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方惠英: 作品数：13 被引量：105H指数：7; 供职机构：江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室更多>>; 发文基金：高等学校骨干教师资助计划国家自然科学基金教育部重点实验室开放基金更多>>; 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程农业科学更多>>

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地衣芽孢杆菌感受态细胞的诱导形成及其高效电转化方法被引量：11: 2002年; 通过体外处理诱导地衣芽孢杆菌产生感受态性能 ,同时调整参数 ,建立了感受态细胞对质粒 pAPR的高效电转化方法 .当质粒DNA为 1.5 μg/mL、转化时电压为175 0V时 ,可得到 2 6 1个转化子 ,经鉴定均为阳性克隆子 .此为以芽孢杆菌为宿主进行高效电转化及为建立适合工业应用的分泌型表达载体提供参考 .; 唐雪明邵蔚蓝王正祥方惠英诸葛健; 关键词：地衣芽孢杆菌感受态细胞分泌型表达载体

金属铜、锰离子对粗糙脉孢菌漆酶合成的影响被引量：6: 2005年; 研究了金属离子铜、锰对粗糙脉孢菌合成漆酶的影响。结果表明:10μmol/L的铜离子产生的漆酶活力最高(4·01U/ml),是不加铜离子的2·62倍;150μmol/L的锰离子产生的漆酶活力最高(5·05U/ml),是不加锰离子的4·1倍。说明适量的金属离子铜、锰对粗糙脉孢菌合成漆酶是有利的,但是这一合成调控的机制有待进一步深入研究。; 谌斌唐雪明方惠英诸葛健; 关键词：粗糙脉孢菌锰离子铜离子

影响根癌农杆菌的电击转化条件被引量：12: 2005年; 采用电击转化方法将双元载体质粒pCAM3300导入根癌农杆菌LBA4404,研究了不同实验条件对转化率的影响.结果表明:当电场强度为11 kV/cm时,转化率最高,每微克DNA得到9.8×103CFU;在细胞OD600为1.0时进行电转化,转化率最高,每微克DNA得到9.54×103CFU;在一定的细胞浓度范围内,电击转化率与细菌浓度密切相关,转化率随着细菌浓度的上升而上升;质粒大小与电击转化率之间没有明确的关系.将含pCAMBIA3300的根癌农杆菌与粗糙脉胞菌共培养转化,在含有膦化麦黄桐(PPT)(405 mg/L)的平板上筛选到转化子.PCR扩增转化子的染色体,初步证明Bar基因整合进粗糙脉胞菌的染色体中.; 匡小婴饶志明沈微方惠英诸葛健; 关键词：根癌农杆菌

粗糙脉孢菌突变菌株合成漆酶的发酵条件研究被引量：1: 2005年; 研究了影响粗糙脉孢菌突变菌株合成漆酶的一些摇瓶发酵条件,包括通气量、培养温度、甲醇浓度、Cu2+浓度等。结果表明,在500m L三角瓶中装入含150μm olL/C u2+浓度的发酵培养基B M M Y 50m L,接种后于30℃,200rm/in培养7d,用0.5%甲醇诱导,在第5天时漆酶酶活最高可达3.88u m/L。; 谌斌唐雪明沈微方惠英诸葛健; 关键词：粗糙脉孢菌突变菌株漆酶发酵条件

地衣芽孢杆菌2709和6816碱性蛋白酶基因在大肠杆菌中的克隆、表达及序列分析被引量：17: 2002年; 用PCR方法从地衣芽孢杆菌 2 70 9和 6 816中扩增了碱性蛋白酶基因 (apr1和apr2 ) ,扩增的DNA片段插入到大肠杆菌载体 pET -2 8a中 ,构建成重组分泌型表达载体pAPR1、pAPR2 .pAPR1、pAPR2中碱性蛋白酶基因在大肠杆菌宿主JM 10 9(DE3)中得到表达 .SDS -PAGE分析显示融合表达产物的分子量均为 30 .5× 10 3 ,同核酸序列测定所推导的值相符 .表达产物分别占细胞总蛋白的 8.0 %和 7.5 % .2 70 9重组菌所得酶活为 12 10u/mL ,6 816重组菌所得酶活为 1175u/mL .研究发现 ,重组的碱性蛋白酶在进入大肠杆菌周质空间时可能存在前肽自动脱落的现象 .同时 ,对地衣芽孢杆菌 2 70 9碱性蛋白酶基因序列进行了测定和比较分析 ,发现与地衣芽孢杆菌 6 816碱性蛋白酶基因的同源性为 98% .图 5参; 唐雪明邵蔚蓝沈微王正祥方惠英诸葛健; 关键词：地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶基因大肠杆菌克隆

地衣芽孢杆菌感受态细胞的形成及高效电转化被引量：5: 2002年; 芽孢杆菌在营养缺乏的饥饿状态下 ,细胞易产生感受态因子 ,处于生长芽孢时期的芽孢杆菌更容易产生感受态。基于此原则利用芽孢杆菌极限营养培养基通过体外处理诱导使地衣芽孢杆菌产生感受态性能 ,同时调整参数 ,建立了感受态细胞对质粒pAPR的高效电转化方法。当质粒DNA浓度为 1 .5μg/ml、转化时电压为 1 750V的时候 ,可以得到 2 6 1个转化子 ,经鉴定均为阳性克隆子。而常规电转化的最高仅为 2 0个转化子。为以芽孢杆菌为宿主进行高效电转化提供了模型。; 唐雪明邵蔚蓝王正祥方惠英诸葛健; 关键词：地衣芽孢杆菌感受态细胞

诱导条件下营养因子对粗糙脉孢菌合成漆酶的影响被引量：3: 2006年; 研究了粗糙脉孢菌合成漆酶的一些重要影响因素,包括诱导剂种类、碳源、氮源。获得了粗糙脉孢菌合成漆酶的较适宜条件:以20g/L葡萄糖为碳源,2g/L硝酸铵为氮源,粗糙脉孢菌静止培养2～3d后,再加入放线菌酮(终浓度2.8μmol/L)诱导培养6～7d后产生的漆酶的最高酶活可达4～5u/mL。; 谌斌唐雪明沈微方惠英诸葛健; 关键词：粗糙脉孢菌诱导剂营养因子

一株降解除草剂膦化麦黄桐(PPT)菌的筛选与鉴定被引量：3: 2005年; 从喷洒有除草剂的土壤中分离到一株能分解膦化麦黄桐(PPT)的细菌.该菌在以PPT为唯一碳源的培养基上生长,能利用PPT的最高浓度为2. 7g/L.采用常规生理生化鉴定方法,并结合16SrDNA序列分析法对该菌进行鉴定.结果表明,该菌与生癌肠杆菌(Enterobactercancerogenus)序列相似性为99. 3%,在细菌分类学上属于肠杆菌.将它命名为Enterobactersp. PPT.; 匡小婴饶志明沈微赵有玺方惠英诸葛健; 关键词：生物降解菌 RDNA

红曲霉发酵产胞外多糖工艺的优化被引量：20: 2002年; 研究了碳源、氮源和无机盐对红曲霉Y 7产多糖的影响 ,优化并确定了产胞外多糖的培养基组成 :麦芽糖 6 0 g/L ,蛋白胨 2 .5g/L ,磷酸二氢钾 4 g/L ,硫酸镁 0 .5 g/L ,氯化钙 0 .6 g/L .研究了油脂对胞外多糖的影响 ,并确定棕榈油的添加量为 0 .2 g/dL .在 5 0 0mL的三角瓶装培养基 75mL ,接种量 15 % ,种子液种龄 2 4h ,培养温度 33℃ ,摇床转速 2 2 0r/min ,培养 96h .在上述条件下生物量干重为 1.4 2 g/dL ,发酵液胞外多糖产量可达 3.2 4 g/L ,比初始条件高出 2 .5倍 .; 赵振锋方惠英诸葛健; 关键词：胞外多糖生产工艺