王瑞青
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：南京师范大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 大肠杆菌系列融合表达载体的构建被引量：3
- 2013年
- 许多异源蛋白在大肠杆菌内的表达是以不可溶、无生物学活性的包涵体形式存在,这为蛋白质的功能研究带来困难.融合表达是提高蛋白可溶性的有效方案之一.为构建通用型融合表达载体,本研究将5种常见的融合标签即突变型麦芽糖结合蛋白(mMBP)、小分子泛素样修饰蛋白(SUMO)、翻译起始因子(IF2-I)、氮源利用物质A(NusA)和谷胱甘肽转移酶(GST)以及3种伴侣蛋白(GroEL、DnaK和TF)分别克隆至pET30a(+),构建了系列融合表达载体.这些载体含有相同的克隆位点以及位于融合标签羧基端的烟草蚀刻病毒蛋白酶(TEV)的酶切位点.N-乙酰-D-葡萄糖胺2-异构酶基因hRnBP克隆到mMBP融合表达载体后,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测表明融合蛋白均得到了高效表达且几乎完全可溶,TEV酶切获得了预期的带型.全细胞偶联生成N-乙酰-D-神经氨酸实验发现mMBP-hRnBP的摩尔转化率较无mMBP标签的体系提高了近60%,证明了融合表达载体中融合标签的适用性.新型的原核融合表达载体为蛋白的融合表达、分离纯化及功能研究提供了更多的选择.
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- 关键词：融合表达载体融合标签TEV
- 链霉菌表达载体的构建和阿霉素生物合成基因簇大片段的克隆
- 许多具有基础研究和应用价值的多肽或蛋白质,在天然生物中含量都很低。因此对这些物质的性质及其活性的深入研究,以及对它们进行开发和应用就受到了一定的限制。应用基因工程技术,这些多肽和蛋白质的基因能被有效地克隆到各种各样的基因...
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- 关键词：异源表达阿霉素基因簇克隆
- 文献传递
- 一种高转化效率的大肠杆菌表达菌株
- 本发明涉及一株高转化效率的大肠杆菌表达菌株CGMCCNo.7123。该菌株是将大肠杆菌异源蛋白表达菌株BL21(DE3)基因组中编码I型限制性内切酶的hsdR基因通过重组工程法敲除后而获得。hsdR基因敲除后不携带任何外...
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- 文献传递
