- 有和无甘油的聚丙烯酰胺胶在检测突变时的差别被引量：3
- 2000年
- 有文献报道 ,在非变性的聚丙烯酰胺中加入甘油可提高SSCP检测的灵敏度 .作者采用PCR SSCP、加 5%的甘油或未加甘油的 10 %非变性聚丙烯酰胺胶和DNA测序技术 ,来检测常染色体显性多囊肾病致病基因PKD1的突变 .结果发现 ,同一个病人在未加甘油的10 %非变性聚丙烯酰胺胶中 ,有 4条单链带 ,而在加 5%的甘油的 10 %非变性聚丙烯酰胺胶中仅有两条单链带 ;两种胶上均有迁移率较正常双链带慢一条的双链带 .测序结果显示 ,在有异常迁移率带的个体的 1条DNA分子中缺失 1个G .我们的实验提示 ,加入甘油后检测灵敏度不及不加甘油的非变性聚丙烯酰胺 ;并且证实 ,仅有一个碱基的缺失会导致在SSCP胶上双链带位置出现一条迁移率比正常双链带迁移率慢的带 .这是由于缺失一个碱基的DNA链与正常的DNA链间会形成有一个碱基突出来的杂合分子 ,导致其迁移率比完全碱基互补的分子迁移率慢 .因此作者建议在进行SSCP筛查未知突变时 ,最好采用不加甘油的非变性的聚丙烯酰胺胶 ,这既省力省钱 ,又灵敏 .在判读SSCP胶时 ,不可将在双链带位置有 1条比正常迁移率慢的带就判定为插入突变 .此时要判定突变的性质 ,最好测序 .
- 丁兰张思仲周宏远邱为民肖翠英
- 关键词：SSCP突变
