张涛
- 作品数：11 被引量：58H指数：3
- 供职机构：中国医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：沈阳市科学技术计划项目国家重点基础研究发展计划辽宁省科学技术计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 序贯法诱导小鼠胚胎干细胞向神经元样细胞的分化被引量：2
- 2009年
- 背景:目前小鼠胚胎干细胞体外向神经方向诱导分化的研究报道诸多,但其分化的过程很难控制,很多实验的操作方法复杂,分化比率也很低。目的:建立一种稳定、高效、简便的实验方法,将小鼠胚胎干细胞诱导分化为神经细胞。设计、时间及地点:对比观察实验,于2006-08/2008-01在中国医科大学发育生物学教研室完成。材料:小鼠胚胎干细胞系AB2.1,由美国南加州大学医学院惠赠。方法:在饲养层细胞上培养小鼠胚胎干细胞,采用"序贯诱导法",优化实验条件,将小鼠胚胎干细胞向神经方向诱导,对诱导后细胞进行成熟神经细胞标志物鉴定,并用流式细胞仪测定诱导分化比率。主要观察指标:①倒置荧光显微镜下观察小鼠胚胎干细胞形态特征。②优化序贯诱导法的3个实验条件。③实验条件优化后诱导至第10天分化细胞的形态特征。④诱导后第10天细胞免疫荧光法和蛋白免疫印迹检测神经细胞特异性标志物的表达。⑤蛋白免疫印迹检测诱导分化第4天和第10天细胞的神经细胞β-微管蛋白J1的表达。⑥流式细胞仪检测神经元特异性核蛋白阳性细胞百分比。结果:①生长于饲养层上的未分化鼠胚胎干细胞聚集呈圆形或椭圆形集落样生长,细胞排列紧密,集落边界清楚。②优化后的"序贯诱导法"在诱导时首次接种所用培养液的血清浓度为12.5%,小鼠胚胎干细胞首次接种最佳密度为1.0×108L-1,完全更换为无血清培养液的时间为第5天。③诱导至第10天分化细胞出现的突起可达胞体长度的10倍以上。也有小部分分化细胞胞体呈多边形,有多个短突起,仅有一个细长突起,出现突触样结构和生长端样结构,类似神经元。④诱导后第10天细胞免疫荧光法检测神经元特异性标志物巢蛋白、神经细胞β-微管蛋白J1、神经元特异性核蛋白、神经细胞黏附分子1表达阳性,神经胶质细胞标志物胶质细�
- 李晓丰顾文佳刘朝阳张涛刘晓玉庞希宁
- 关键词：胚胎干细胞神经元诱导分化
- 神经元限制性沉默因子与大鼠骨髓间充质干细胞向神经元诱导分化的关系
- 2009年
- 目的分析神经元限制性沉默因子(NRSF)以及NRSF调控的基因在β-巯基乙醇诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经元分化过程中表达的变化,探讨NRSF在大鼠MSCs向神经元分化的作用及MSCs向神经元分化的机制。方法采用β-巯基乙醇、无血清的DMEM培养液和二甲基亚砜诱导大鼠MSCs分化成神经元,再通过实时定量PCR分析NRSF以及NRSF调控的基因在诱导前后表达的变化。结果应用β-巯基乙醇、无血清DMEM培养液和二甲基亚砜的诱导方案可以将MSCs诱导分化成神经元样细胞,诱导后的细胞神经元标记物神经元特异性烯醇化酶呈阳性,实时定量PCR检测NRSF基因表达显著下调,NRSF的靶基因神经营养酪氨酸激酶三型受体、突触相关蛋白25、L1细胞黏附分子、神经元钙结合蛋白受体表达有不同程度的上调。结论MSCs的神经元分化与NRSF下调及其调控的神经元分化相关基因表达上调有关。NRSF很可能是MSCs向神经元方向分化的关键基因,抑制NRSF表达可能是促进MSCs向神经元分化的关键步骤。
- 刘斌李宏图张涛孟凡彪刘晓玉庞希宁
- 关键词：骨髓间充质干细胞神经元限制性沉默因子分化神经元
- 人脂肪间充质干细胞对皮肤创伤修复的作用被引量：22
- 2013年
- 目的探讨人脂肪间充质干细胞（hADSCs）皮内移植对小鼠皮肤创面修复的作用，为临床皮肤创伤后修复提供新的细胞治疗方法奠定基础。方法分离培养hADSCs，取3～5代细胞通过免疫荧光法检测间充质干细胞相关的细胞表面标志物CID0、CD105、CD34和CD45的表达，并分别置于骨、软骨和脂肪诱导分化培养基中进行诱导分化，检测其多向分化潜能。在实验小鼠背部制备一个面积为1cm×1 cm的皮肤创面，将磁性纳米颗粒标记的hADSCs以皮内注射方式移植到小鼠创面四周。分别于伤后0、7和14d观察创面愈合情况，并与对照组进行比较分析。结果人脂肪间充质干细胞表达CD90和CD105，不表达CD34和CD45，具有骨，软骨，脂肪诱导分化潜能；实验小鼠皮肤创伤后3d开始，可见各组创面逐渐缩小，伤后21d创面愈合。移植组于创伤后第7天创面愈合率为（74．6％±4．1％），14d为（96．5％±1．5％），均显著高于对照组7d的（26．7％±1．9％），14d的（47．3％±2．3％），（P〈0．05）。结论hADSCs移植能够提高小鼠皮肤创面愈合的速度。
- 刘晓玉王瑞张涛庞希宁施萍
- 关键词：脂肪间充质干细胞创伤愈合
- 水通道蛋白1促进人羊膜间充质干细胞的迁移被引量：1
- 2013年
- 目的探讨水通道蛋白1(AQP1)在人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)迁移中的作用。方法免疫荧光染色、RTqPCR及Western blot检测hAMSCs AQP1的表达,siRNA干扰AQP1后,应用Transwell小室检测hAMSCs的迁移能力。结果 hAMSCs细胞膜上AQP1表达阳性。siRNA干扰AQP1 48 h后AQP1 mRNA表达水平降低60.13%;AQP1的蛋白表达水平降低40.42%。siRNA干扰组穿过细胞数目为23.7±1.45显著低于对照组的33.15±1.15(P<0.01)。结论 AQP1促进人羊膜间充质干细胞的迁移,推测AQP1参与创伤的修复过程。
- 张涛庞希宁施萍王竟王喜良
- 关键词：水通道蛋白1细胞迁移人羊膜间充质干细胞创伤修复
- EGF对hAMSCs基因表达谱影响及生物信息学分析被引量：3
- 2013年
- 目的探讨表皮生长因子(EGF)对人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)基因表达谱影响及分子机制。方法采用基因表达谱测序(Illumina RNA-Seq)技术和生物信息学分析方法,对100 ng/mL EGF干预前后的hAMSCs基因表达测序比对,确定hAMSCs基因表达谱,RT-PCR检测进行验证。结果筛选出差异表达基因104个(FDR≤0.001和|log2Ratio|≥1),其中上调差异表达基因56个,下调差异表达基因48个;GO生物学过程富集分析26个生物学过程具有显著性差异(P≤0.05);KEGG信号通路富集分析细胞因子与细胞因子相互作用信号通路具有显著性差异(Q≤0.05),RT-PCR检测验证与基因表达谱结果一致。结论 EGF干预hAMSCs引起基因表达谱的变化,显著差异表达的基因和信号通路可能在hAMSCs增殖和迁移及促进创伤修复过程中具有重要作用。
- 庞希宁李彩虹施萍王竟刘晓玉张涛张殿宝赵峰
- 关键词：表皮生长因子人羊膜间充质干细胞基因表达谱生物信息学
- 人羊膜间充质干细胞来源外泌体的提取与鉴定被引量：3
- 2020年
- 目的探索人羊膜间充质干细胞来源外泌体(hAMSC-Exos)的分离、纯化与鉴定方法,为外泌体的生物学功能研究奠定基础。方法由废弃的羊膜提取间充质干细胞;采取改良超速离心法分离、纯化培养液上清中的hAMSC-Exos;透射电镜观察、纳米粒子跟踪分析技术(NTA)、Western blot和流式细胞术用于hAMSC-Exos的鉴定外泌体。结果成功用改良超速离心法分离出hAMSC-Exos,透射电镜(TEM)下观察呈中间凹陷的茶杯样结构;NTA结果显示样品直径符合外泌体直径大小;Western blot和流式细胞术证实外泌体表面特异性蛋白CD9、CD63、CD81表达阳性。结论建立了hAMSC-Exos的提取纯化及鉴定方法,为它后续的研究提供依据。
- 陈萌赵峰李莹张焜张涛王瑞庞希宁
- 关键词：人羊膜间充质干细胞外泌体
- 局部低温深度对大鼠脊髓缺血损伤保护程度的相关性研究被引量：2
- 2003年
- 目的:研究局部低温的深度与大鼠脊髓缺血损伤保护程度的相关性。方法:通过向大鼠胸腰椎蛛网膜下腔灌注不同温度的生理盐水,将4组动物脊髓核心温度分别控制在38℃、34℃、30℃、18℃4个水平。阻断胸主动脉控制脊髓近端动脉压。观察动物截瘫数及截瘫指数并作组织学检查。结果:实验动物的截瘫数及截瘫指数随着低温温度的降低而降低。组织学检查显示随着低温温度降低,脊髓缺血损伤逐渐减轻。结论:与轻、中度低温相比,深度低温对脊髓缺血损伤的保护作用更显著,局部低温的深度与大鼠脊髓缺血损伤保护程度呈正相关。
- 路磊段志泉张强张涛
- 关键词：脊髓缺血
- NRSE/RE-1序列与小鼠胚胎干细胞向神经细胞诱导分化的关系
- 2009年
- 目的探索神经限制性沉默元件(NRSE/RE-1)序列与小鼠胚胎干细胞向神经细胞诱导分化的关系。方法应用序贯诱导法定向诱导鼠胚胎干细胞分化为神经细胞,基因芯片筛选出的11种含NRSE/RE-1序列的神经相关基因,实时定量PCR测定其在分化过程中的表达。结果诱导分化后的胚胎干细胞表达多种成熟神经元标志,11种含NRSE/RE-1序列基因随诱导分化的进程表达量升高。结论鼠胚胎干细胞可通过序贯诱导分化为神经细胞,NRSE/RE-1序列可能是胚胎干细胞向神经元诱导分化的主要调控位点。
- 张涛顾文佳刘晓玉庞希宁
- 关键词：胚胎干细胞神经元细胞分化
- IVF短时受精补ICSI与其它受精方式临床结局的比较
- 2013年
- 【目的】比较短时受精补卵细胞胞质内单精子注射（ICSI）与短时受精、ICSI周期的临床应用结局。【方法】收集体外受精-胚胎移植（IVF-ET）的患者6897例，IVF短时周期4060例（A组），IVF短时补ICSI周期1177例（B组），ICSI周期1660例（c组），比较三组受精率、妊娠率及流产率。【结果】A组、B组、C组正常受精率分别为74．07％、69．08％、83．16％，三组比较差异有统计学意义（Pd0．05）；A组、B组、c组临床妊娠率、流产率分别为44．8％、11．1％，43．0％、11．9％，43．9％、10．9％，三组临床妊娠率、流产率比较均无统计学差异（P〉O．05）。【结论】短时受精补ICSI组的正常受精率低于短时受精、ICSI周期组，但体外受精的临床临床妊娠率及流产率无统计学差异，故短时受精补ICSI是辅助生殖值得采用的受精方法。
- 李彩虹程岽凯孙晓玲于洪君许展张涛翁宁
- 关键词：受精
- 靶向REST基因TALEN质粒的快速构建与活性检测被引量：1
- 2016年
- 目的针对人REST基因设计并构建特异性类转录激活因子效应物核酸酶(TALEN)质粒,快速获得具有较高突变效率的TALEN。方法根据REST的序列信息设计TALEN靶位,使用单元组装的方法快速构建TALEN质粒,在293T细胞中进行活性检测并计算突变效率。结果针对REST设计并成功构建5个TALEN质粒,组成6对TALEN并实现基因打靶,其中L1和R3组合的突变效率达到60.9%。结论成功获得了靶向人REST基因的高效TALEN,为进一步研究REST的基因功能及其在相关疾病中的作用奠定基础。
- 张殿宝赵峰张涛林学文王瑞施萍庞希宁
- 关键词：REST质粒构建活性检测
