陈洪章
- 作品数：13 被引量：43H指数：5
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- 抗志贺毒素ⅡB亚基（Stx2B）单抗的研制及其亲和层析的应用
- 肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7是一种重要的新发人畜共患传染病病原菌。自1975年被首次分离、1982年被确认为致病菌以来的近30年中，世界各地包括中国都有不同规模的暴发流行。EHECO157:H7感染可使人产...
- 陈洪章
- 关键词：大肠杆菌志贺毒素特异性抗体
- 文献传递
- 肠出血性大肠杆菌O157：H7志贺毒素ⅡA1亚单位单克隆抗体的制备和生物学特性鉴定被引量：4
- 2008年
- 目的制备出高效价的抗志贺毒素ⅡA1亚单位(STX2A1)的单克隆抗体。方法以重组GST-STX2A1融合蛋白作为免疫抗原,免疫BALB/c小鼠,运用细胞杂交瘤技术制备,以天然STX2毒素为筛选抗原,采用间接ELISA法筛选产生针对STX2A1的单克隆抗体细胞株;以体内诱生法产生腹水,并采用Protein A-Sepharose柱对其纯化,快速定性试纸鉴定McAb的Ig亚类,采用间接ELISA相加实验鉴定抗原识别表位。结果获得3株产生针对STX2A1的单克隆抗体细胞株STX2-1A3、STX2-1E10、STX2-3A7,Ig亚类分别为IgG1λ型、IgG1κ型和IgG3κ,亲和力常数分别为5.76×109、1.21×109和3.97×108。结论成功制备3株稳定分泌抗STX2A1的杂交瘤细胞株,产生的单克隆抗体特异性好,亲和力高,能与天然STX2A亚单位反应。
- 罗萍陈洪章曾明郭鹰张卫军毛旭虎刘璐曾浩邹全明
- 关键词：O157:H7单克隆抗体生物学特性
- EHEC O157∶H7志贺毒素ⅡA1亚单位蛋白的构建表达与免疫原性鉴定被引量：7
- 2008年
- 目的构建表达GST-STX2A1融合蛋白并鉴定其免疫原性。方法通过PCR反应从EHEC O157∶H7EDL933标准株菌中扩增STX2A1基因,将此基因克隆到GST融合蛋白原核表达载体PGEX-6p-1,得到阳性克隆PGEX-6p-1/STX2A1,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导GST-STX2A1融合蛋白的表达,采用亲和层析纯化该蛋白,SDS-PAGE分析其表达量、表达形式和纯度;用纯化的融合蛋白免疫Balb/c小鼠,免疫双向扩散鉴定抗血清效价,Western blotting鉴定抗血清的特异性。结果成功构建重组质粒PGEX-6p-1/STX2A1,经DNA测序证实插入序列与设计完全一致,并在大肠杆菌中表达出Mr约为5.3×104大小的可溶性目的蛋白,经亲和层析纯化后纯度可达90%,免疫Balb/c小鼠产生的抗血清效价为1∶16,Western blotting表明可与天然STX2A蛋白反应。结论在大肠杆菌中成功表达了可溶性的GST-STX2A1融合蛋白,该蛋白具有较好的免疫原性,为O157∶H7亚单位疫苗及制备抗STX2A1的单克隆抗体提供了必要的物质基础。
- 罗萍曾浩易勇张卫军郭鹰刘璐陈洪章邹全明
- 关键词：免疫原性
- 抗肠出血性大肠杆菌O157:H7 EspA单克隆抗体的制备及其特性鉴定被引量：8
- 2007年
- 目的:制备抗肠出血性大肠杆菌O157:H7EspA单克隆抗体(mAb)。方法:以重组EspA蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术并且联合间接ELISA筛选只针对EspA的杂交瘤细胞株。以Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定mAb的Ig亚类,ELISA、Western blot及免疫荧光技术鉴定抗体的免疫学特性。结果:获得3株稳定分泌抗EspA杂交瘤细胞的mAb,Ig亚型分别为IgG1κ型、IgG2aκ型、IgG2bκ型。Western blot和免疫荧光分析表明,3株杂交瘤细胞制备的mAb腹水都能特异地结合重组EspA蛋白和识别O157:H7的EspA成分。结论:成功地制备了抗肠出血性大肠杆菌O157:H7EspA的mAb,并证明了该mAb的生物学活性,为深入研究肠出血性大肠杆菌O157:H7的致病机制提供新的手段。
- 余抒罗萍陈洪章李海侠毛旭虎
- 关键词：单克隆抗体
- 抗重组志贺样毒素ⅡA亚单位单链抗体的构建及表达被引量：3
- 2006年
- 目的构建重组志贺样毒素ⅡA亚单位(SLT2A)单链抗体基因(scFv),并在大肠杆菌中进行分泌表达。方法通过连接肽(Gly4Ser)3将已成功扩增的抗SLT2A单克隆抗体(mAb)5F3的VL和VH连接成scFv基因VHLinkerVL,并在VH基因5′端和VL基因3′端引入SfiⅠ和NotⅠ的酶切位点,克隆至经改造的分泌性表达载体pCANTAB6His中,转化EcoliHB2151,IPTG诱导表达。表达产物经亲和层析纯化后,SDSPAGE和Westernblot分析鉴定。结果经限制性酶切鉴定及DNA测序分析证实,基因构建正确。SDSPAGE和Westernblot分析表明scFv基因在大肠杆菌中得到表达,表达产物的相对分子质量为27000,与理论预期值相符,且可与相应抗原特异结合。结论成功地实现了抗SLT2AscFv基因的原核分泌表达,为探讨O157菌感染的机制及防治研究奠定了基础。
- 毛旭虎马颖陈洪章邹全明
- 关键词：志贺样毒素单链抗体分泌表达
- 抗重组志贺毒素ⅡB亚基单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定被引量：5
- 2007年
- 目的制备出高效价的抗重组志贺毒素ⅡB亚基(rStx2B)单克隆抗体。方法以融合蛋白EspA-Stx2B作为抗原,免疫Balb/c小鼠,以未免疫的Balb/c小鼠脾细胞为饲养细胞;运用细胞杂交瘤技术制备,运用间接ELISA法筛选产生针对rStx2B的单克隆抗体细胞株;体内诱生法产生腹水,饱和硫酸铵沉淀法初步纯化,再采用HiTraprProteinA柱进一步纯化,快速定性试纸鉴定McAb的Ig亚型,采用间接ELISA法相加实验鉴定抗原识别表位。结果获得3株产生针对rStx2B的单克隆抗体细胞株Stx2B-1H9、Stx2B-1H10、Stx2B-3E5,Ig亚型分别为IgG1κ型,IgG2aκ型,IgG2bκ型,亲和力常数分别为7.36×108、6.94×108、5.85×108。结论成功制备3株稳定分泌抗rStx2B的杂交瘤细胞株,产生的McAb特异性好,亲和力高,为应用这些单克隆抗体建立免疫亲和层析法纯化天然志贺毒素Ⅱ,鉴定Stx2B的表位,研究针对EHECO157:H7感染的治疗性抗体奠定了基础。
- 陈洪章邹全明罗萍毛旭虎曾浩马颖余抒曾明
- 关键词：单克隆抗体生物学特性
- 幽门螺杆菌尿素酶B亚单位B细胞抗原表位多肽及鉴定方法与应用
- 本发明提供了一个来自幽门螺杆菌尿素酶B亚单位的中和性B细胞抗原表位多肽及其鉴定方法，确定了抗幽门螺杆菌尿素酶B亚单位单克隆抗体6E6所对应的抗原表位，并且证实此B细胞表位为单克隆抗体6E6所识别的特异性抗原表位；本发明还...
- 毛旭虎邹全明李海侠吴亚男石云罗萍张卫军余抒陈洪章郭刚童文德吴超周维英鲁东水刘开云
- 文献传递
- 幽门螺杆菌尿素酶B亚单位B细胞抗原表位多肽与应用
- 本发明提供了一个来自幽门螺杆菌尿素酶B亚单位B细胞抗原表位多肽与应用，确定了抗幽门螺杆菌尿素酶B亚单位单克隆抗体6E6所对应的抗原表位，并且证实此B细胞表位为单克隆抗体6E6所识别的特异性抗原表位；本发明还提供了包含此B...
- 毛旭虎邹全明李海侠吴亚男石云罗萍张卫军余抒陈洪章郭刚童文德吴超周维英鲁东水刘开云
- 文献传递
- 抗幽门螺旋杆菌尿素酶B亚单位(UreB)单克隆抗体抗原识别表位的初步鉴定被引量：6
- 2007年
- 目的初步确定抗幽门螺杆菌尿素酶B亚单位(UreB)单克隆抗体(mAb)6E6识别的抗原表位。方法采用截短法分段构建含UreB抗原的重组质粒,分别命名为U12,U13,U15,U16,U47。用IPTG诱导表达融合蛋白。对表达产物进行SDS-PAGE蛋白电泳及Westernblot分析。结果6E6能够分别识别1～300位氨基酸的U12片段,1～260位氨基酸的U16片段,1～230位氨基酸的U15片段,而不能识别1～200位氨基酸的U13片段和251～389位氨基酸的U47片段。结论mAb6E6抗体识别的抗原表位位于200～230位氨基酸。
- 李海侠吴亚男王宪灵张卫军罗平余抒陈洪章毛旭虎
- 关键词：抗原表位
- 肠出血性大肠杆菌O157∶H7 LexA蛋白的表达、纯化及鉴定
- 2008年
- 目的对EHEC O157∶H7 LexA进行表达、纯化,并检测其免疫活性。方法lexA基因片段插入表达载体pET22b(+),在E.coliBL21(DE3)中表达。包涵体经洗涤并用8 mol/L尿素溶解,Heparin Agrose亲合柱层析为第一步纯化,Superdex75凝胶过滤层析作为第二步精细纯化,HPLC测定LexA蛋白的浓度,将纯化的LexA蛋白经注射途径免疫家兔,制备兔抗lexA血清,采用免疫双扩、ELISA及Western blot分析LexA的免疫活性。结果lexA以包涵体形式表达,表达产量高达总菌体蛋白的40%左右,经Heparin Agrose亲合柱层析和凝胶过滤层析两步组合纯化目的蛋白,经HPLC测定目的蛋白的最终纯度为98%,表达及纯化的lexA具有良好的免疫活性。结论在E.coliBL21(DE3)中表达的LexA蛋白具有良好的免疫活性。
- 沙建平邹全明张卫军杨珺毛旭虎郭刚罗萍刘开云陈洪章
- 关键词：LEXA纯化免疫活性
