孙蕾 作品数:16 被引量:62 H指数:5 供职机构: 郑州大学附属郑州中心医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 河南省科技攻关计划 国家科技重大专项 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
抑制HIF-1α表达的siRNA序列长效shRNA抑制载体的构建 被引量:1 2011年 目的:设计特异抑制缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白诱导表达的小干扰RNA(siRNA)序列,并构建能长效抑制HIF-1α基因表达的HIF-1α的短发夹siRNA(shRNA)表达载体。方法:依据NCBI数据库获得HIF-1αmR-NA序列,利用Whitehouse、SiDirect和Rationalsi RNA Design软件及Blast设计和优化siRNA序列;将siRNA序列转换成编码shRNA的DNA序列后克隆入pENTRTM/H1/TO载体,测序鉴定;将重组质粒pENTRTM/H1/TOHIF-1α转染食管上皮细胞Het-1A(实验组),并设阴性对照(转染阴性对照序列)、空白对照组和诱导对照组。实验、阴性对照和诱导对照组细胞经CoCl2化学诱导。Western blot法检测4组HIF-1α蛋白的表达。结果:以优化改造的含29核苷酸的干扰序列构建shRNA表达载体,经测序鉴定无误。4组细胞HIF-1α蛋白表达比较,差异有统计学意义(F=66.863,P<0.001)。实验组Het-1A细胞HIF-1α蛋白表达较诱导对照和阴性对照组明显下降。结论:成功构建了HIF-1αshRNA表达载体。 郭欢 孙蕾 汲翔 康巧珍 程道博 张聚真 赵立群 杨观瑞 汲振余关键词:缺氧诱导因子-1Α 小干扰RNA 短发夹RNA 蛋白4.1R基因敲除小鼠的引种及繁殖 被引量:1 2011年 目的:引种、繁殖4.1R基因敲除小鼠,用于蛋白4.1R功能的研究。方法:按照国家进出境动物检验检疫的具体要求,对引种自美国的3对4.1R基因敲除小鼠进行隔离、检疫。引进的种鼠按照SPF动物饲养标准操作规程在IVC屏障系统中进行1雄1雌长期同居方式繁殖,C57BL/6J对照组小鼠采用同样方式饲养繁殖。定期观察记录种鼠的繁殖率、仔鼠出生率及成活率。比较基因敲除小鼠与野生型小鼠体质量变化。提取仔鼠尾组织基因组DNA,用PCR法进行基因型鉴定。结果:经隔离检疫,3对4.1R敲除小鼠符合我国SPF小鼠的微生物控制级别。23只繁殖仔鼠基因型PCR鉴定结果为基因敲除纯合子,雌鼠产仔率100%,平均胎产仔5.8只,仔鼠成活率74%。基因敲除小鼠平均体质量与野生型小鼠比较差异无统计学意义(F组间=4.035,P=0.056;F时间=543.723,P<0.001;F交互=4.358,P=0.004)。结论:在国内成功引种和繁殖C57BL/6J-4.1R-/-小鼠。 周晴晴 闫红霞 孙蕾 刘喜龙 李黎 汲翔 高艳锋 汲振余 祁元明 康巧珍关键词:基因敲除小鼠 跨行政隶属关系的区域医疗联合体模式 被引量:13 2014年 区域医疗联合体的成立,不仅在一定程度上解决了医疗机构发展的难题,而且在合理应用区域内医疗资源,达到区域内医疗资源共享方面创新出了一条适合本区域各级医疗机构协同发展的路子。通过介绍郑州大学附属郑州中心医院跨行政隶属关系的区域医疗联合体模式的发展历程,对我国不同医疗联合体合作模式进行探讨,探索公立医院改革的多元化发展方向。 郝义彬 魏海英 刘敏 张健 孙蕾关键词:公立医院改革 医疗资源 高效抗逆转录病毒疗法(HAART)对HIV/AIDS患者免疫功能的影响 被引量:11 2008年 目的评价高效抗逆转录病毒疗法(highly active antiretroviral therapy,HAART)对HIV/AIDS患者的疗效。方法采用HAART治疗73例HIV/AIDS患者,流式细胞仪测定治疗前后HIV/AIDS患者体内CD4+,CD8+T淋巴细胞数量,定量ELISA法检测血浆细胞因子IL-2,IL-10和TGF-β1水平。结果经HAART治疗后,CD4+T细胞数量显著回升(P(0.01),但CD8+T细胞变化不大(P(0.05)。血浆IL-10水平较治疗前明显下降(P(0.05),IL-2水平较治疗前升高(P(0.05),TGF-β1的水平显著降低(P(0.01)。结论HAART治疗HIV/AIDS患者疗效显著,对于重建免疫功能、改善体内细胞因子失调有明显效果。 杨璇 李倩如 孙蕾 杜英 董子明 张世玺 徐立然关键词:HIV/AIDS 高效抗逆转录病毒疗法 白细胞介素-10 白细胞介素-2 蒺藜防白丸对体外培养黑素细胞生物学特性的影响 被引量:3 2016年 目的研究蒺藜防白丸对黑素细胞(melanocytes,MC)的形态、增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成的影响。方法采用倒置显微镜观察细胞形态,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定蒺藜防白丸对黑素细胞增殖的影响,多巴氧化法测定酪氨酸酶活性,NaOH法测定黑素含量。结果随着蒺藜防白丸浓度的升高,黑素细胞树突变粗短,且数量减少;低浓度(0.001—0.5mg/mL)的蒺藜防白丸对黑素细胞增殖影响不显著(P〉0.05),高浓度时(1mg/mL和5mg/mL)抑制作用明显(P〈0.05);低浓度的蒺藜防白丸可以提高酪氨酸酶活性,其中0.05mg/mL时酪氨酸酶活性最高(P〈0.05),然而当蒺藜防白丸浓度继续增大,则会对酪氨酸酶活性产生抑制作用;蒺藜防白丸对黑素细胞黑素合成也有类似的影响。结论蒺藜防白丸高浓度时抑制黑素细胞的增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成;低浓度时促进酪氨酸酶活性及黑素合成。 龚芬芬 吕朋举 韩鹏黎 孙蕾 琚杰昌 刘敏 曹巍关键词:黑素细胞 酪氨酸酶 黑素 胶质瘤RNA致敏的人脐血树突状细胞诱导细胞毒T淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤作用 被引量:4 2006年 目的:制备人脐血来源的树突状细胞(DCs),用胶质瘤RNA诱导其成熟,并观察DCs诱导细胞毒T淋巴细胞(CTL)体外杀伤肿瘤细胞的活性。方法:以rhGM CSF、IL4诱导人脐血单个核细胞向DCs分化并鉴定。提取胶质瘤RNA与DCs混合,使DCs致敏,未致敏的DCs为对照组。观察细胞形态并检测致敏前后DCs的表型。将DCs与外周血T细胞共培养,以胶质瘤细胞为靶细胞,采用MTT比色法检测T细胞抗肿瘤活性差异。结果:人脐血单个核细胞于诱导第5d呈现典型的DCs形态;经rhGM CSF、IL4诱导培养后,CD86、CD11c、CD54、MHCⅠ、MHCⅡ类分子表达与培养前比较均明显增高(P<0.01)。负载抗原后,MHCⅠ和CD54表达与负载抗原前相比进一步增高(P<0.05)。以DCs诱导活化的T细胞与胶质瘤细胞共培养可使胶质瘤细胞的生长受到抑制,并最终导致其死亡;杀伤率与未负载抗原的对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论:人脐血单个核细胞在细胞因子的诱导下扩增并分化为DCs。经抗原致敏后,能增强淋巴细胞对相应肿瘤细胞的体外杀伤效应。 徐虹 黄玉敏 孙蕾 阮丽荣 杜英关键词:树突状细胞 胶质瘤 RNA 细胞毒 食管鳞癌细胞KYSE-70的分化诱导对光动力学应答敏感性的抑制 2011年 目的:研究全反式维甲酸(ATRA)对低分化食管鳞癌细胞系KYSE-70的分化诱导作用及对光动力学疗法(photodynamic therapy,PDT)的应答敏感程度.方法:以高分化食管鳞癌细胞KYSE-450和低分化食管鳞癌细胞KYSE-70为研究对象,用1μmol/LATRA为诱导剂,诱导KYSE-70细胞从低分化状态向高分化状态分化,通过细胞形态学、增殖实验来验证;细胞以1mmol/LALA处理,不同剂量的450nm蓝光照射,MTT法测定PDT对细胞的光毒毒性;流式细胞法测定PDT诱导的凋亡水平,Hoechst33342染色后观察凋亡细胞的胞核形态.结果:经ATRA处理后,诱导组与对照组相比,细胞变扁平、体积增大、胞质密度减低、核变大、核密度亦减低、细胞生长缓慢.高分化KYSE-450、分化诱导后的KYSE-70细胞和未诱导KYSE-70细胞用ALA处理后进行蓝光PDT,MTT结果显示高分化KYSE-450和分化诱导后KYSE-70的细胞存活率明显高于未诱导细胞,而高分化KYSE-450细胞敏感性略微低于分化诱导后的KYSE-70细胞.当光剂量为225mJ/cm2时,诱导前后细胞存活率分别为36.23%±7.43%和54.28%±3.64%,有极显著差异(P<0.001);分化诱导后的KYSE-70细胞凋亡率(18.1%)亦低于未诱导的细胞(33.3%).结论:经分化诱导后的食管鳞癌细胞PDT敏感性明显差于未诱导的食管鳞癌细胞,提示细胞分化诱导疗法不仅不能增强PDT效应,反而降低疗效;细胞分化诱导对PDT效果的影响部分通过抑制凋亡而实现. 孙蕾 李懿 石雨 刘喜龙 杨观瑞 赵立群 杨小静 裘一兵 张亚冰 汲翔 康巧珍 汲振余关键词:细胞分化 光动力学疗法 ALA HAART对人类免疫缺陷病毒感染者淋巴细胞亚群的影响 被引量:6 2007年 应用流式细胞分析法通过分析检测41例AIDS患者与30例健康对照之间,以及21例AIDS患者在接受HAART治疗前后外周血淋巴细胞亚群的表达情况,研究感染HIV病毒以及HAART治疗对淋巴细胞亚群的影响。结果显示AIDS患者与健康对照相比,外周血CD4^+CD45RA^+、CD4^+CD28^+、CD4^+CD45RO^+、CD4^+CD95^+细胞比例明显低于正常对照,CD8^+CD95^+、CD8^+CD38^+、CD56^+细胞比例明显高于正常对照;经HAART治疗后,CD4^+CD45RA^+,CD4^+CD28^+细胞比例比治疗前升高,CD56^+细胞比例比治疗前显著下降。结果表明CD4^+T淋巴细胞表面CD45RA、CD28表达,以及CD56^+细胞能够预测AIDS患者HAART治疗效果。 孙蕾 李倩如 杨璇 杜英 张世玺 徐立然关键词:流式细胞术 艾滋病 高效抗逆转录病毒治疗 淋巴细胞亚群 三种纳米颗粒对食管鳞状细胞癌细胞增殖的影响 目的研究CuO、ZnO、TiO纳米颗粒在体外对人食管鳞状癌细胞系EC-9706和EC-109增殖的影响及其作用机制。方法使用透射电镜(TEM)、动态光散射(DLS)鉴定纳米颗粒物的理化性质,然后将不同浓度的TiO、CuO... 韩鹏黎 孙蕾 吕朋举 龚芬芬 马超 朱怡然 夏天 曹巍关键词:食管癌 CUO ZNO TIO2 细胞增殖 文献传递 人胃癌BGC823细胞RNA转染脐血树突状细胞分泌的exosomes对T细胞增殖及杀瘤活性的影响 2007年 目的:探讨肿瘤细胞RNA转染脐血树突状细胞(DCs)分泌的exosomes对细胞毒T细胞(CTL)特异性抗肿瘤作用的影响。方法:分离脐血单个核细胞,经干细胞因子(SCF)、粒细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-4(IL-4)诱导和BGC823 RNA转染形成成熟DCs,收集DCs培养上清,采用超速离心法分离exosomes,并用透射电镜、SDS-PAGE和Western blot进行鉴定;利用MTT比色分析法观察exosomes诱导T细胞增殖和CTL的杀瘤活性。结果:经诱导和BGC823RNA转染后DCs分泌的exosomes表达MHC-Ⅱ、CD54、CD86,对T细胞的刺激指数(SI)为(2.53±0.09),CTL杀瘤活性(64.92±0.37)%,较转染前的(1.26±0.07)和(35.28±0.16)%均增高(P<0.01)。结论:从脐血中诱导的DCs经肿瘤细胞RNA转染后分泌的exosomes,能在体外活化T细胞,有望成为新型非细胞结构的DCs亚单位疫苗。 杜英 李倩如 李付广 黄玉敏 孙蕾 董子明关键词:树突状细胞 BGC823 EXOSOMES 脐血