黄欣 作品数:5 被引量:11 H指数:3 供职机构: 广东药学院生命科学与生物制药学院 更多>> 发文基金: 广州市科技计划项目 更多>> 相关领域: 生物学 医药卫生 更多>>
土曲霉洛伐他汀合成调控基因lovE的克隆与表达 2011年 目的克隆表达土曲霉洛伐他汀合成调控基因lovE,为研究lovE蛋白的生物学功能奠定基础。方法利用原核表达载体pET21b(+)构建lovE原核表达质粒,并在大肠杆菌中通过IPTG诱导表达;亲和层析法纯化重组蛋白。结果构建了pET-lovE原核表达质粒,经原核表达和亲和层析获得6×His-lovE融合蛋白,蛋白纯度在90%以上。结论原核表达可获得lovE蛋白,为lovE蛋白的生物学功能研究奠定了基础。 朱碧云 黄欣 刘宝意 李浩明关键词:土曲霉 洛伐他汀 调控基因 SMART技术构建红曲霉全长cDNA文库 被引量:4 2009年 目的构建红曲霉cDNA文库,为红曲霉功能基因的研究以及筛选、克隆红曲霉次生代谢产物合成途径相关基因奠定基础。方法采用SMART( switching mechanism at 5 'end of RNA transcript)技术构建红曲霉全长cDNA文库,经涂平板和酶切反应测定文库的克隆数、重组率,PCR测定插入片断的大小。结果原始文库的库容为2.03×10^5,重组率达94%。插入片段大小多在0.7—2.0kb,平均大小在1kb左右。结论所构建文库的代表性和重组片段的序列完整性达到了用于目的基因的分离筛选和克隆表达的建库要求。 朱碧云 高蓝 黄欣 李浩明关键词:红曲霉菌 CDNA文库 SMART SMART技术构建栀子cDNA文库 被引量:4 2010年 目的:构建栀子叶片cDNA文库。方法:提取栀子叶片总RNA。利用SMART技术合成双链cDNA。双链cDNA经限制酶Sfil酶切后与pDNR-LIB质粒连接。利用电刺激转化法将重组质粒导入E.coli DH5α而获得文库。利用PCR法检测文库的重组率。结果:原始文库滴度为2.63×105cfu/ml。随机检测文库中的15个克隆,表明重组率约为86.7%。选择14个插入片段的长度在400bp以上的克隆进行测序和生物信息学分析,结果预测的全长基因占所检测序列的64.3%。结论:成功构建了栀子叶片的cDNA文库,为栀子基因的结构和功能的研究提供了基础。 高蓝 朱碧云 黄欣关键词:栀子 SMART CDNA文库 洛伐他汀合成调控基因LovE//mkH的克隆与表达 研究目的
克隆红曲霉和土曲霉洛伐他汀合成酶调控基因lovE和mkH并进行比对分析;原核表达并纯化洛伐他汀合成转录因子lovE蛋白;构建lovE基因的真核表达载体。
研究方法
根据gen... 黄欣关键词:洛伐他汀 红曲霉 土曲霉 融合蛋白 调控基因 文献传递 洛伐他汀合成酶调控基因lovE和mkH的克隆及其序列分析比较 被引量:3 2009年 目的克隆红曲霉和土曲霉洛伐他汀合成酶调控基因lovE和mkH,并进行序列分析和同源性比较。方法根据GeneBank土曲霉和红曲霉洛伐他汀合成酶基因序列设计引物,以土曲霉和红曲霉基因组DNA为模板PCR扩增lovE和mkH基因并克隆到pMD19Tsimple载体。利用DNAMAN等软件以及互联网资源对lovE和mkH测序结果与其编码的氨基酸序列进行分析比对。结果分别扩增得到1 512 bp和1 464 bp的目的片段lovE和mkH。结论lovE和mkH同源性很高,并与GeneBank中相关已知序列基本相同,是洛伐他汀生物合成酶调控基因,且其表达产物为GAL4类转录因子。 黄欣 朱碧云 吕带弟 陈伟立 黄晓琳 李浩明关键词:土曲霉 红曲霉 洛伐他汀 调控基因