黄蓓 作品数:52 被引量:125 H指数:8 供职机构: 安徽大学生命科学学院 更多>> 发文基金: 安徽省自然科学基金 安徽省教育厅重点项目 安徽省科技攻关计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 轻工技术与工程 更多>>
动脉钙化发生机制研究进展 被引量:4 2010年 动脉钙化是指钙盐沉积在动脉壁组织的一种病理改变,会减少主动脉和支动脉的弹性,改变心血管系统的血液流动力学,导致高血压、主动脉瓣狭窄、心脏肥厚、心肌和下肢缺血、充血性心力衰竭等严重心脑血管疾病发生。动脉钙化在老年人群中是一种常见的疾病。早期研究发现尿毒症患者体内磷酸钙沉积的抑制剂——焦磷酸盐水平升高,故有学者认为钙磷被动地沉积于血管壁是引起血管钙化的主要原因。近年来的研究发现,血管钙化并非简单地由于磷酸钙晶体被动地沉积于血管壁,而是一个与骨发育相似的主动的、可预防和可逆转的高度可调控的生物学过程。动脉钙化的发生受多因素共同调控,但其确切机制尚不清楚,最近发现炎症小体也以某种未知的机制参与钙化调控过程。 程孝中 黄蓓 钟辉关键词:动脉钙化 血管平滑肌细胞 人MAVS小干扰RNA质粒的构建及稳定干扰MAVS细胞株的筛选 被引量:1 2008年 目的:构建人线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)的小干扰RNA真核表达质粒,并筛选出稳定干扰MAVS的细胞株。方法:根据文献报道的序列和载体的黏性末端,设计合成2条针对MAVS的DNA序列,退火后连接到载体pSUPER.retro.neo^+gfp上,经测序分析正确后,质粒命名为psiMAVS。用脂质体转染质粒到MCF-7细胞中,经G418加压筛选稳定表达MAVS小干扰RNA的细胞株,用免疫印迹检测细胞中MAVS的表达情况,将干扰效果好的细胞株命名为MCF-7/siMAVS,再用荧光素酶试验检测MCF-7/siMAVS细胞对外源MAVS或poly(dA-dT)诱导干扰素-β(IFN-β)转录的情况。结果:免疫印迹结果证实建立的稳定细胞株MCF- 7/siMAVS能够有效干扰MAVS的表达,并在外源MAVS或poly(dA-dT)存在的情况下,抑制IFN-β的转录活性。结论:构建了表达MAVS小干扰RNA的质粒psiMAVS。筛选出稳定干扰MAVS表达的细胞株MCF-7/siMAVS,为深入研究MAVS在先天免疫中的作用提供了平台。 贾永侠 赵帆 马红芳 李力 黄蓓 郑子瑞 宋婷 魏从文 何湘 张艳红 钟辉关键词:MAVS 转录活性 线粒体抗病毒信号蛋白MAVS真核表达质粒的构建及表达 2008年 目的:构建线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)真核表达质粒。方法:从人胚肾细胞系HEK293T细胞的总RNA中经过逆转录和PCR获得MAVS的全长cDNA双链片段,经过酶切后连接到真核表达载体pcDNA3/flag中,挑选出转化生成的阳性克隆进行测序,将序列正确的重组质粒命名为pcDNA3/flag-MAVS。借助脂质体转染pcDNA3/flag-MAVS质粒到HEK293T细胞中,用Western印迹检测目的蛋白的表达。同时用β干扰素的荧光素酶报告基因(IFN-β-luc)检测MAVS蛋白活性。结果:Western印迹实验证明pcDNA3/flnag-MAVS可以在HEK293T细胞中表达MAVS,并且能使IFN-β报告基因活性明显增强。结论:构建了重组质粒pcDNA3/flag-MAVS,在细胞中表达MAVS后具有刺激IFN-β转录的生物活性。 倪才飞 赵帆 郑子瑞 黄蓓 马红芳 李力 宋婷 魏从文 何湘 张艳红 钟辉关键词:MAVS IFN-Β 荧光素酶报告基因 藻蓝蛋白亚基脂质体制备及其光动力学抗肿瘤作用实验 被引量:10 2008年 本研究建立了藻蓝蛋白亚基脂质体的制备方法,检测其对肿瘤细胞转染及光动力杀伤作用(PDT)效果。采用薄膜水合.超声分散法制备藻蓝蛋白亚基脂质体,测定其粒径大小及分布,荧光显微镜观察藻蓝蛋白亚基(PCS)及其脂质体(PCS—lip)的细胞转染率,M1T法检测藻蓝蛋白亚基及其脂质体对肿瘤细胞光动力杀伤效果。结果显示脂质体的粒径为80~160nm,包封率为42.3%;在质量浓度为100ug·mL^1时,藻蓝蛋白亚基脂质体对小鼠肉瘤细胞S180转染率在2h达到(18.5±0.8)%,4h为(23.1±0.9)%,5~6h转染率不再上升。肿瘤细胞光动力杀伤实验表明,在0~200ug·mL^-1内,光照剂量为22J·cm^-2时,随着藻蓝蛋白亚基及其脂质体浓度的增加,对胃癌细胞BGC-823和S180的光敏作用也随之增强;在200ug·mL^-1时PCS—lip对两种细胞生存率分别降低为(45±5.2)%和(36±5.5)%,PCS—lip—PDT组与PCS—PDT组对细胞生存率影响有显著性差异(P〈0.05)。研究结果表明,藻蓝蛋白亚基脂质体可很好地保持藻蓝蛋白亚基的生物活性,在相同蛋白浓度时藻蓝蛋白亚基脂质体比藻蓝蛋白亚基更快地转染进肿瘤细胞,药物作用的最佳时间为4h。在相同浓度及光照剂量的情况下,藻蓝蛋白亚基脂质体对肿瘤细胞的光动力学作用略强于藻蓝蛋白亚基。 郭瑞勇 黄蓓 左漫漫 王永中 胡玲关键词:脂质体 细胞转染 光动力学疗法 RNA病毒遗传重组研究进展 被引量:1 2007年 查向东 张部昌 黄蓓 刘兢 徐康森关键词:RNA病毒 基因组 进化 LKB1(Thr336)磷酸化多克隆抗体的制备及其应用 被引量:4 2008年 目的制备LKB1(Thr336)磷酸化多克隆抗体,并以其检测细胞中LKB1的表达。方法用生物信息学方法选取LKB1Thr336位点附近10个氨基酸,且使Thr336位点磷酸化,并铰链到BSA上。以此为抗原免疫家兔,制备抗血清,纯化后通过ELISA法检测抗体效价,Westernblot法检测抗体特异性,并用LKB1抗体和p-LKB1(Thr336)抗体分别检测正常细胞及肿瘤细胞中LKB1的表达。结果纯化后的p-LKB1(Thr336)抗体效价为1∶1000;LKB1抗体不仅识别His-LKB1蛋白,而且识别p-LKB1(Thr336)抗原,而p-LKB1(Thr336)抗体仅识别p-LKB1(Thr336)抗原;在正常细胞HL7702和HEK293中,LKB1表达较多,而在HeLa细胞中,LKB1基本没有表达;在这3种细胞中,p-LKB1(Thr336)基本没有表达;在肿瘤细胞S180、COS-7和Caco2中,LKB1和p-LKB1(Thr336)均有表达,p-LKB1表达相对较多。结论已制备了特异性的p-LKB1(Thr336)多克隆抗体,LKB1-Thr336位点的磷酸化可能是某些肿瘤发生的特征,有望成为肿瘤诊断的指标之一。 任艳敏 黄蓓 魏浩 赖柳静关键词:磷酸化 多克隆抗体 生物信息学 肿瘤细胞 PRAS40(Ser183)磷酸化多克隆抗体的制备及检测 2009年 PRAS40为富含脯氨酸、分子量为40kD的Akt底物蛋白,能够与雷怕霉素哺乳动物细胞靶点复合物1(mTORC1)结合,其苏氨酸183位点(Ser183)可被mTORC1磷酸化。为了制备PRAS40(Ser183)磷酸化多克隆抗体,本实验通过蛋白疏水性抗原性分析设计多肽抗原,用其免疫家兔获得抗血清,ELISA检测其效价为1:10000;Western blotting法检测发现,通过rProtein A Sepharose亲和层析纯化并经非磷酸化的抗原条吸附处理后的抗体可以明显提高磷酸化抗体的特异性;用PRAS40抗体及PRAS40(Ser183)磷酸化抗体对正常细胞HL7702、HEK293及肿瘤细胞HepG2、A549、S180的检测显示:磷酸化的Ser183在不同细胞中表达差异不显著,而在经细胞饥饿处理的HEK293细胞中却明显观察到了S183磷酸化水平随氨基酸含量降低而减弱的现象。因此,本实验所制备的抗体可用于PRAS40(Ser183)磷酸化位点的功能研究。 魏皓 黄蓓 徐昌志 郑竹霞 白宇低剂量藻毒素MC-LR促肝癌发生作用及机理探讨 水华蓝藻优势种微囊藻产生的藻毒素危害巨大,其结构为环状七肽,目前发现有60多种异构体。其中以MC-LR、RR、YR毒性最大。MC-LR作为一种肝毒素,能够引起肝肿胀、肝炎,甚至诱发肝癌。目前对其毒性机理的研究公认的是MC... 徐昌志 孙韩艳 黄蓓关键词:促癌作用 MTOR信号通路 文献传递 藻毒素MC-LR促二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌模型建立的方法 被引量:2 2012年 肝癌动物模型有助于肝癌发病过程中分子机制的研究。二乙基亚硝胺(DEN)是一种众所周之的化学致癌剂,已被广泛用于动物肝癌模型的建立。藻毒素MC-LR是一种由蓝藻产生的环状七肽毒素,其低浓度的慢性毒性具有潜在的促癌作用。该实验以DEN联合不同浓度的藻毒素MC-LR通过腹腔注射共同诱发大鼠肝癌模型。从形态学、病理学角度分别观察大鼠肝脏外观和肝细胞的变化;从蛋白质水平运用免疫印迹法检测谷胱甘肽-S-转移酶(GST-Pi)的表达情况。结果表明,模型组中大鼠肝癌癌变过程大致经过肝细胞损伤期、肝细胞增生–硬化期和肝细胞癌变期三个阶段。其中,DEN联合终浓度为10μg/kg的藻毒素MC-LR处理时促癌效果最佳。该方法可作为一种新型的大鼠肝癌模型建立方法为今后的研究奠定基础。 孙韩艳 徐昌志 汪宇 李玉成 黄蓓一种在荧光显微镜下同时观察贝螅间质细胞及神经细胞发育的方法 1994年 用Brdu及FITC同时标记贝螅s期的间质细胞及神经细胞的免疫细胞化学法,不但操作简单,大大缩短实验时间,而且还可避免用同位素H ̄3-Thymindin标记放射自显影所带来的射线危害。在做成的同一张片子上可通过调节改变荧光显微镜光源的色彩来观察分化前的间质细胞与分化后的神经细胞。在观察两者相互关系上有独特的效果。 黄蓓关键词:荧光显微镜 神经细胞 间质