刘晓
- 作品数：62 被引量：149H指数：7
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- 口蹄疫病毒VP1基因重组慢病毒载体的构建及VP1基因稳定表达细胞系的建立
- 2010年
- 【目的】构建口蹄疫病毒VP1基因重组慢病毒载体FG9-VP1,并建立稳定表达VP1基因的BHK-21细胞系。【方法】采用RT-PCR技术从口蹄疫病毒材料中扩增出VP1基因,并将其连入慢病毒载体FG9中,经PCR、酶切和测序鉴定正确后,转染BHK-21细胞,96h后经流式细胞分选筛选GFP阳性细胞,细胞增殖后经WB检测VP1基因的表达。【结果】VP1基因重组慢病毒载体FG9-VP1测序正确,转染BHK-21细胞经流式细胞仪筛选的GFP阳性细胞后可稳定表达VP1基因。【结论】VP1基因重组慢病毒载体构建成功并获得了稳定表达VP1基因的BHK-21细胞系。
- 代文君王洪梅刘晓高运东于力王立群仲跻峰何洪彬
- 关键词：口蹄疫病毒VP1稳定细胞系
- Asia1型口蹄疫病毒P1基因的原核表达及其抗血清的制备
- 2011年
- [目的]研究Asial型口蹄疫病毒P1基因原核表达及其抗血清的制备。[方法]利用基因克隆技术获得Asia1型口蹄疫病毒(FM-DV)的P1基因,然后将P1基因重组到pET-32a(+)质粒中;转化大肠杆菌BL21感受态细胞,经IPTG诱导及蛋白纯化后,进行SDS-PAGE分析;将重组菌BL21培养物用超声波裂解,对该融合蛋白进行分离纯化后免疫新西兰兔,制备P1蛋白抗血清。[结果]获得了重组性阳性克隆;SDS-PAGE结果表明在105 kD处出现了目的条带;Western-blot分析表明,抗血清可与原核表达的P1蛋白特异性结合,ELISA方法检测抗血清的效价可达到1∶5 120,[结论]为建立FMDV的血清学诊断方法及其基因工程疫苗的研究奠定了基础。
- 武刚王洪梅刘晓王立群于力仲跻峰何洪彬
- 关键词：P1基因原核表达抗血清
- 一种针对试管的培养基分装装置
- 一种针对试管的培养基分装装置，其中，包括用于固定密闭容器的立柱，在容器的上盖和底板上分别设置有进气孔和出液口，立柱固定在底座的中央处，且在立柱周围的底座上设有一个环状的第一凹槽，由第一电机驱动并可进行定量转动的所述转盘通...
- 刘晓焦其庆
- 文献传递
- 一种用于无菌操作的接种针
- 一种用于无菌操作的接种针，包括手柄、锁紧端盖、镍合金弹簧圈、连杆、滑块、预紧弹簧和针体，在手柄的固定部处设有圆孔和十字缝，在固定部上扣合一锁紧端盖，在针体上部套置有一个镍合金弹簧圈，且在镍合金弹簧圈的外侧焊接连接一个连杆...
- 贾曦丁照华刘晓杨菲杨景云
- 文献传递
- 人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)(1354-1802)的原核表达及抗血清制备
- 2012年
- [目的]制备人组织型纤溶酶原激活剂t-PA(1354-1802)抗血清,并测定其效价,为深入研究t-PA基因功能奠定基础。[方法]利用基因克隆技术获得t-PA(1354-1802)催化域基因片段,然后将其重组到pET-32a(+)质粒中,进行鉴定及序列分析;将测序正确的阳性质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,IPTG诱导、蛋白纯化及免疫兔试验。[结果]SDS-PAGE结果显示,37 kD处出现特异性条带;对该融合蛋白进行分离纯化后免疫新西兰兔,制备t-PA蛋白抗血清,Western blot分析表明,抗血清可与标准品t-PA蛋白特异性结合,间接ELISA方法检测抗血清的效价可达到1∶12 800。[结论]成功制备了t-PA(1354-1802)抗血清,为t-PA基因功能的深入研究奠定了基础。
- 王青泉武建明李秀梅王立群何洪彬王洪梅刘晓
- 关键词：T-PA原核表达抗血清
- 优化农村产业结构,发展现代农业,增加农民收入被引量：3
- 2009年
- 如何在新形势下优化农村产业结构,发展现代农业,增加农民收入,是当前工作的重点。本文试从农村城市化过程中农村劳动力的转移、土地流转制度的影响等方面入手,对如何优化农村产业结构,增加农民收入谈谈自己的见解。
- 刘晓
- 关键词：城市化土地制度现代农业农村产业结构
- 稳定表达T7 RNAP的BHK-21细胞系的建立被引量：2
- 2010年
- 为建立能稳定表达T7RNA聚合酶(T7RNAP)的BHK-21细胞系以研究RNA重组疫苗,本研究从BL21(DE3)大肠杆菌中扩增T7 RNAP基因,定向克隆于质粒pcDNA3.1(+)中,经双酶切及测序鉴定,获得阳性重组质粒pcDNA3.1-T7 RNAP。用该质粒转染BHK-21细胞,经G418筛选14d后获得阳性细胞株。RT-PCR和western blot检测结果表明,建立了稳定表达T7 RNAP的BHK-21细胞系,并且在不同代次的阳性细胞中能稳定表达目的基因和蛋白,该研究为RNA病毒感染性质粒在细胞内转录及病毒拯救技术平台的建立奠定了基础。
- 李欣杨少华王洪梅刘晓武建明高运东王立群仲跻峰何洪彬
- 关键词：T7BHK-21细胞
- 人补体C1INH基因的原核表达及其抗血清的制备
- 2012年
- 采用PCR技术获得人补体C1INH基因全长,以其为模板扩增出抗原表位基因片段命名为C1,然后将C1片段重组到pET32a(+)载体中,筛选阳性克隆,转化大肠杆菌;IPTG诱导表达,用超声波裂解重组菌BL21培养物,纯化蛋白后免疫新西兰兔制备抗血清。SDS-PAGE分析表明,pET32a-C1融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中以包涵体形式高效表达;获得的抗血清经间接ELISA法检测效价为1∶6 400;Western-blot检测显示,抗血清可与原核表达的C1INH蛋白进行特异性结合,为进一步检测真核表达蛋白及研究rhC1INH的功能活性,并为C1INH的临床检测奠定基础。
- 许燕王洪梅朱其军武建明宋玲玲杨宏军刘晓何洪彬王立群
- 关键词：原核表达抗血清
- 抑制牛整合素β5基因表达的shRNA的筛选
- 2012年
- 根据牛整合素β5(Integrin Bata5,ITGB5)的基因序列,设计并构建了真核表达载体pcDNA3.1-flag-β5和shRNA重组慢病毒载体H1-shRNA145、H1-shRNA726,利用脂质体介导法,将pcDNA3.1-flag-β5分别和H1-shRNA145、H1-shRNA726共转染293T细胞,并以针对LacZ基因的H1-shRNA-LacZ与pcDNA3.1-flag-β5共转染293T细胞作为对照,以持家基因β-actin为蛋白内参,通过Western blot检测ITGB5的表达,结果表明,H1-shR-NA145、H1-shRNA726均可抑制ITGB5的表达,并有剂量效应,为进一步研究ITGB5的基因功能奠定基础。
- 王浩然王洪梅朱其军武建明刘晓宋玲玲何洪彬王立群
- 关键词：真核表达SHRNAWESTERNBLOT
- 牛肠道病毒VP2基因的原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：7
- 2015年
- 应用RT-PCR方法扩增牛肠道病毒(Bovine enterovirus,BEV)VP2基因,构建重组质粒pET32a(+)-VP2。转化大肠杆菌菌株BL21,IPTG诱导其表达VP2融合蛋白,Western-blot检测目的蛋白。将纯化的重组蛋白(pET32a(+)-VP2)免疫新西兰大白兔,制备VP2多克隆抗体,iELISA方法检测抗体效价,同时利用血清中和试验评估其诱导中和抗体的能力。SDS-PAGE分析结果显示,融合蛋白的相对分子质量为50 000,与预期值大小相符;iELISA检测其抗体效价为1∶25 600;血清中和试验表明,原核表达的VP2蛋白诱导产生的中和抗体效价为1∶107.4。结果表明,成功克隆和表达了具有免疫原性的VP2蛋白,其可诱导产生较高效价的多克隆抗体,为BEV血清学诊断方法的建立及亚单位疫苗的研制奠定了基础。
- 朱彤侯佩莉刘晓王洪梅何洪彬李杰
- 关键词：VP2多克隆抗体
