宿玲恰
- 作品数：41 被引量：98H指数：6
- 供职机构：江南大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家杰出青年科学基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程环境科学与工程更多>>
- 内切葡聚糖酶的克隆表达及酶学性质分析
- 纤维素酶是指能降解纤维素的一类酶的总称,主要包括三类,分别为内切β-1,4-葡聚糖酶(EC3.2.1.4)、纤维二糖水解酶(EC3.2.1.91)和β-葡萄糖苷酶(EC3.2.1.21).其中,内切β-1,4-葡聚糖酶是...
- 闫鹏安宿玲恰陈晟吴丹吴敬
- 关键词：洗涤剂工业内切葡聚糖酶克隆表达酶学性质
- 文献传递
- D-阿洛酮糖3-差向异构酶在枯草芽孢杆菌中的高效表达及固定化细胞研究被引量：11
- 2018年
- 将来源于Clostridium cellulolyticum H10的DPEase基因在食品级表达系统Bacillus subtilis中进行产酶研究,在3L发酵罐中高密度发酵最终酶活可达495U/ml,得到高表达量的DPEase酶液。通过硅藻土-海藻酸钠（吸附包埋法）对重组细胞进行固定化研究,结果表明,当海藻酸钠浓度为2%、细胞包埋量为50g/L、CaCl_2浓度为2%、硅藻土浓度为1%时,固定化细胞酶活回收率可达64%,固定化细胞与游离细胞相比最适pH不变,最适温度提高5℃,热稳定性明显提高,连续反应7个批次后转化率仍然为28%,仍保持81%的残余酶活,具有很高的工业应用价值。
- 孙帆宿玲恰张康吴敬
- 关键词：枯草芽孢杆菌高密度发酵固定化细胞
- Aspergillus oryzae RIB40氨肽酶(AoAPase)异源表达及在鳕鱼肽脱苦中的应用被引量：2
- 2022年
- 【目的】针对鳕鱼肽苦味这一不足之处,本研究旨在获得一种高效特异性脱苦氨肽酶,实现对鳕鱼肽苦味的去除进而提升其附加值。【方法】本研究选取Aspergillus oryzae RIB40来源的氨肽酶AoAPase在毕赤酵母KM71中进行异源表达并探究其酶学性质;荧光探针法与电子舌技术联用评估AoAPase对鳕鱼肽的脱苦效果;高效液相色谱测定鳕鱼肽酶解液中游离氨基酸含量及分子量的分布变化;利用扫描电镜观察鳕鱼肽表面微观结构的差异性;通过评价DPPH、羟基及ABTS自由基清除能力,探究鳕鱼肽经AoAPase处理后抗氧化活性的变化。【结果】AoAPase在毕赤酵母KM71中成功异源表达,其分子量约41kDa。最适温度和pH分别为70℃和8.0,在最适条件下AoAPase酶活可达到2238U/mL,Ca^(2+)能够提高其酶活;AoAPase具有底物特异性,以Leu-pNA为底物时,K_(m)为5.95mmol/L,V_(max)为43.58μmol/(mL·min);AoAPase通过切除鳕鱼肽段N端疏水性氨基酸残基和降低苦味显著的肽段(500‒1000 Da)含量,进而完全消除其苦味;经AoAPase处理后的鳕鱼肽粉质地更加细腻、松散,且抗氧化活性无明显差异。【结论】重组氨肽酶AoAPase能够特异性去除鳕鱼肽苦味且不影响其生物活性,本研究为AoAPase在蛋白脱苦中的应用奠定理论基础。
- 袁帅陈晓倩吴敬宿玲恰宿玲恰
- 关键词：氨肽酶异源表达脱苦抗氧化性
- 定向进化提高来源于Arthrobacter ramosus的MTHase的热稳定性被引量：1
- 2021年
- 麦芽寡糖基海藻糖水解酶(maltosyltrehalose hydrolase,MTHase)是以淀粉或麦芽糊精为底物制备海藻糖的关键酶之一。来源于Arthrobacter ramosus的MTHase,表达量好,比活高,但热稳定性差,限制了其工业化应用。采用定向进化技术,筛选得到L137M和A216T两个突变体,在60℃下,野生型和两个突变体的半衰期(t1/2)分别为15.5、20.5和23.3 min,L137M和A216T的t1/2分别比野生型提高1.3和1.5倍。进一步考察了L137M、A216T和野生型酶在60℃分别和同样来源于Arthrobacter ramosus的麦芽寡糖基海藻糖合成酶(maltosyltrehalose synthase,MTSase)复配制备海藻糖,在相同的加酶量下,野生型、L137M和A216T的海藻糖转化率分别为51.3%,52.6%和55.7%,两个突变体的转化率都比野生型提高,说明突变体提高的热稳定性有利于海藻糖的转化率。
- 陈春宿玲恰夏伟夏伟
- 关键词：热稳定性定向进化海藻糖
- 易错PCR技术提高源于Sulfolobus acidocaldarius麦芽寡糖基海藻糖合成酶活性
- 2020年
- 利用易错PCR技术结合高通量筛选技术对源于Sulfolobus acidocaldarius ATCC 33909的MTSase进行定向进化,获得一个酶活提高的突变体酶D-6。基因分析表明,突变体酶发生了2个位点突变:G432D/G586D,其中突变位点G586D位于Aβ8与AEα14的loop环上。将野生型MTSase和突变体酶D-6进行蛋白质纯化后,测定其酶学性质,结果表明:突变体酶D-6的比活力为野生型MTSase的1.22倍;野生型的Km值为4.74 mmol/L,而突变体D-6为2.77 mmol/L,表明其对底物亲和性较野生型有所提高。
- 姚锴琳宿玲恰吴敬
- 关键词：易错PCR
- 重组大肠杆菌产Streptomyces sp.FA1来源木聚糖酶的摇瓶发酵优化被引量：1
- 2013年
- 为了实现来源于Streptomyces sp.FA1的木聚糖酶的高效胞外分泌表达,对E.coli BL21(DE3)/pET20b(+)/coe/xynA基因工程菌的发酵产酶诱导条件进行优化,获得最优的诱导条件为25℃发酵6 h后添加终浓度为0.4 mmol/L的IPTG。在此基础上对发酵培养基进一步优化,得到最优培养基成分为:甘油11 g/L,酵母粉24 g/L,蛋白胨8 g/L,磷酸盐浓度89 mmol/L,镁离子4mmol/L。最终酶活达到780.2 U/ml,为未优化前的2.2倍,是目前大肠杆菌摇瓶发酵产木聚糖酶的最高表达水平,为实现该酶的工业化生产奠定基础。
- 何洁宿玲恰吴敬
- 关键词：链霉菌木聚糖酶重组大肠杆菌发酵优化
- 典型气田的指示微生物异常分子诊断:以杭锦旗气田为例
- 2024年
- 【目的】油气微生物勘探技术因其多解性小、信噪比高、受环境影响小和经济快速的特点,日益受到勘探者的重视。然而,多数微生物勘探应用是基于非原位的实验室培养分析,不能准确而全面反映漫长地质历史过程中油气资源微生物的原位动态变化规律。本研究以杭锦旗气田为例,分析气区上方和背景区的微生物群落结构和发育特征差异,识别地表油气微生物异常。【方法】对采集自杭锦旗的新召和什股壕大营圈闭土壤样本中细菌16S rRNA基因进行测序,结合理化参数,比较微生物多样性差异,分析理化参数对微生物分布的影响,识别微生物异常。通过共生网络分析,探索气藏上方地表土壤中微生物群落构建过程和功能组成。【结果】群落组成分析发现在杭锦旗地区,放线菌门和变形菌门是主要的微生物类群,占菌落总体丰度的72.47%,理化参数相关性分析表明该地区的微生物分布与理化参数无明显相关关系。群落多样性分析显示,气区和背景区的群落结构存在显著差异。共生网络分析发现气区微生物群落呈现出非随机性和连通性,表明确定性因素在微生物群落构建中占主导作用。模块化的共发生网络揭示微生物群落形成了特定的功能模块,不同模块的节点可能具有不同的功能。【结论】通过对杭锦旗气区和背景区的微生物多样性分析发现了新召和什股壕气区的指示菌属。根据对杭锦旗气区的共生网络分析,发现关键指示类群为出芽单胞菌属、土壤红色杆形菌属、假诺卡氏菌属、短芽孢杆菌属、气微菌属和类诺卡氏菌属,主要的功能模块包括碳氮循环和有机物质降解模块,共同参与气田上方土壤中烃类物质的降解。
- 刘海峰许科伟颜正飞顾磊郑旭莹张凤山宿玲恰
- 关键词：高通量测序分子诊断
- 重组Athrobacter ramosus S34MTSase和MTHase的酶学性质及其制备海藻糖的应用条件优化被引量：6
- 2017年
- 以淀粉为底物,通过麦芽寡糖基海藻糖合成酶(maltosyltrehalose synthase,MTSase)和麦芽寡糖基海藻糖水解酶(maltosyltrehalose hydrolase,MTHase)的共同作用生产海藻糖是一种经济高效的方法。对Arthrobacter ramosus S34来源并分别在E.coli BL21(DE3)中表达的MTSase和MTHase的酶学性质进行研究,发现MTSase的最适温度为45℃,最适pH为7.0,MTHase的最适温度为55℃,最适pH为6.0。随后用2种酶共同作用生产海藻糖,优化反应条件,考查反应温度、初始pH、底物DE值、加酶量以及底物浓度等因素对酶转化过程中海藻糖产率的影响。最佳酶转化条件为反应温度45℃、初始pH5.5,底物DE值8.5,加酶量分别为MTSase最小加量15.75 U/g淀粉,MTHase最小加量7.5 U/g淀粉。
- 王魁宿玲恰吴敬陈晟
- 关键词：海藻糖SYNTHASEHYDROLASE酶学性质
- 诺卡氏菌酰胺酶在大肠杆菌中的重组表达及其在锦纶改性中的应用被引量：1
- 2013年
- 将来源于诺卡氏菌(Nocardia farcinica)的酰胺酶在E.coli中进行了重组表达。构建了重组表达质粒pET24a/AMID,转入宿主菌E.coliOrigami(DE3)中,0.4 mmol/L IPTG,25℃诱导20 h后,酶活为1.02 U/mL。在此基础上,考察了重组酰胺酶在PA改性中的应用。通过优化温度、pH、处理时间和摇床转速等因素对酶处理的影响,确定了酶处理的最优条件为:40℃,pH7.5,处理时间1 h,摇床转速100 r/min,在该处理条件下,与磷酸缓冲液对比,PA吸水高度提高了8.7 cm,上染率提高了23.1%,基本能够达到碱处理的效果。
- 郭迎春陈晟宿玲恰吴敬
- 关键词：酰胺酶诺卡氏菌大肠杆菌
- 地衣芽孢杆菌几丁质酶在枯草芽孢杆菌中的重组表达及其制备氨基寡糖的研究被引量：2
- 2022年
- 将地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)来源的几丁质酶基因blchiA在枯草芽孢杆菌(B.subtilis)中进行重组表达,构建了枯草芽孢杆菌工程菌株(B.subtilisWS9/pHY300PLK-blchiA),发酵上清液的酶活为0.73 U·mL^(-1)。对重组酶BLCHIA的酶学性质进行表征,其在pH 6.0和60℃时表现出最佳活性,比活为3.68 U·mg^(-1)。10 mmol·L^(-1)的铜离子(Cu^(2+))和亚铁离子(Fe^(2+))对其活性有一定促进作用,在pH 5.0~8.0和50~60℃下稳定性较好。此外,研究表明重组酶对脱乙酰度>95%的壳聚糖的催化能力明显优于胶体几丁质,并且水解胶体几丁质和壳聚糖的产物类型具有明显差异,以胶体几丁质为底物主要生成几丁二糖,以壳聚糖为底物可生成聚合度为2~7的壳寡糖。研究获得的重组酶BLCHIA在壳聚糖降黏和制备不同聚合度的低聚糖方面具有良好的应用前景。
- 袁源宿玲恰张康朱昫飏夏伟夏伟
- 关键词：几丁质酶枯草芽孢杆菌
