董金蓉
- 作品数：7 被引量：12H指数：2
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- 人乳头瘤病毒16L1抗血清的制备和鉴定
- 2007年
- 人乳头瘤病毒16型是导致宫颈癌发生的主要因素,其晚期蛋白L1在体内或体外可自组装形成VLP颗粒.作者构建了DNA疫苗载体pDRVI1.0-16L1,大提质粒后免疫BalB/C小鼠制备抗体,并对抗体进行了特异性鉴定,为HPV16L1预防性疫苗的进一步研究和应用奠定了基础.
- 董金蓉谢飞刘勇郭仁彭建新刘红岩
- 关键词：抗血清
- 人巨细胞病毒gB/AD1基因在CHO细胞中的表达和纯化被引量：1
- 2015年
- 人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)在自然界中普遍存在,g B是该病毒表面的一种重要糖蛋白,其AD1序列是主要的中和抗体表位之一。首先以HCMV基因组为模板,通过PCR技术扩增出g B基因的一个片段,该片段删除了跨膜区和胞内区,仅保留AD1中和抗体表位,然后被连接到哺乳动物细胞表达质粒p SGHV0上,与dhfr基因通过电击转染至CHO/dhfr-细胞,继而用60 nmol/L MTX筛选稳定表达细胞株,用ELISA和Western blot检测AD1重组蛋白的表达,最后用Ni2+-NTA亲和层析进行纯化。获得了真核细胞表达的重组融合蛋白,表达量约为10 mg/L,蛋白纯度可达到80%以上,为HCMV表面糖蛋白g B功能的进一步研究以及基因工程疫苗的开发奠定了基础。
- 董金蓉毛树宝谢震渊沈谊清吴金妍罗剑方芳
- 关键词：CHO细胞纯化
- HPV18晚期蛋白L1在毕赤酵母菌中的表达及鉴定被引量：2
- 2007年
- 目的:用毕赤酵母胞内表达载体构建含人乳头瘤病毒18型(HPV18)L1基因质粒,诱导表达并进行鉴定。方法:按照毕赤酵母密码子偏爱性原则,合成全长L1基因,然后克隆到pAO819表达载体上,在体外分别构建含一个拷贝和二个拷贝的L1基因载体。线形化后转化到GS115酵母细胞,经G418抗性筛选,获高拷贝重组子并经甲醇诱导表达,表达产物采用化学发光Western blot鉴定,一抗为抗HPV18L1蛋白鼠抗血清。结果:在55kDa处有诱导蛋白免疫印迹出现,并在电镜下观察到HPV18的病毒样颗粒(VLPs),证明该表达系统能表达出HPV18 L1蛋白。结论:本实验构建的毕赤酵母表达菌株,可经甲醇诱导表达HPV18L1晚期蛋白,为进一步研制人乳头瘤病毒18型基因工程疫苗打下基础。
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- 关键词：毕赤酵母
- 经基因优化的HPV16L1蛋白在毕赤酵母中的表达被引量：4
- 2007年
- 目的利用毕赤酵母表达系统(Pichia pastoris)高效表达HPV16L1蛋白。方法按照Pichia pastoris密码子偏爱性合成HPV16L1基因,构建pAO819r-16L1表达载体,电转化至GS115菌株中,经MD板和不同浓度G418筛选,挑取高拷贝整合菌株,甲醇诱导目的蛋白的表达,用HPV16L1抗血清,经Western blot检测蛋白的特异性。结果重组质粒pAO819r-16L1在甲醇营养型酵母菌株中经甲醇诱导后可表达HPV16L1蛋白,在试管中的表达量超过10mg/ml,经Western blot验证,该蛋白可与抗血清特异结合,在相对分子质量55000附近出现目的条带,证明该蛋白确为HPV16L1蛋白。结论利用毕赤酵母表达系统可高效表达HPV16L1蛋白,为研制HPV疫苗奠定基础。
- 董金蓉谢飞刘勇郭仁彭建新刘红岩
- 关键词：人乳头瘤病毒L1蛋白毕赤酵母
- 人乳头瘤病毒16型晚期蛋白L1预防性疫苗的研究
- 人乳头瘤病毒/(HPV/)感染属于严重的性传播疾病，给人类健康带来很大的影响，临床学、分子生物学和流行病学调查已经证明人乳头瘤病毒是宫颈癌的主要病因，并且随着科学技术的快速发展，分子生物学和基因工程技术的应用不断进步，预...
- 董金蓉
- 关键词：人乳头瘤病毒毕赤酵母VLP抗血清
- 文献传递
- 人乳头瘤病毒的病原免疫学及其疫苗的研究进展被引量：3
- 2007年
- 人乳头瘤病毒(HPV)广泛存在自然界,本文就HPV的致病机理,免疫机理和目前国内外该疫苗的研究进展等方面作一简要综述。
- 董金蓉谢飞彭建新刘红岩
- 关键词：HPV致病免疫疫苗
- 检测抗水痘-带状疱疹病毒抗体的糖蛋白ELISA的建立和初步验证被引量：2
- 2016年
- 目的 建立抗水痘-带状疱疹病毒（varicella zoster virus,VZV）抗体的VZV糖蛋白（glycoprotein,gp） ELISA（VZVgp ELISA）,提高抗VZV抗体的检测灵敏度.方法 将收获的VZV进行超声破碎和亲和层析,得到纯化的VZVgp.以VZVgp作为包被抗原,用筛选的高滴度抗VZV抗体阳性血清摸索ELISA的相关条件来建立VZVgp ELISA,并验证该法的特异性、精密度和灵敏度.同时将建立的VZVgp ELISA与同类进口试剂盒进行比较.结果 成功建立了检测抗VZV抗体的VZVgp ELISA,该法特异性强、精密度好（变异系数＜10％）、灵敏度高,与国外同类试剂盒检测结果间的差异无统计学意义（x2=1.310,P=0.252）.结论 建立的VZVgp ELISA特异、灵敏,可用于人群血清抗VZV抗体的筛查和VZV感染的流行病学调查.
- 董金蓉易应磊刘芬陈则
- 关键词：糖蛋白类
