狄静芳
- 作品数：6 被引量：8H指数：2
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- 相关领域：生物学化学工程更多>>
- 具有抗血小板聚集功能的新型葡激酶突变体的表达、纯化及性质被引量：5
- 2008年
- 【目的】为解决溶栓后再栓塞问题,构建N-端含RGD(Arg-Gly-Asp)序列的葡激酶双功能突变体。研究突变体的表达和纯化,并进行性质分析。【方法】将突变后的葡激酶突变体序列连入pBV220质粒,转化大肠杆菌BL21进行表达。阳离子交换、凝胶过滤和阴离子交换三步层析法纯化表达产物,采用溶圈法对纯化产物进行生物学活性测定,并测定纯化产物对血小板聚集的抑制效应。【结果】PAGE扫描结果显示,葡激酶突变体蛋白在大肠杆菌BL21中的表达量约占菌体蛋白总量的40%～50%;三步层析纯化后,HPLC测定其纯度可达95%。酪蛋白凝胶板溶圈法测得其比活性分别为10.8×104和11.0×104HU/mg,与野生型葡激酶活性相当;且具有明显的抗血小板聚集活性,血小板聚集仪测定其血小板聚集抑制率分别为10.72%和19.71%,明显高于野生型葡激酶血小板聚集抑制率。本实验利用pBV220载体高效表达了葡激酶突变体基因,得到了高纯度、高活性的突变体蛋白,为葡激酶生产产业化和临床应用奠定了良好的基础。
- 狄静芳贺进田徐瑞光陈希赵宝华
- 关键词：葡激酶RGD抗血小板聚集
- 具有抗血小板聚集和纤溶活性的双功能葡激酶突变体、应用及其制备方法
- 本发明公开了一种具有抗血小板聚集和纤溶活性的葡激酶突变体。利用PCR反应的定点突变技术，改变野生型Sak的N末端1～10位氨基酸序列，将RGD序列引入Sak的N末端1～10位氨基酸序列内部，将野生型Sak N末端肽链S<...
- 贺进田徐瑞光狄静芳
- 文献传递
- 重组葡激酶突变体K35R纯化过程中宿主菌菌体蛋白残余量的免疫分析被引量：1
- 2006年
- 葡激酶突变体K35R（DGR）是双功能葡激酶突变体，是正在开发的治疗血栓性疾病的新药．为检测DGR纯化过程中宿主菌菌体蛋白的残留，建立了宿主菌菌体蛋白的免疫分析方法．用所制备的宿主菌菌体蛋白免疫新西兰兔，得到菌体蛋白的抗血清。使用SDS—PAGE和基于抗血清的免疫印迹方法检测DGR纯化过程中菌体蛋白的去除．进一步建立了对宿主菌菌体蛋白灵敏的酶联免疫吸附测定（ELISA）方法，其检测线性范围是5-100μg/L，并用ELISA法定量测定了纯化过程中中间产物和纯化产品中菌体蛋白的含量．
- 贺进田王改珍狄静芳徐瑞光宋后燕
- 关键词：葡激酶酶联免疫吸附测定
- N-端引入RGD序列的葡激酶突变体的构建、表达、纯化及性质研究
- 血栓性疾病特别是脑血栓、心肌梗塞、深度静脉血栓等均有较高的致死、致残率，溶栓治疗法是治疗此类疾病的常规疗法。自从二十世纪八十年代以来，已先后开发了多种溶栓制剂，现已被广泛应用于临床，例如：重组组织型纤溶酶原(recomb...
- 狄静芳
- 关键词：RGD序列突变体葡激酶
- 文献传递
- N-末端引入RGD序列的葡激酶突变体表达、纯化及性质研究被引量：2
- 2009年
- 为解决葡激酶存在的溶栓后再栓塞问题，利用PCR介导的定点突变技术，在野生型葡激酶（wt-SAK）N-末端的第3、4位氨基酸之间插入Arg-Gly-Asp（RGD）序列构建了葡激酶突变体MD2-SAK，另将N-末端的前3位氨基酸替换为RGD序列构建了葡激酶突变体MD4-SAK。将突变体基因分别连接表达载体pBV220，转化大肠杆菌DH5α，经过热激诱导后，突变体均以可溶性形式得到高效表达，表达蛋白占菌体总蛋白的50％以上。破菌上清液通过SP-Sepharose FF、Sephadex G-50和Q-Sepharose FF三步连续的色谱层析纯化得到纤溶活性分别为10．1×10^4AU／mg、11．2×10^4AU／mg，纯度均大于96％的突变体蛋白。进一步研究了突变体的性质，结果表明葡激酶突变体不仅保留了野生型葡激酶的纤溶酶原激活活性，并具有较强的抗血小板聚集活性。同时发现，葡激酶突变体的N-末端序列会影响其N-末端甲硫氨酸的酶切加工。
- 狄静芳贺进田徐瑞光陈希赵宝华
- 关键词：葡激酶
- 具有抗血小板聚集和纤溶活性的双功能葡激酶突变体、应用及其制备方法
- 本发明公开了一种具有抗血小板聚集和纤溶活性的葡激酶突变体。利用PCR反应的定点突变技术，改变野生型Sak的N末端1～10位氨基酸序列，将RGD序列引入Sak的N末端1～10位氨基酸序列内部，将野生型Sak N末端肽链S<...
- 贺进田徐瑞光狄静芳
- 文献传递
