何丽丽
- 作品数：6 被引量：13H指数：2
- 供职机构：东北农业大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划黑龙江省重点科技攻关项目黑龙江省科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 犬细小病毒环介导等温扩增检测方法的建立被引量：2
- 2013年
- 根据GenBank中犬细小病毒(CPV)VP2基因序列,利用Primer Explorer V4软件设计并合成了针对CPV VP2基因序列保守区域的4条寡核苷酸片段(F3/B3,FIP/BIP)作为LAMP引物。以CPV DNA为模板,通过对LAMP反应温度和时间的优化以及特异性试验、敏感性试验和对临床样品的检测,建立了一种针对CPV VP2基因的LAMP快速检测方法。结果显示,该LAMP检测方法只对CPV有梯状扩增条带,对犬瘟热病毒(CDV)、狂犬病病毒(RV)和犬腺病毒Ⅱ型(CAV-Ⅱ)无扩增条带;对CPV的最低检出量为2.1×10-2 TCID50,其敏感性约为常规PCR检测方法(最低检出量为2.1TCID50)的100倍,是犬细小病毒抗原快速检测试纸(最低检出量为101.5 TCID50)的1 500倍。临床样品的LAMP检测结果与PCR检测结果的符合率为100%。
- 关玮琨何丽丽冯瑜菲朱颖刘文鑫江馗语胡文霞师东方
- 关键词：犬细小病毒环介导等温扩增
- 犬瘟热病毒LAMP检测方法建立及其串联表位卵黄抗体中和效力初步研究
- 犬瘟热(canine distemper，CD)是由犬瘟热病毒(canine distemper virus，CDV)引起的一种急性高度接触传染性病。近年来其自然感染宿主范围不断扩大，除了犬和毛皮动物外，还可以感染狮、虎...
- 何丽丽
- 关键词：犬瘟热病毒卵黄抗体
- 稳定表达犬瘟热病毒细胞受体SLAM的BHK-21/SLAM细胞系的建立被引量：5
- 2014年
- 为建立稳定表达犬瘟热病毒(CDV)受体,即信号淋巴细胞激活因子(SLAM)的BHK-21细胞系,本研究将重组表达质粒pDisplay-SLAM转染于BHK-21细胞,通过G418压力筛选并结合有限稀释法、免疫荧光、RT-PCR和western blot筛选出稳定表达SLAM的阳性细胞(BHK-21/SLAM)。病毒感染试验结果显示,CDV在BHK-21细胞中无细胞病变(CPE)产生,而感染BHK-21/SLAM细胞12 h后即可出现CPE;BHK-21/SLAM细胞培养物上清液中的CDV核酸含量于24 h达到最高值(107.9拷贝/μL),明显高于对照组BHK-21细胞培养物上清液中的核酸含量(106.28拷贝/μL)。研究结果表明,与BHK-21细胞相比较,CDV在BHK-21/SLAM细胞中的病毒核酸含量更高,并能够产生明显的CPE。该细胞系的建立在CDV的分离、生物学特性研究和疫苗毒生产等方面具有良好应用前景。
- 朱颖刘文鑫赵姝静李丹丹冯瑜菲关玮琨何丽丽江馗语师东方
- 关键词：犬瘟热病毒BHK-21
- 断奶仔猪对毒力基因缺失大肠杆菌的免疫应答
- 2011年
- 为研究猪水肿病大肠杆菌SLT-Ⅱe编码基因突变菌株作为口服疫苗的免疫效果,本实验用构建的突变菌株(O139/SLT-Ⅱe*/07)口服免疫断奶仔猪后,检测突变菌株在仔猪肠道的定植情况,仔猪血清及粪便中的特异性抗体和细胞因子水平,并进行了免疫保护效力评价。结果显示,免疫后21 d仍能在实验1组(微胶囊口服免疫)和2组(直接口服免疫)的仔猪粪便中检出突变菌株;从免疫后第7 d、14 d和21 d开始,在实验1组血清样品中可分别检测到抗SLT-ⅡeA蛋白、F18ab菌毛蛋白和O139抗原的IgG抗体(P/N>2);从免疫后第7 d、14 d开始,在粪便中可分别检测到抗SLT-ⅡeA蛋白、SLT-ⅡeB蛋白、O139抗原、F18ab菌毛蛋白的sIgA抗体(P/N>2);免疫仔猪血清中的INF-γ的含量升高;实验2组的血清特异性IgG水平和粪便中sIgA抗体水平比实验1组低;该突变菌株对仔猪具有免疫保护作用。研究结果表明该大肠杆菌基因突变株可作为仔猪水肿病口服疫苗的候选菌株。
- 胡文霞冯瑜菲何丽丽关玮琨江馗语师东方
- 关键词：猪水肿病大肠杆菌免疫应答
- 犬瘟热病毒N基因环介导等温扩增检测方法的建立被引量：1
- 2013年
- 为建立犬瘟热病毒(CDV)环介导等温扩增(LAMP)检测方法,本研究根据GenBank中CDVN基因保守序列设计合成了2对LAMP引物,内引物FIP、BIP和外引物F3、B3。以CDVN基因重组质粒(pMD-CDV-N)为模板,经反应条件优化、特异性试验、敏感性试验及临床样品检测。检测结果显示,该方法于61℃水浴60min即可完成反应,最低检出量为70个拷贝,比RT-PCR灵敏10倍。该检测方法仅对CDV产生阳性扩增,而对狂犬病毒,犬细小病毒,犬腺病毒Ⅱ型扩增结果均为阴性。用建立的LAMP方法检测临床样品,检测结果与RT-PCR检测结果一致。本方法简便,特异,有利于CDV的临床检测。
- 何丽丽关玮琨江馗语朱颖刘文鑫冯瑜菲胡文霞师东方
- 关键词：犬瘟热病毒N基因环介导等温扩增
- 产志贺毒素Ⅱ型变异体大肠杆菌LAMP检测方法的建立被引量：5
- 2011年
- 为建立产志贺毒素Ⅱ型变异体(Stx2e)大肠杆菌的环介导恒温扩增(LAMP)检测方法,参照Gen-Bank中12条Stx2e序列和9条Stx2序列,针对Stx2e基因保守区域设计并合成4条引物,分别进行了反应条件优化、特异性试验、敏感性试验及模拟样品检测。结果显示,用所建立的LAMP方法对阳性样品扩增所得产物电泳后呈特征性梯状条带,阴性样品的扩增产物电泳后均无扩增条带。建立的LAMP方法对Stx2e+大肠杆菌的最低检出量为38CFU/管,敏感性高于PCR方法(3.8×103CFU/管)。LAMP和PCR对模拟样品检测结果的符合率为100%。该研究为仔猪水肿病的诊断和Stx2e+大肠杆菌的快速检测提供了新的方法。
- 冯瑜菲朱颖刘文鑫江馗语何丽丽关玮琨胡文霞师东方
- 关键词：大肠杆菌猪水肿病
