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鹅圆环病毒感染性克隆的构建及其转染试验: 鹅圆环病毒/(goose circovirus, GoCV/)是近年来发现的圆环病毒科的一个新成员。由于它通常侵染淋巴细胞等增殖速度快的细胞,引起免疫力下降,导致动物容易继发感染其他病原,从而给养禽业造成不可忽视的经济损...; 田敬; 关键词：感染性克隆转染实时荧光定量PCR; 文献传递

鹅圆环病毒竞争PCR检测方法的建立被引量：3: 2013年; 建立了基层临床定量检测鹅圆环病毒DNA的竞争PCR方法。以含有鹅圆环病毒(GoCV)全长基因组的pMDT-GoCV-yk01质粒为模板,PCR扩增出长度为625 bp的片段,克隆到pGEM-T Easy载体,获得目标模板,命名为pGoCV625-T;同时,构建与目标模板DNA有相同引物结合区、扩增片段长度为300 bp的竞争模板,克隆于pMD18-T,获得竞争模板,命名为pGoCV300-T。用定量竞争模板pGoCV300-T与系列倍比稀释的定量目标模板pGoCV625-T进行竞争PCR扩增,利用二者PCR产物的荧光强度(IOD)比值与目标模板浓度对数值间的关联性建立标准竞争曲线,推算出直线回归方程,建立GoCV竞争PCR方法。结果表明,竞争模板与目标模板共扩增的最低检测限为1.0μl1.0×104拷贝。初步应用试验结果表明,该方法可定量检测GoCV阳性鹅法氏囊组织中的GoCV DNA。; 林蕾袁海霞田敬郭婧刘晓宁孙红霞余旭平

鹅圆环病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：7: 2010年; 为建立鹅圆环病毒(GoCV)快速检测方法,本研究根据GenBank中登录的GoCV全长基因组序列,在其保守基因区设计并合成1对引物,采用荧光嵌合法(SYBR GreenⅠ)建立检测GoCV的实时荧光定量PCR(real-time PCR)方法。以本实验室构建的含有GoCV永康株(GoCV-yk01)全长基因组的重组质粒为标准模板,经退火温度、循环次数等反应条件的优化,绘制GoCV real-time PCR的标准曲线,并进行融解曲线分析。试验结果表明:建立的GoCV real-time PCR方法特异性强,检测范围广(Ct值范围12～32),最低检出病毒拷贝数为1.46×102。该方法能够对组织中病毒进行定量检测,为快速检测GoCV提供了有效的技术手段。; 田敬郭婧孙红霞袁海霞陈维虎余旭平; 关键词：实时荧光定量PCR

鹅圆环病毒感染性克隆的构建及其转染试验被引量：4: 2012年; 设计带BamHⅠ酶切标记位点的引物,PCR扩增鹅圆环病毒(Goose circovirus,GoCV)全长基因组,将2个基因组顺式连接插入到pGEM-T Easy载体中,获得GoCV全长基因组头尾串联二聚体感染性克隆质粒pGEMT-2GoCV。EcoRⅠ酶切线性化pGEMT-2GoCV,与脂质体混合转染GoCV阴性鹅胚和雏鹅,常规PCR检测发现GoCV在转染鹅体内增殖,鹅胚转染组于孵出第2周和第4周检出血清阳性,且其中一个个体于4周龄扑杀时检出法氏囊阳性,雏鹅转染组于转染后2周检出血清阳性。试验进一步对扩增片段进行了BamHⅠ标记位点的检测,并应用GoCV实时荧光定量PCR方法对转染阳性样品进行了定量,结果显示阳性法氏囊组织中病毒含量为1.57×106拷贝/mg,阳性血清含病毒拷贝数在3.52×104～5.92×105拷贝/μL。综上,本试验构建的GoCV全长基因组头尾串联二聚体感染性克隆DNA可以转染鹅胚和雏鹅并增殖出带标记的GoCV克隆。; 徐雅萍田敬袁海霞郭婧孙红霞栗文文陈维虎余旭平; 关键词：感染性克隆转染

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田敬