高丽婷 作品数:7 被引量:9 H指数:2 供职机构: 浙江万里学院 更多>> 发文基金: 宁波市科技创新团队项目 浙江省自然科学基金 更多>> 相关领域: 农业科学 更多>>
杀香鱼假单胞菌ExoU基因敲除突变株及其应用 本发明属于基因工程领域,涉及杀香鱼假单胞菌ExoU基因敲除突变株及其应用。所述突变株NB2011ΔExoU,保藏号为CGMCC No.12430,其制备方法为:利用同源重组基因敲除技术将杀香鱼假单胞菌野生株NB2011的... 毛芝娟 王越峰 高丽婷 陈吉刚文献传递 杀香鱼假单胞菌DNA疫苗、制备方法及其应用 本发明公开一种杀香鱼假单胞菌DNA疫苗、制备方法及其应用,其特征在于:该疫苗为pCI‑pcrV。该疫苗以杀香鱼假单胞菌NB2011基因组DNA为模板,经引物P1/P2进行PCR扩增,扩增产物经纯化后与质粒pCI‑neo连... 毛芝娟 张恒泽 高丽婷 万里杀香鱼假单胞菌Ⅲ型分泌系统转录调控蛋白ExsA突变株的构建及其对大黄鱼的毒力特征分析 被引量:4 2017年 杀香鱼假单胞菌是大黄鱼内脏白点病的致病菌,感染该菌常会导致养殖大黄鱼很高的死亡率和严重的经济损失。病原株NB2011编码典型的Ⅲ型分泌系统,可能是该菌重要的毒力因子,ExsA是控制此分泌系统表达的重要调控蛋白。为确认ExsA在NB2011致病过程中的作用,开发有效疫苗,实验采用双交换同源重组法构建了ExsA内部序列被卡那霉素基因替换的突变株,检测突变株与野生株对鼠巨噬细胞J774的黏附、内化和胞内增殖特性,并比较对大黄鱼的毒力变化,同时,通过透射电子显微镜观察人工感染后大黄鱼内脏组织的病理变化。研究表明,巨噬细胞对突变株的内化率降低,内化的细菌在12 h内被清除,野生株在内化后虽然一段时间内数量稍有下降,12~24 h期间数量急剧上升;突变株对大黄鱼的96 h LD_(50)为2.59×10~7/mL,比野生株高数百倍;电镜切片中未观察到组织内有菌体的存在,表明突变株的毒力明显减弱,可以作为弱毒疫苗的开发对象。 张杰 郭海杰 高丽婷 毛芝娟关键词:大黄鱼 毒力 假单胞菌减毒活疫苗免疫后的大黄鱼脾脏转录组分析 被引量:5 2020年 大黄鱼是中国东部沿海养殖的重要经济鱼类品种,多年来受到假单胞菌引起的内脏白点病的危害,疫苗免疫是预防该病的理想手段,减毒活疫苗(live attenuated vaccine,LAV)或DNA疫苗等能有效刺激宿主细胞免疫应答的疫苗可能是该菌疫苗发展的重要方向。为了评估减毒活疫苗的有效性,解悉大黄鱼对疫苗的免疫应答机制,本研究以重要毒力基因缺失的减毒活菌株ΔpcrV NB2011免疫鱼体,在免疫后0 h和48 h分别采取实验鱼的脾脏组织进行转录组测序。通过美吉云平台在线分析,一共注释了30 438条Unigene和70 618条转录本。筛选出上调和下调表达基因分别为311个和313个,其中免疫相关的显著性差异基因28个,涉及抗原加工呈递、补体系统、细胞因子、模式识别受体和吞噬作用,尤其是MHCI型抗原加工和递呈通路显著上调。对上调表达基因进行KEGG富集分析,涉及的最主要通路包括谷胱甘肽代谢通路、精氨酸-脯氨酸代谢通路、抗原提呈与加工通路和溶菌酶通路等。选取5个显著性差异表达的免疫相关基因进行qRT-PCR验证,验证结果与测序结果变化趋势基本一致,提示了LAV免疫后有效激发鱼体的细胞免疫应答,有助于快速清除胞内病原。本研究部分揭示了大黄鱼对致病性假单胞菌LAV的免疫应答机制,可以为疫苗的研制提供科学依据。 张恒泽 高丽婷 万里 罗晟 毛芝娟关键词:大黄鱼 减毒活疫苗 QRT-PCR 杀香鱼假单胞菌ExoU基因敲除突变株及其应用 本发明属于基因工程领域,涉及杀香鱼假单胞菌ExoU基因敲除突变株及其应用。所述突变株NB2011ΔExoU,保藏号为CGMCC No.12430,其制备方法为:利用同源重组基因敲除技术将杀香鱼假单胞菌野生株NB2011的... 毛芝娟 王越峰 高丽婷 陈吉刚文献传递 大黄鱼内脏白点病病原菌杀香鱼假单胞菌弱毒株的构建 由杀香鱼假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida)引起的内脏白点病是危害养殖大黄鱼的重要感染性疾病,该病发病急、死亡率高,目前尚无有效的防控措施。不同的研究者观察到了该菌在大黄鱼巨噬细胞中生存的现... 高丽婷 张恒泽 毛芝娟 陈吉刚关键词:缺失突变 弱毒株 杀香鱼假单胞菌DNA疫苗、制备方法及其应用 本发明公开一种杀香鱼假单胞菌DNA疫苗、制备方法及其应用,其特征在于:该疫苗为pCI‑pcrV。该疫苗以杀香鱼假单胞菌NB2011基因组DNA为模板,经引物P1/P2进行PCR扩增,扩增产物经纯化后与质粒pCI‑neo连... 毛芝娟 张恒泽 高丽婷 万里文献传递