吴敬君
- 作品数：15 被引量：10H指数：2
- 供职机构：清华大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划中国博士后科学基金北京市属高等学校人才强教计划资助项目更多>>
- 相关领域：生物学化学工程轻工技术与工程更多>>
- 精品硫酸软骨素A和C和制备精品硫酸软骨素A和C的方法
- 本发明涉及一种精品硫酸软骨素A和C和制备精品硫酸软骨素A和C的方法。其中制备精品硫酸软骨素A和C的方法包括：向含硫酸软骨素A和C成分的硫酸软骨素混合物的溶液中加入硫酸软骨素酶B，使其与含硫酸软骨素A和C的硫酸软骨素混合物...
- 邢新会吴敬君张翀
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- 控制生产低分子量肝素的方法
- 本文公开一种低分子量肝素或超低分子量肝素的生产方法。该方法利用选自肝素酶I、II和III中两种以上的肝素酶来降解肝素从而生产低分子量肝素或超低分子量肝素。
- 邢新会李晔吴敬君张翀冯权毕鲜荣
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- 硫酸软骨素酶B融合蛋白、其编码基因以及其构建方法
- 本文公开了一种硫酸软骨素酶B融合蛋白、其编码基因以及其构建方法。本文提供的硫酸软骨素酶B融合蛋白包括麦芽糖结合蛋白。此外本文还提供了一种纯化硫酸软骨素酶B融合蛋白的方法。另外，本文还涉及一种生产低分子量硫酸软骨素B的方法...
- 吴敬君李晔邢新会张翀
- 文献传递
- 硫酸软骨素酶B融合蛋白、其编码基因以及其构建方法
- 本文公开了一种硫酸软骨素酶B融合蛋白、其编码基因以及其构建方法。本文提供的硫酸软骨素酶B融合蛋白包括麦芽糖结合蛋白。此外本文还提供了一种纯化硫酸软骨素酶B融合蛋白的方法。另外，本文还涉及一种生产低分子量硫酸软骨素B的方法...
- 吴敬君李晔邢新会张翀
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- 精品硫酸软骨素A和C和制备精品硫酸软骨素A和C的方法
- 本发明涉及一种精品硫酸软骨素A和C和制备精品硫酸软骨素A和C的方法。其中制备精品硫酸软骨素A和C的方法包括：向含硫酸软骨素A和C成分的硫酸软骨素混合物的溶液中加入硫酸软骨素酶B，使其与含硫酸软骨素A和C的硫酸软骨素混合物...
- 邢新会吴敬君张翀
- 硫酸软骨素酶AC融合蛋白、其编码基因以及其构建方法
- 本文公开了一种硫酸软骨素酶AC融合蛋白、其编码基因以及其构建方法。本文提供的硫酸软骨素酶AC融合蛋白包括麦芽糖结合蛋白。此外本文还提供了纯化硫酸软骨素酶AC融合蛋白的方法。另外，本文还涉及一种生产低分子量硫酸软骨素A或C...
- 李晔吴敬君邢新会张翀
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- 硫酸软骨素酶AC融合蛋白、其编码基因以及其构建方法
- 本文公开了一种硫酸软骨素酶AC融合蛋白、其编码基因以及其构建方法。本文提供的硫酸软骨素酶AC融合蛋白包括麦芽糖结合蛋白。此外本文还提供了纯化硫酸软骨素酶AC融合蛋白的方法。另外，本文还涉及一种生产低分子量硫酸软骨素A或C...
- 李晔吴敬君邢新会张翀
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- 肝素黄杆菌硫酸软骨素酶AC的高效重组表达体系构建及其酶学性质研究被引量：4
- 2013年
- 为实现硫酸软骨素酶AC(chondroitinase AC,ChonAC)在大肠杆菌中高效表达,通过PCR方法从肝素黄杆菌(Pedobacter heparinus)中扩增得到ChonAC基因cslA,采用融合蛋白技术构建麦芽糖结合蛋白(maltose-bindingprotein,MBP)与ChonAC的融合表达载体(MBP-ChonAC),并在低温(15℃)条件下实现MBP-ChonAC的可溶活性表达,通过MBPTrap HP可实现一步纯化,使纯度可达95%以上,酶比活力可达94.1IU/mg融合蛋白(即相当于143.8IU/mgChonAC蛋白当量)。对MBP-ChonAC的酶学研究发现,其最佳催化pH值为7.5～8.0,最佳Ca2+浓度为20mmol/L,最适NaCl浓度为50mmol/L,最佳作用温度为20～35℃。MBP-ChonAC具有较好的热稳定性,在30℃时其半衰期可达8.3h。同时对其以硫酸软骨素A为底物的动力学常数测定发现,MBP-ChonAC相比ChonAC其Km稍有增大而催化常数kcat稍有降低,但是差别不大,表明MBP的融合没有对ChonAC的催化能力造成影响。通过宿主优化、诱导浓度优化及培养基优化进一步提高了MBP-ChonAC的表达量,其摇瓶培养酶活力就可达10800.5IU/L。
- 吴敬君李晔张翀李梅邢新会
- 关键词：酶学性质麦芽糖结合蛋白
- 精品肝素和制备精品肝素的方法
- 本文涉及一种精品肝素和制备精品肝素的方法。其中制备精品肝素的方法包括：将粗品肝素溶解到水中，制备肝素溶液，向肝素溶液中加入硫酸软骨素酶AC和/或硫酸软骨素酶B，与半乳糖胺杂质进行酶反应；除去肝素溶液中的硫酸软骨素酶AC和...
- 邢新会吴敬君张翀
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- MBP融合肝素酶Ⅲ大肠杆菌高效表达体系构建被引量：4
- 2014年
- 肝素酶Ⅲ(heparinase III,HepC)是一种重要的多糖裂解酶,在抗癌药物开发、低分子量肝素生产以及肝素类药物的质量控制等方面具有重要的作用。目前制约其工业应用前景的主要技术瓶颈是生产成本高,异源重组表达效果差,缺乏高效的表达方法。本研究借鉴前期经验,通过HepC基因的密码子优化,并与麦芽糖结合蛋白(maltose-binding protein,MBP)融合,构建了MBP-coHepC(基因密码子优化后的蛋白为coHepC)的大肠杆菌表达体系,结合培养条件优化大幅度提高了HepC的可溶表达比例,其摇瓶发酵总酶活值达到7603.46 IU·L?1;同时,本研究从转录和翻译水平揭示了HepC表达效果提高的可能原因。这些研究为肝素酶III的应用发展提供了基础。
- 苏楠吴敬君李晔张翀李梅邢新会
- 关键词：麦芽糖结合蛋白融合蛋白大肠杆菌
