柏吉祥 作品数:46 被引量:75 H指数:4 供职机构: 青海省地方病预防控制所 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 青海省自然科学基金 青海省科技计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 农业科学 一般工业技术 更多>>
甘肃省鼠疫耶尔森菌对11种抗菌药物体外抑菌活性研究 被引量:1 2020年 目的检测甘肃省鼠疫自然疫源地分离的46株鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)对11种抗菌药物最低抑菌浓度,掌握该地区鼠疫菌株对11种抗菌药物的敏感性,为有效防治鼠疫提供科学依据。方法参照美国临床和实验室标准协会(CLSI)2017-M100药敏试验方法中的琼脂稀释法,测定氧氟沙星、环丙沙星、复方新诺明(甲氧苄啶-磺胺甲恶唑)、硫酸卡那霉素、硫酸链霉素、头孢曲松钠、氨苄西林、氯霉素、盐酸壮观霉素、头孢呋辛钠和盐酸四环素共11种抗生素对46株鼠疫菌的最低抑菌浓度(MIC)。结果所测的46株鼠疫菌中均未发现对上述11种抗生素具有单个或多个抗菌药物抗性的鼠疫菌株;11种抗菌药物对鼠疫菌的体外抑菌活性以头孢曲松钠的最高(MIC90,0.03μg/ml),其次分别为环丙沙星(MIC90,0.06μg/ml),甲氧苄啶-磺胺甲恶唑(MIC90,0.12μg/ml),氧氟沙星(MIC90,0.25μg/ml),氨苄西林(MIC90,0.50μg/ml),头孢呋辛钠(MIC90,1.00μg/ml),硫酸卡那霉素、硫酸链霉素、盐酸四环素和氯霉素的MIC90均为4.00μg/ml,盐酸壮观霉素的抑菌活性在11种抗菌药物中最低(MIC90,16.00μg/ml)。结论甘肃省鼠疫疫源地分离的46株鼠疫菌对上述11种抗菌药物均敏感。应继续进行耐药菌株监测以便早期发现耐药菌,针对致病病原体,合理选择抗菌药物,制定个体化给药方案。 李胜 何建 杨晓艳 辛有全 靳娟 张琪 柏吉祥 杨汉青 吴海莲 代瑞霞关键词:鼠疫耶尔森菌 抗菌药物 体外抑菌活性 TaqMan-小沟结合物荧光探针对青海省青南地区104株鼠疫菌链霉素耐药基因rpsL突变位点的筛查 2023年 目的了解青海省青南地区rpsL基因点突变引起鼠疫菌耐链霉素的现状,为今后青南地区突发人间鼠疫的精准临床用药及预防耐药发生提供理论依据。方法筛选1957—2009年青海省青南地区取自鼠疫患者、媒介昆虫体内及中间宿主的104株代表性鼠疫菌,用赫氏平皿进行分离培养,采用十二烷基磺酸钠裂解和苯酚-氯仿法提取代表性鼠疫菌的DNA,针对我国链霉素耐药基因rpsL基因设计引物及TaqMan-小沟结合物(minor groove binder,MGB)探针Probe1[FAM]和Probe2[VIC],利用TaqMan-MGB荧光探针的实时荧光聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术,对青南地区104株鼠疫菌链霉素耐药位点rpsL基因的突变情况进行检测。结果青南地区104株被试菌株FAM检测结果均为阳性,对应检测rpsL(128:A),相对荧光单位(relative fluorescence unit,RFU)峰值>1000,阴性<200。所有被试菌株VIC检测结果均为阴性,对应检测rpsL(128:G),RFU峰值<200,阳性>1000。即青南地区104株鼠疫菌中未发现耐链霉素rpsL基因点突变菌株。结论了解到青南地区鼠疫菌耐链霉素菌株分布情况,为青南地区预防耐药发生以及鼠疫菌临床治疗提供了基础数据。 柏吉祥 辛有全 李胜 靳娟 张琪 杨晓艳 金泳 彭文轩 代瑞霞 何建关键词:鼠疫菌 RPSL基因 青海省海西州鼠疫自然疫源地鼠疫菌病原学及耐药、耐消毒剂基因特征分析 被引量:5 2019年 目的 分析青海省海西州鼠疫自然疫源地鼠疫菌株生物学特性,为鼠疫防治提供科学依据。 方法 对1957 - 2011年在青海省海西州分离的181株鼠疫菌进行生化试验、毒力因子鉴定、质粒分析、差异片段(DFR)分型及耐药、耐消毒剂基因检测研究。从181株鼠疫菌中选取79株进行毒力测定,并按毒株判定标准[最小致死量(MLD)≤10 000为强毒菌,10 000 < MLD < 100 000为中等毒力菌,MLD≥100 000为弱毒菌]进行分类。 结果 181株鼠疫菌的生物型均为古典型,生态型均为青藏高原型。81.22%(147/181)的鼠疫菌株含有4个毒力因子(F1、PstⅠ、VW、Pgm);63.54%(115/181)的鼠疫菌株携带相对分子质量(Mr)为6 ×10^6、45 ×10^6、52 ×10^6的质粒,31.49%(57/181)的鼠疫菌株携带Mr为6 ×10^6、45 ×10^6、65 ×10^6的质粒。DFR分为8个基因组型,分别为8型(109株)、32型(33株)、5型(20株)、1b型(14株)、44型(2株)、7型(1株)、37型(1株)、49型(1株);未发现有耐链霉素、磺胺类药、β-内酰胺类抗菌药物及消毒剂等相关基因的菌株。79株进行小鼠毒力测定的鼠疫菌中,有75株菌的MLD≤10 000,即为强毒菌,占94.94%(75/79)。 结论 青海省海西州鼠疫自然疫源地分离的鼠疫菌具备青藏高原鼠疫病原体特性,鼠疫菌的毒力强,且不具有耐药及耐消毒剂相关基因的特征。 李胜 杨晓艳 何建 李存香 熊浩明 辛有全 靳娟 张琪 柏吉祥 魏柏青 代瑞霞关键词:病原学 1株携带野生型鼠疫噬菌体鼠疫菌的纯化及分析 被引量:1 2020年 目的对1株携带野生型鼠疫噬菌体的疑似鼠疫菌进行判定与纯化。方法分别采用平板划线分离法和动物传代试验从1株携带野生型鼠疫噬菌体的疑似鼠疫菌获得形态完整、无自然噬菌迹象且能被诊断用鼠疫噬菌体所裂解的鼠疫菌。结果从1株携带野生型鼠疫噬菌体的疑似鼠疫菌株分离出形态典型、无噬菌迹象且能被诊断用鼠疫噬菌体所裂解的鼠疫菌。结论在野外监测工作或实验室抗鼠疫噬菌体血清缺乏的情况下,利用平板划线分离法和动物传代试验分离携带野生型鼠疫噬菌体样本可获得典型鼠疫菌,其操作简便、实用,同时为及时、准确地判定鼠疫疫情,防止疫情扩大蔓延做好实验室前期的诊断工作。 李胜 李存香 于晓涛 赵海红 徐小青 吴海生 金泳 辛有全 柏吉祥 冯建萍 张青雯 祁芝珍关键词:鼠疫菌 细菌培养 纯化 乌兰县鼠疫自然疫源地分离鼠疫菌株CRISPR基因分型研究 2024年 目的应用成簇规律间隔短回文重复序列(clustered regularly inter-spaced short palindromic repeats,CRISPR)基因分型方法,对乌兰县分离鼠疫菌株进行CRISPR基因分型分析,以了解该地区鼠疫菌CRISPR类群和基因型。方法复苏培养乌兰县1966—2010年取自鼠疫患者、媒介昆虫和喜马拉雅旱獭的63株原始鼠疫菌株,提取其DNA,设计CRISPR的YPa、YPb、YPc 3个位点引物,利用PCR技术,对以上位点进行扩增,测定其扩增产物核酸序列并进行综合分析,将测得的CRISPR序列与文献最新报道的CRISPR Dictionary和美国国立生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)数据库进行比对,探索是否存在之前未出现的CRISPR间隔(spacer)类群和基因型别,分析菌株间可能的进化关系,最终确定乌兰县喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地鼠疫菌菌株的CRISPR基因库。结果63株鼠疫菌在3个CRISPR位点上共有16种spacer,其中YPa位点9种、YPb位点4种、YPc位点3种。63株鼠疫菌可被分为6个基因型,分别为G26-a1′、G26-a1′a4^(-)、G22-a4^(-)、G22、G22-a1′a4^(-)、G7,归为4大CRISPR类群,分别为Ca35′、Ca7、Ca7′、Cb4。Ca35′是该地区主要流行类群;Ca7和Ca7′分布在乌兰县东部的铜普镇和茶卡镇;Cb4仅存在于赛什克地区。结论青海省乌兰县鼠疫菌种群结构相对稳定,以Ca35′为主要种群,G26-a1′型为主要基因型,呈现显著的地区聚集特征,今后可以利用CRISPR基因分型技术加强该地区鼠疫溯源检测和防控工作。 张琪 杨晓艳 辛有全 靳娟 李胜 柏吉祥 张晓璐 李广辉 代瑞霞 何建关键词:鼠疫菌 基因分型 青海省天峻县鼠疫病原学分析及流行病学意义 被引量:2 2018年 目的探讨天峻县鼠疫菌生物学特性及流行病学意义,为鼠疫防治提供科学依据。方法选择1957-2009年从天峻县境内不同宿主分离到的34株鼠疫菌为研究对象,开展生化试验、毒力测定、毒力因子鉴定、质粒分析、差异片段(different region genotyping,DFR)分型研究。结果34株鼠疫菌的生物型为古典型,生化型为青藏高原型,基因型主要为8、5型;鼠疫菌菌株均携带分子质量为6×106、45×106、65×106的3种质粒;31株鼠疫菌具备4个毒力因子,占91.18%(31/34),毒力检测结果显示均为强毒菌。结论天峻县分离的鼠疫菌具有青藏高原喜马拉雅旱獭鼠疫疫源地病原特性,属强毒菌,如动物间疫情扩散波及人类,后果将不堪设想,因此该地区鼠疫防控工作不容松懈。 李翔 杨晓艳 何建 靳娟 辛有全 李胜 柏吉祥 张琪 熊浩明 魏柏青 代瑞霞关键词:鼠疫 病原学 流行病学 我国喜马拉雅旱獭鼠与南方家鼠鼠疫疫源地鼠疫菌遗传特征研究 被引量:4 2023年 目的 了解喜马拉雅旱獭鼠疫疫源地与南方家鼠鼠疫疫源地鼠疫菌表型及其遗传特征,为掌握两块鼠疫疫源地鼠疫菌病原学特征提供参考依据。方法 选取我国喜马拉雅旱獭鼠疫疫源地和南方家鼠鼠疫疫源地内分离的412株鼠疫菌,对其进行糖醇酵解实验、毒力因子鉴定、DFR分型和CRISPR分型研究。结果 两块鼠疫疫源地鼠疫菌生化型呈明显的地区性分布特征,喜马拉雅旱獭鼠疫疫源地鼠疫菌被分为5个生化型;南方家鼠鼠疫疫源地鼠疫菌生化特性较为稳定,只有1个生化型。两块疫源地分离的鼠疫菌绝大多数能产生毒力因子Fl和PstI,其中喜马拉雅旱獭疫源地70.53%(201/285)菌株为VW阳性,Pgm阳性菌株占75.09%(214/285),Pgm阴性菌株占20.00%(57/285),Pgm混合型菌株占5.26%(15/285);南方家鼠鼠疫疫源地37.80%(48/127)菌株为VW阳性,Pgm阳性菌株占29.13%(37/127),Pgm阴性菌株占58.27%(74/127),Pgm混合型菌株占12.60%(16/127)。DFR分型发现喜马拉雅旱獭鼠疫疫源地鼠疫菌包括22种基因型,其主要基因型为5、7、8、10、19、32、49型;家鼠鼠疫疫源地鼠疫菌DFR基因分型相同,均属于9型。CRISPR分型发现,喜马拉雅旱獭鼠疫疫源地所有菌株分为7个CRISPR基因簇14个CRISPR基因型,主要基因型为G7、G22、G26-a1’、G22-a1’;家鼠鼠疫疫源地鼠疫菌CRISPR基因型均为G30型,其基因簇为Ca8。结论 喜马拉雅旱獭鼠疫疫源地鼠疫菌表型和基因型多样,地理分布特征明显;南方家鼠鼠疫疫源地鼠疫菌表型和基因型单一,因此采用DFR、CRISPR基因分型方法结合表型特征可有效地鉴别两块疫源地鼠疫菌和满足鉴定溯源研究的需求。 李胜 靳娟 何建 辛有全 柏吉祥 张琪 赵海红 张晓璐 杨晓艳 代瑞霞关键词:鼠疫 鼠疫菌 三江源地区鼠疫耶尔森菌CRISPR基因分型及流行特征研究 2024年 目的了解三江源地区鼠疫菌株分布情况,进行规律间隔成簇短回文重复序列(Clustered regularly in-terspaced short palindromic repeats)基因分型研究,为该地区鼠疫疫源地菌株鉴定溯源、科学防控提供理论依据。方法选取三江源地区310株鼠疫菌提取DNA,分别PCR扩增、测序3个CRISPR的位点YPa、YPb和YPc,所测得CRISPR序列与CRISPR Dictionary数据库最新数据进行比对,鉴定CRISPR spacer阵列并对三江源地区鼠疫菌进行基因分型。对310株鼠疫菌结合CRISPR基因型和分离宿主信息进行统计分析。结果310株鼠疫菌共发现26种spacer,分别为YPa15种、YPb8种、YPc3种;310株鼠疫菌被分成16个不同CRISPR基因型,G22型和G22-a1′型分布于整个三江源地区包括称多县、治多县、玉树市、曲麻莱县、囊谦县、杂多县、玛多县、玛沁县、同仁县、泽库县、共和县、同德县、贵德县;G24型分布于泽库县、玛多县、囊谦县、称多县;G26-a1′型主要分布于共和县、兴海县、贵德县、玛多县、称多县、杂多县,16个基因型归类为7个CRISPR类群:Cb4、Cb4′、Ca7、Ca7′、Ca8、Ca35′、Cc3′。结论三江源地区鼠疫菌CRISPR基因型具有多样性,不同疫源地基因型分布特征显著,且不同菌株基因型存在差异。 柏吉祥 靳娟 李胜 辛有全 杨晓艳 张琪 金泳 张丽 代瑞霞 何建关键词:鼠疫菌 CRISPR 基因分型 一种实验室微生物检验培养皿转运盒 本实用新型涉及微生物技术领域,具体涉及一种实验室微生物检验培养皿转运盒,包括转运装置,所述转运装置包括转运盒,所述转运盒的上表面抵触有盒盖,所述转运盒的下表面抵触有转运架,所述转运盒左右两侧面开设的滑槽内固定连接有组装装... 张青雯 吴海生 张雪飞 辛有全 吴海莲 金泳 杨晓艳 赵海红 李翔 李存香 何健 张琪 李胜 靳娟 李积权 郭文涛 柏吉祥 辛文媛 祁芝珍 代瑞霞 金星 冯建萍文献传递 应用TaqMan-MGB探针RT-qPCR技术对青海省海南州鼠疫菌耐链霉素rpsL基因突变位点的检测 被引量:1 2023年 目的研究青海省海南藏族自治州(海南州)鼠疫疫源地鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)对链霉素的敏感性,以便在突发鼠疫疫情中能精准地指导鼠疫临床用药。方法根据鼠疫菌基因序列设计特异性引物,以S19960127菌株核糖体蛋白S12编码基因(rpsL基因)突变位点和野生型鼠疫菌株rpsL基因位点分别设计探针,利用TaqMan-MGB探针技术对海南州1954-2009年分离的87株鼠疫菌进行耐链霉素rpsL基因突变位点检测。结果87株被试菌株的野生型A碱基的羧基荧光素(FAM)探针检测结果均为阳性,每个反应管内荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数(Ct)值在18.74~21.93,相对荧光单位(RFU)峰值>2000;S19960127的Ct值为25.42,RFU峰值<200;阴性对照RFU峰值<200。所有被试菌株突变型G碱基的亚磷酰胺(VIC)探针检测结果均为阴性,Ct值在20.04~24.79,RFU峰值<200;S19960127的Ct值为17.56,RFU峰值>1000;阴性对照RFU峰值<200。实验结果显示海南州鼠疫疫源地87株鼠疫菌基因序列第128位的碱基未发生A→G突变,该疫源地未检出耐链霉素鼠疫菌株。结论海南州鼠疫疫源地87株鼠疫菌对链霉素均敏感。鉴于细菌耐药性基因的产生与传播特征,应持续开展监测并建立鼠疫菌耐药性监测网络,以便能及时发现并控制耐药菌的传播。 李胜 靳娟 何建 张琪 杨晓艳 辛有全 赵海红 张晓璐 柏吉祥 代瑞霞关键词:鼠疫耶尔森菌 RPSL基因 TAQMAN-MGB探针