李杨
- 作品数：18 被引量：33H指数：3
- 供职机构：同济大学附属东方医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市教育发展基金会“曙光计划”项目上海市浦江人才计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生哲学宗教生物学更多>>
- 成年犬骨骼肌成肌细胞的培养纯化、鉴定及生长特性的研究
- 2006年
- 目的建立简便、有效的成年犬骨骼肌成肌细胞(skeletal myoblast cells,SMCs)体外分离培养、纯化和鉴定的方法,并观察犬SMCs的生长特性。方法采用机械分解法与IA型胶原酶和胰蛋白酶的二步酶消化法相结合,分离消化法培养获取犬SMCs,用DMEM培养液培养,以Ficoll梯度液纯化,进行Desmin免疫组化鉴定,并观察细胞形态、生长特性。结果犬SMCs培养后经台盼蓝检查成活率达95％以上,在接种后4～5 d增殖达高峰,细胞生长旺盛;Ficoll分离纯化的SMCs纯度较高;Desmin免疫细胞化学染色有97％的SMCs胞浆呈阳性反应。结论改良方法获得的SMCs具有良好的增殖、分化能力;采用Ficoll纯化以血清培养,即可获得高产量高纯度的SMCs。
- 汪进益范慧敏刘中民马亮丁一李杨
- 关键词：骨骼肌成肌细胞细胞培养纯化免疫细胞化学
- 应用SELDI-TOF-MS筛检肝癌血清特异相关候选蛋白的研究被引量：1
- 2010年
- 目的筛查潜在的小分子量低丰度的HCC血清相关候选蛋白，为肝癌复杂病理机制的全面阐明、理想早期诊断标志物的发现提供新思路。方法分别收集81例伴有HBV感染和肝硬化背景的HCC患者血清，43例慢性乙型肝炎和36例肝硬化患者血清，采用弱阳离子交换蛋白芯片（WCX2）介质结合SELDI-TOF-MS对患者血清蛋白谱进行检测，并通过BiomarkerWizard软件对生成的蛋白指纹峰分别进行差异归类比较，然后采用消减差异分析确定HCC特异相关候选蛋白。标本检测前，对芯片检测系统的重复性进行分析。结果同一标本同一芯片内强度CV为17．46％，m／z平均CV为0．024％，不同芯片间强度CV为17．74％，m／z平均CV为0．024％。将信噪比大于5，且超过20％标本具有的蛋白峰认定为有意义峰，在2000～30000m／z范围内，共有128个蛋白指纹峰被确认。HCC与肝硬化患者血清蛋白指纹峰的差异比较分析显示，87个差异蛋白指纹峰有统计学意义（P〈0．05），其中强度差异在2倍以上的蛋白指纹峰有45个，在HCC患者血清中2倍上调的15个，2倍下调的30个。从HCC与慢性乙型肝炎血清蛋白指纹峰的差异分析发现，差异有统计学意义的蛋白指纹峰52个（P〈0．05），其中强度相差2倍以上的蛋白指纹峰有9个，HCC患者血清中2倍上调的2个，2倍下调的7个。从肝硬化与慢性乙型肝炎患者血清蛋白指纹峰的差异比较分析发现，差异有统计学意义的蛋白指纹峰79个（P〈0．05），其中强度相差2倍以上的蛋白指纹峰有28个，在肝硬化患者血清中2倍上调的17个，慢性乙型肝炎患者血清中2倍上调的11个。经消减差异分析筛查，确定在HCC患者血清下调表达的5个公共差异蛋白（2870、3941、2688、3165、5483m／z）及在肝硬化和HCC血清均上调表达的2个公共差异蛋白（3588、2017m／z），但蛋白2017m／z在HCC与健康人比较的本所
- 崔杰峰杨蓉刘银坤康晓楠黄成孙瑞霞李杨
- 关键词：生物学标记
- 大鼠心肌成纤维细胞体外培养的生物学特性及转基因研究被引量：2
- 2008年
- 目的观察大鼠心肌成纤维细胞（CFs）体外培养的生长增殖情况及肌肉转录调节因子（MyoD）基因转染对其生物学特性的影响。方法采用改良的差速贴壁法培养大鼠CFs，利用携带MyoD cDNA的真核表达载体pLenti6／V5-DEST-MyoD转导培养的大鼠CFs，用稻瘟菌素筛选2周，挑选转基因单克隆细胞，传代培养，进行细胞形态观察、生长曲线以及细胞免疫化学鉴定。结果成功建立高纯度大鼠CFs的细胞培养模型，且具有良好的细胞形态、正常的生长增殖等生物学功能。转染细胞的MyoD cDNA基因表达阳性，其下游抗α-肌动蛋白（α-actin）呈阳性表达，胞质呈棕黄色，并且含有与细胞纵轴平行排列的肌丝，细胞核用苏木素复染后呈淡蓝色。在2．0×10^5／mL细胞密度的CFs接受转MyoD基因后，抗α-actin阳性率为（27．04±9．41）％。结论真核表达载体成功介导MyoD cDNA转导入体外培养的大鼠CFs，诱导其转化为具有潜在功能的类骨骼肌细胞，CFs可成为心血管疾病基因治疗的靶细胞。
- 汪进益范慧敏刘中民卢蓉马亮李杨
- 关键词：心肌成纤维细胞细胞培养转基因靶细胞
- 自体骨髓干细胞移植联合瓣膜手术治疗扩张型心肌病被引量：1
- 2008年
- 目的探讨瓣膜手术联合自体骨髓干细胞移植术对扩张型心肌病治疗效果。方法2003年3月至2006年10月，选择8例扩张型心肌病病人，男5例，女3例；年龄15～56岁。术前射血分数（EF）0．15～0．32，平均0．26±0．08。心功能（NYHA）Ⅲ级4例；Ⅳ级4例。术日取病人自身骨髓50ml，分离自体骨髓干细胞。5例行瓣膜置换术，3例行瓣膜成形术；瓣膜手术后，取培养的自体骨髓干细胞，左心室心肌内注射。结果全组无手术死亡，未发生严重手术并发症。随访12～42个月，平均18个月。术后6个月内EF改变不明显，但心功能明显改善，生活质量明显提高。术后1年EF开始改善。超声组织多普勒以及DISA心肌灌注，代谢显像显示心脏功能术后明显改善。结论联合应用瓣膜手术加自体骨髓干细胞移植术可能改善扩张型心肌病治疗效果。
- 范慧敏卢蓉马亮李杨刘中民
- 关键词：心肌病扩张型心脏瓣膜假体植入心脏外科手术干细胞移植
- 脑钠素和心电图评价细胞移植治疗急性心肌梗死的实验研究被引量：2
- 2008年
- 目的探讨肌肉转录调节因子(myogenic determination,MyoD)基因和连接蛋白43(connexin 43,Cx43)基因体外共转染大鼠皮肤真皮成纤维细胞(dermal fibroblasts,DFs)后在心肌梗死部位原位移植修复梗死心肌组织的近期疗效及其安全性。方法60只SD雄性大鼠随机分成4组(n=15)。正常对照组:取100μl细胞培养液基质植入到正常心肌组织中;心梗对照组:取等量细胞培养液基质植入到心肌梗死大鼠瘢痕组织中;正常移植组:在正常心肌组织中植入等量用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记经MyoD和Cx43基因联合转染DFs细胞悬液;心梗移植组:在心梗后瘢痕组织中植入等量同样的细胞悬液,细胞密度均为2.0×106/ml。在细胞移植前、移植后4周内动态监测心电图和血浆脑钠肽(B-type natriuretic peptide,BNP)水平的变化。结果心梗对照组和心梗移植组血浆BNP浓度较正常对照组和正常移植组明显升高(P<0.01);心梗移植组较心梗对照组血浆BNP浓度在术后1 d、1周及2周无差异,在4周后明显降低(P<0.01)。心梗大鼠Ⅱ导联心电图的QRS波增宽,ST段、T波抬高;细胞移植早期ST段、T波快速回落,2周内回落大于50%;4周后正常移植组和心梗移植组大鼠均未见致命性心律失常,且心梗移植组与心梗对照组(或移植前)相比QRS波变窄,R波相对升高,ST段回到基线。结论用MyoD和Cx43基因转染DFs后原位心肌移植,可以降低血浆BNP水平和改善心电图,两者的动态监测为评价细胞移植治疗急性心梗提供了有效实用的方法。
- 汪进益范慧敏刘中民张旭敏马亮李杨
- 关键词：脑钠素心电图急性心肌梗死细胞移植
- 有效可行的心理健康管理模式和干预措施探讨被引量：3
- 2016年
- 随着现代医学的发展，医学模式已经由单纯的生物医学模式转变为生物－心理－社会医学模式。健康不仅是没有疾病和虚弱，而是身体、心理和社会适应的完满状态［1］。近年来由于生活节奏的加快、工作和生活压力的增加，心理疾病的发病率和死亡率日益增加，对人们的生活、工作、家庭、社会都带来了极严重的影响。可悲的是很多人面对它却感到束手无策，不知如何是好，只能任其发展，或者相当一部分人根本就意识不到这也是一种病，总认为这是一个人本身的性格或个性问题，直到悲剧发生后才恍然大悟，后悔不已。这样的案例举不胜举。基于此，本文认为开展切实可行的心理健康体检项目、建立优质高效的心理健康管理模式和干预措施势在必行。健康管理是医疗卫生保健事业发展的必然趋势，是涉及到人民大众自身健康安危的任重而道远的永恒命题。健康管理中心是承载这一重任的领导者和执行者。因此，为了国家的未来，为了人民大众的健康安危，为了整个家庭、社会的和谐稳定，探讨有效可行的心理健康管理模式和干预措施在心理疾病高发的今天显得尤为重要。那么，如何开展心理健康体检项目和有效可行的心理健康管理模式和干预措施呢？针对这个命题，本文有以下几方面的见解，希望能给祖国的医疗卫生健康管理事业和个体家庭的幸福安康奉献自己一点微薄之力。
- 马红霞李杨
- 关键词：心理健康干预措施
- SGC-7901胃癌细胞株皮质肌动蛋白基因干扰稳定细胞株的构建
- 2014年
- 目的 构建针对cortactin基因干扰的胃癌SGC-7901稳定细胞株.方法 设计3条针对皮质肌动蛋白（cortactin）基因的短发卡RNA（shRNA）序列以及l条对照序列,退火后插入到PLKO.1慢病毒质粒载体中,质粒构建完成后和辅助质粒psPAX2,PCMV-VSVG共转染HEK293T细胞,包装成慢病毒颗粒,感染胃癌SGC-7901细胞株,并使用嘌呤霉素筛选.最终筛选出3个细胞株,提取该3株细胞的RNA和蛋白质分别进行实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）和Western blot检测cortactin基因的mRNA和蛋白的表达.结果 在3株不同的稳定细胞株中,PLKO.1＋shRNA3细胞株cortactin基因的mRNA和蛋白质表达下降最为明显,约为对照组的10％.结论 成功构建出针对cortactin基因干扰的胃癌SGC-7901稳定细胞株.
- 魏军李杨尤天庚所广军赵中辛
- 关键词：短发卡RNA胃癌
- HMGA2基因沉默对结肠癌LS 174T细胞增殖和侵袭的影响被引量：2
- 2014年
- 目的探讨利用小发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰技术沉默高迁移率族蛋白A2(high mobility group protein AT-hook 2,HMGA2)基因,观察对结肠癌LS 174T细胞增殖和侵袭的影响。方法构建HMGA2基因特异性shRNA慢病毒载体,干扰结肠癌LS 174T细胞,设立空白对照组(MOCK)、阴性对照组(Scramble shRNA)和HMGA2 shRNA三组,利用Real-time PCR和Western blot方法分别从基因和蛋白水平检测shRNA对HMGA2基因的干扰效果;MTT法检测抑制HMGA2基因表达后LS 174T细胞增殖情况;Transwell侵袭实验检测HMGA2基因沉默后LS 174T细胞侵袭能力的变化。结果转染shHMGA2慢病毒后,结肠癌LS 174T细胞中HMGA2 mRNA和蛋白表达均明显受到抑制(P<0.01);MTT法检测各组细胞的增殖能力,shHMGA2组细胞增殖水平明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05);敲除HMGA2基因可明显降低LS 174T细胞的侵袭能力,空白对照组和阴性对照组平均穿膜细胞数分别为(124.28±65)/视野和(118.52±15)/视野,shHMGA2组平均穿膜细胞数为(53.35±8.45)/视野(P<0.05)。结论 shHMGA2慢病毒能明显下调HMGA2基因的表达,在体外可有效抑制结肠癌LS 174T细胞的增殖和侵袭。
- 李杨魏军所广军赵中辛尤天庚
- 关键词：结肠肿瘤HMGA2增殖
- SWC3在猪外周血单个核细胞中的表达分析被引量：1
- 2009年
- 李杨孔祥赵曙光范慧敏卢伟刘刚刘中民
- 关键词：流式细胞分析免疫磁珠分选
- 肌肉转录调节因子和连接蛋白43转基因成纤维细胞移植对心肌梗死大鼠脑钠素及梗死面积的影响
- 2008年
- 背景:研究表明基因工程将成纤维细胞改造为可兴奋细胞是可能的;而真皮成纤维细胞是机体内数量最大的"种子细胞库"。目的:观察肌肉转录调节因子(myogenic determination,MyoD)和连接蛋白43(connexin43,Cx43)基因共转染真皮成纤维细胞后在心肌梗死部位原位移植对急性心肌梗死大鼠血浆脑钠素浓度和心肌梗死面积的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-06/2007-03在同济大学附属东方医院细胞治疗室和上海中医药大学动物实验中心完成。材料:雄性SD大鼠60只随机分成正常对照组、心肌梗死对照组、正常移植组和心肌梗死移植组,每组15只。方法:结扎左冠状动脉前降支制备心肌梗死模型。4周后再次开胸在自结扎远端紧靠结扎处,心肌梗死区与非梗死区交界处用微量注射器将100μL经BrdU标记的MyoD/Cx43-FB细胞悬液(细胞数1.0×106)注入左冠状动脉前降支,在结扎远端已缺血的心肌上用同样的针头于靠近心尖部、室间隔部、左室前侧壁缺血的心肌上多点多位置将另外100μL移植细胞悬液注入到心肌内,深度约4mm;对照组同法等量注入未含细胞的DMEM细胞培养液。主要观察指标:细胞移植前和移植后1d,1,2,4周动态检测血浆脑钠素浓度;同时监测各组大鼠心率、动脉压、左心室内压及左心室等容收缩期室内压最大上升速率和下降速率等血流动力学指标的变化;4周后处死大鼠取心肌标本染色后测定心肌梗死面积。结果:①免疫组织化学检测结果显示心肌瘢痕区边缘有BrdU阳性细胞存在。②细胞移植可显著改善心肌梗死大鼠的血流动力学。③心肌梗死对照组和心肌梗死移植组大鼠的血浆脑钠素浓度较正常对照组和正常移植组明显升高(P<0.01);在移植后1d、1周、2周心肌梗死移植组与心肌梗死对照组血浆脑钠素浓度差异无显著性意义,4周后明显降低(P<0.01)。④心肌梗死移植组�
- 汪进益范慧敏卢蓉张旭敏马亮李杨刘中民
- 关键词：CX43基因心肌梗死脑钠素心肌梗死面积
