栾明明
- 作品数：2 被引量：6H指数：1
- 供职机构：浙江大学化学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学理学更多>>
- 多次循环离子交换色谱纯化Cry1Ab蛋白及其肽质量谱图的分析被引量：1
- 2007年
- 采用Q-Sepharose FF离子交换柱对初步纯化的Cry1Ab杀虫蛋白样品进行了多次循环精细纯化,洗脱模式为离子强度台阶梯度,流动相为Tris-HCl缓冲液加NaCl,盐浓度从0.1 mol.L-1变化到1.0 mol.L-1.结果表明,Cry1Ab蛋白在NaCl浓度为0.4 mol.L-1时从柱上被洗脱,并与杂蛋白很好地分离.色谱分离机制符合顶替色谱机制.经3次循环分离后可获得高纯度的Cry1Ab蛋白.用SDS-PAGE分析了蛋白的纯度及表观分子量,电泳胶上分离的蛋白进行原位酶切后,用基质辅助激光解析-飞行时间质谱对纯化蛋白进行肽质量谱的分析,Mascot数据库搜索结果确证了该纯化蛋白酶解肽段80%符合已知的Cry1Ab蛋白特征肽段.
- 栾明明邬建敏叶庆富
- 关键词：离子交换色谱
- 溶胶凝胶膜包埋的胰蛋白酶用于高通量蛋白质肽谱分析被引量：5
- 2006年
- 采用溶胶凝胶包埋法在96孔板中固定胰蛋白酶,制备高通量的酶解反应器。考察了四乙氧基硅烷(TEOS)与甲基三甲氧基硅烷(MTMS)的不同比例对凝胶膜的成胶速度、机械强度、透明度、固定酶的活性及稳定性的影响。以牛血清白蛋白(BSA)为目标蛋白,比较了溶胶凝胶固定化酶与溶液态酶的稳定性和催化活性,用HPLC对BSA的酶解产物进行了肽谱分析,比较了二者的酶解效率。结果表明,TEOS与MTMS比例为1∶1时,凝胶膜有很好的成胶速度、机械强度、透明度;包埋态酶有很高的活性和稳定性。HPLC对肽段的分析结果表明,固定化酶的酶解效率优于溶液态酶。
- 栾明明邬建敏
- 关键词：溶胶凝胶固定化胰蛋白酶
