；位点116和129、位点150、位点165、位点196和202分处以往证实经历阳性选择的抗原表位120环、150环、160环和190环。结论2006-2011年青岛地区B型流感病毒两系共流行，并且持续进化；疫苗的使用可为同系病毒造成选择压力，而双组分的B型流感疫苗可能更为有效。; 杨婷婷柴青段海平于萍刘晓琳汪照国; 关键词：流感病毒B型全基因组抗原变异进化

2005年至2011年青岛地区甲型流行性感冒病毒耐药性和基因进化分析被引量：11: 2014年; 目的了解2005年至2011年青岛地区甲型流行性感冒病毒的药物敏感性，并探讨病毒耐药的分子机制。方法采用化学发光法检测甲型流行性感冒病毒对神经氨酸酶抑制剂（NAI）奥司他韦的敏感性；分析病毒基质蛋白2（M2）基因序列以检测其对烷胺类药物的敏感性。应用MEGA5．O软件进行基因组进化分析。结果2005年至2011年青岛地区流行的H3N2亚型、新H1N1亚型流行性感冒病毒均未发现对奥司他韦耐药，但对烷胺类药物全部耐药；季节性H1N1流行性感冒病毒奥司他韦耐药株的比例由2008年至2009年流行季的28．6％（6／21）上升至2009年至2010年流行季的2／4，仅2008年至2009年流行季的28．6％（6／21）毒株对烷胺类药物敏感；奥司他韦耐药株均为重配突变株。结论基因组重配参与病毒NAI耐药性；奥司他韦应作为流行性感冒预防与治疗的首选药物，而流行性感冒病毒耐药性监测需进一步加强。; 杨婷婷黄维娟刘晓琳弋英于萍柴青王大燕汪照国; 关键词：抗药性病毒奥司他韦金刚烷胺

2007—2011年青岛地区H3N2流感病毒全基因组进化特征分析被引量：4: 2013年; 目的了解2007-2011年青岛地区流行的H3N2流感病毒的全基因组进化特征。方法选取2007--2011年青岛地区流行的H3N2流感病毒58株，提取病毒RNA，应用RT—PCR扩增各基因片段，并进行序列测定；用Sequencher软件完成序列拼接。选取GenBank收录的全球同期氨基酸数大于300的H3N2流感病毒589株，以其血凝素重链区（HAl）序列作为参照，用Mega5．0软件对各基因片段进行系统发育分析及分子特征分析。结果2007--2011年青岛地区流行的H3N2流感病毒血凝素（HA）基因在进化树上形成单一主干，每一流行季毒株的起源均晚于上一季；全基因组进化分析发现，2009--2010流行季存在重配病毒株，而2010—2011流行季同时存在簇Ⅰ和簇Ⅱ两系毒株流行，该季病毒呈现复杂的重配现象。病毒HA1蛋白与疫苗株比较，2007--2011年各监测季分别有8、6、6、8、11处氨基酸变异，涉及13个抗原位点。M2蛋白氨基酸序列分析表明，分离到的H3N2流感病毒31位氨基酸均发生丝氨酸→天冬酰胺（$31N）突变。2007--2011年青岛地区分离的H3N2流感病毒HA1基因在进化树上与全球同期H3N2流感毒株处于同一主要分支。序列比对及抗原性分析显示，毒株A／Qingdao／F521／2011存在H3N2与甲型H1N1流感病毒共感染现象。结论2007—2011年青岛地区流行的H3N2流感病毒各基因片段呈现复杂的进化特征。; 汪照国杨婷婷柴青刘晓琳弋英杨宇于萍王志玉; 关键词：流感病毒A型基因组抗原变异进化

2011-2014年青岛地区甲型H3N2流感病毒基因进化分析被引量：3: 2015年; 目的了解2011-2014年青岛地区人群甲型H3N2流感病毒流行株基因进化及抗原变异趋势.方法选取2011-2014年间青岛地区流行的甲型H3N2流感病毒64株,提取病毒RNA,应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）扩增HA、NA、MP 3个基因片段,并进行序列测定,对各基因片段进行系统发育分析及基因和氨基酸位点变异分析.结果 HA进化树分析表明,甲型H3N2流感病毒基本上分为三大分支,并且每个分支与当年的疫苗株都不在同一分支上;HA1蛋白抗原决定簇共有8个位点发生了变化;NA蛋白酶活性中心及周围相关位点氨基酸组成保守,未检测到耐奥司他韦和扎那米韦的变异位点.M2蛋白均发生S31N突变.结论 2011-2014年青岛地区流行的H3N2流感病毒在持续不断地发生基因变异而产生抗原漂移;毒株全部为烷胺类药物耐药株,但对神经氨酸酶抑制剂敏感.; 赵丹柴青于萍马娜宫金伶史晓燕汪照国; 关键词：HA基因 NA基因

青岛地区2005—2011年流感病毒病原学监测分析被引量：7: 2012年; 目的对2005—2011年青岛地区流行的流感病毒进行监测分析,探讨其流行特征。方法采集哨点医院流感样病例的鼻咽拭子标本,采用MagNA Pure LC Total Nucleic Acid Isolation Kit提取病毒RNA,荧光RT-PCR方法筛检甲型和乙型流感病毒。核酸检测阳性标本接种狗肾传代细胞进行病毒分离,以红细胞凝集及凝集抑制试验对分离的病毒进行鉴定和分型。结果采集的2 560份鼻咽拭子标本中共分离到各型流感病毒245株,其中甲型191株,包括季节性甲型H1N1者47株,季节性甲型H3N2者66株,新甲型H1N1者78株;B型54株。2009—2010年连续出现2个夏季流感流行峰。结论 2005—2011年,甲型流感病毒是青岛地区流感主要流行型别,其总体流行趋势与全国基本一致;连续2年夏季流行峰的出现警示应加强北方地区夏季流感监测。; 杨婷婷杨宇刘晓琳于萍柴青汪照国王志玉; 关键词：正黏病毒科病原哨点监测

咽拭子标本对手足口病疫情监测的应用研究被引量：17: 2008年; [目的]明确致手足口病肠道病毒的主要型别,并对咽拭子标本的核酸检测结果进行评价。[方法]2007年收集青岛市5家医院手足口病患者的咽拭子152份,提取病毒RNA。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法对病毒RNA进行肠道通用引物及肠道病毒71(EV71)型和柯萨奇病毒16型(CoxA16)特异性引物的检测。[结果]152份咽拭子标本中,83份标本肠道通用引物扩增阳性,阳性率为54.61%。其中,EV71阳性10份,占肠道病毒的12.05%(10/83);CoxA16阳性者42份,占肠道病毒的50.60%(42/83)。[结论]手足口病疫情的病原主要以EV71和CoxA16为主,咽拭子标本在手足口病疫情的监测中具有方便、快捷的优点,而且检出率较高。; 汪照国刘晓琳于萍杨宇; 关键词：手足口病疫情监测咽拭子标本

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于萍

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