潘建忠
- 作品数：10 被引量：42H指数：4
- 供职机构：苏州大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学更多>>
- 鼠抗人CD28功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定被引量：8
- 2003年
- 以天然表达CD28分子的人多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞:XG-1为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,CD28转基因细胞株(T-28)及XG-1为抗体筛选阳性细胞株,经免疫荧光标记分析反复筛选和多次的克隆化培养,最终获得1株持续、稳定分泌鼠抗人CD28单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为10F3。对这株单抗生物学功能的研究结果表明,这株抗体能特异性地识别人CD28分子和介导有效的共刺激信号,激发T细胞的活化和增殖。
- 居颂文刘琳居颂光於葛华潘建忠邱玉华张学光
- 关键词：CD28杂交瘤多发性骨髓瘤单克隆抗体
- 可溶性白细胞介素-6受体结合链免疫放射检测方法的建立及应用
- 2003年
- 目的 建立一种可溶性白细胞介素 6受体结合链 (IL 6Rα)免疫放射检测方法。方法采用B淋巴细胞杂交瘤技术获取分泌鼠抗人可溶性IL 6Rα单抗的杂交瘤细胞株 ;经体内诱生腹水法制备单抗 ;免疫亲合层吸法纯化单抗 ;用 12 5I标记单抗后 ,采用竞争抑制分析法对单抗识别的抗原表位进行鉴定 ,选择识别不同抗原表位的 2株单抗H12 6和SI10分别作为包被单抗和检测单抗 ,建立双单抗夹心的可溶性IL 6Rα免疫放射检测方法。分析该检测方法与可溶性IL 6Rα相关的细胞因子白细胞介素 6 (IL 6 )及可溶性IL 6信号传导链 (IL 6Rβ ,也称gp130 )的交叉反应性 ;采用加入 回收法对检测方法的准确性进行鉴定 ,并绘制标准工作曲线 ,然后测定正常人及多发性骨髓瘤患者血清中可溶性IL 6Rα的含量。结果 建立的可溶性IL 6Rα免疫放射检测方法的灵敏度为 10ng/ml,具有良好线性关系的检测范围是 10～ 4 0 0ng/ml,与IL 6及可溶性gp130 (sgp130 )无交叉反应性 ,加入重组可溶性IL 6Rα的回收率在 92 %～ 10 8%之间。正常人血清中可溶性IL 6Rα的含量为 (81 96± 7 2 3)ng/ml,多发性骨髓瘤患者血清中可溶性IL 6Rα的含量为 (2 37 5 8± 70 96 )ng/ml,明显高于正常对照组 (P <0 0 1)。结论 该检测方法能够对血液中可溶性IL 6Rα进行?
- 邱玉华朱华亭谢炜潘建忠张学光
- 关键词：多发性骨髓瘤杂交瘤细胞株
- 激发型抗CD40单抗介导恶性肿瘤细胞凋亡及其机制探讨被引量：4
- 2002年
- 目的 探讨激发型CD4 0单克隆抗体对人B淋巴细胞恶性肿瘤的生物学效应及其机制。方法 将激发型CD4 0单克隆抗体 5C11加入肿瘤细胞的体外培养体系 ,采用细胞计数、流式细胞仪等方法分析单克隆抗体 5C11对不同肿瘤细胞株的作用。结果 5C11能引起CD4 0表达的多发性骨髓瘤 (MM)细胞株XG2和恶性淋巴瘤细胞株Daudi发生同型聚集 ,抑制其生长并介导凋亡 ;CD4 0分子介导的XG2和Daudi细胞凋亡作用与可溶性TNF产生无关。结论 激发型CD4 0单克隆抗体通过诱导B细胞恶性肿瘤细胞的凋亡 。
- 汤琳庄羽美周照华余葛华潘建忠张学光
- 关键词：CD40B细胞细胞凋亡
- 激发型CD28单抗直接激发的T细胞及其表型被引量：13
- 2003年
- 1.用羊抗鼠IgG(20 μg/ml)包被96孔细胞培养板,再加入游离的激发型GD28单抗(终浓度为5 μg/ml);2.用激发型CD28单抗(10μg/ml)直接包被96孔细胞培养板,然后分别加入105个/孔经E-花结实验获取的人外周血T细胞(PBTC),其中CD3+T＞95%.逐日观察细胞的生长状态并绘制生长曲线,用3H-TdR掺入法分析PBTC的增殖效应,用FITC标记的单抗经流式细胞仪(FCM)分析细胞CD3、CD4、CD8、CTLA-4、4-1BB及OX40的表达.逐日细胞计数的结果表明,经羊抗鼠IgG包被后加入游离激发型CD28单抗或直接用激发型CD28单抗包被,均能引发PBTC的活化与增殖效应,激发3 d时的刺激指数(SI)大于9,细胞CD3、CD4、CD8、CTLA-4、4-1BB及OX40的阳性表达率(x±s,%)分别为98.6±0.2、74.4±3.1、22.5±2.0、2.1±0.4、18.4±2.2、35.2±3.5.与XGB7(作为APC)刺激的T细胞相比,经CD28单抗直接激发的T细胞,CD4+/CD8+T细胞的比值及OX40+T细胞的百分率升高(P＜0.01),但不表达负性调节分子CTLA-4.
- 邱玉华於葛华陈永井赵文宝潘建忠朱华亭谢炜张学光
- 关键词：CD28表型
- 再生柞蚕丝素蛋白对小鼠间充质干细胞体外生长的支持作用被引量：1
- 2009年
- 目的探讨再生柞蚕丝素蛋白对小鼠间充质干细胞体外生长和分化的支持作用。方法采用再生家蚕丝素蛋白、再生柞蚕丝素蛋白、I型胶原、普通细胞培养板为研究对象,观察小鼠间充质干细胞(C3H10T1/2)在这4种生物材料上的黏附、生长及表面抗原的变化。利用光学显微镜观察细胞生长形态,MTT法检测细胞的增殖,流式细胞仪测定细胞表型。结果再生柞蚕丝素蛋白对细胞生长形态、细胞表面抗原表达均无影响。培养第6天C3H10T1/2细胞在再生柞蚕丝素膜上增殖明显,与其他3种生物材料的差异有统计学意义(P<0.05)。结论再生柞蚕丝素蛋白在体外支持C3H10T1/2细胞的黏附、生长,具有很好的组织相容性。
- 谢炜王泳古彦铮潘建忠徐颖徐云云李明忠张学光
- 关键词：生物材料
- 激发型鼠抗人4-1BBL单克隆抗体的研制
- 2010年
- 目的鼠抗人4—1BBL单克隆抗体的制备及其生物学特性研究。方法以高表达人4—1BBL分子的基因N-程细胞株L929／4—1BBL为免疫原免疫BALB／c小鼠，利用淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合，经过选择性克隆化培养及流式细胞术分析，筛选分泌特异性抗A4—1BBL单抗的杂交瘤细胞株；采用快速定性试纸法鉴定单抗亚类、间接免疫荧光法检测单抗对肿瘤细胞株的识别谱。进而，将所获抗人4-1BBL单抗体外刺激白血病细胞株U937，通过细胞计数法分析单抗对U937生长的影响。结果获得一株持续、稳定分泌鼠抗人4—1BBL单抗的杂交瘤细胞株，并将其分泌的单抗命名为39A8。单抗39A8可有效识别不同肿瘤细胞株表达的4—1BBL，经细胞计数分析，39A8对U937细胞的生长具有明显的促增殖作用。结论单抗39A8是可激发4-1BBL逆向信号的单克隆抗体，是研究4—1BBL分子及其功能的重要工具。
- 柴青高文杰谢炜潘建忠居颂光张学光薛智谋
- 关键词：杂交瘤单克隆抗体
- 激发型CD_(40)单抗5C11对白血病细胞来源树突细胞的诱导作用及生物学特性被引量：3
- 2003年
- 目的 探讨激发型CD40 单抗 5C11对白血病细胞来源的树突细胞 (DC)的诱导作用及其生物学特性的影响。方法 激发型CD40 单抗 5C11联合不同的细胞因子组合诱导白血病细胞分化为DC ,通过显微镜形态分析 ,流式细胞仪表型分析 ,活细胞计数 ,IL 6、IL 12ELISA定量检测及混合淋巴细胞反应和细胞毒性实验等细胞生物学、免疫学方法对其进行研究。结果 白血病患者外周血或骨髓的白血病细胞 ,在经激发型CD40 单抗 5C11联合不同的细胞因子组合培养后 ,能诱导成为大量成熟的DC ;形态学观察呈现典型的DC特征 ;流式细胞仪检测证实细胞表面上调性表达CD40 、CD80 、CD83 、CD86等分子 ;白血病细胞分化为DC后 ,IL 6分泌量减少 ,IL 12分泌量增加 (P <0 .0 5 ) ;同种异体混合淋巴细胞反应也显示 ,诱导的DC具有很强的刺激同种异体T细胞增殖的能力 ,这种增殖的T细胞对白血病细胞具有一定的杀伤作用。结论 激发型CD40 单抗 5C11联合细胞因子能诱导白血病细胞分化为功能性DC。这可能在白血病的过继免疫疗法中具有潜在的应用价值。
- 王正飞于葛华朱子玲朱一蓓王凤鸣潘建忠顾宗江张学光
- 关键词：树突细胞生物学特性
- 人PD-L1基因转染细胞株的构建及其对活化的Jurkat细胞增殖和凋亡的影响被引量：3
- 2015年
- 目的:构建稳定表达人PD-L1分子的基因转染细胞株,观察其对活化的Jurkat细胞增殖和凋亡的影响。方法:将编码人PD-L1分子的全长c DNA重组入反转录病毒表达载体p EGZ-Term-R,将重组载体p EGZ-Term-R/PD-L1和辅助病毒载体用脂质体法共转染293T细胞,包装具有感染能力的完整病毒;收集含有完整重组反转录病毒的293T细胞培养上清,感染L929细胞,筛选并获得G418抗性的基因转染细胞。采用流式细胞术检测表达PDL1的基因转染细胞,命名为L929/PD-L1。采用PHA活化T细胞系来源的细胞株Jurkat,并将其与丝裂霉素预处理的L929/PD-L1细胞共培养,用细胞计数法观察L929/PD-L1细胞株对活化的Jurkat细胞增殖能力的影响,并检测其凋亡情况。结果:成功获得了稳定表达人PD-L1基因的转染细胞株L929/PD-L1。PHA可诱导Jurkat细胞活化并表达PD-1分子;L929/PD-L1与PHA刺激后的Jurkat细胞共培养,可抑制Jurkat细胞增殖,促进其凋亡。结论:成功构建了稳定表达人PD-L1的细胞株,PD-L1分子抑制活化的Jurkat细胞增殖,促进其凋亡。
- 宋莉葛彦曹莎莎徐永芳潘建忠谢炜居颂文居颂光
- 关键词：PD-L1基因转染细胞株JURKAT细胞
- CD40基因特异性沉默对脑胶质瘤细胞株U87增殖和迁移的影响被引量：1
- 2012年
- 目的探讨CD40基因特异性沉默对脑胶质瘤细胞增殖和迁移等恶性生物学行为的影响。方法构建特异性沉默CD40基因的重组表达载体(pSilencer3.1/shRNA-CD40)和随机对照载体(pSilencer3.1/shRNA-control),转染脑胶质瘤细胞株U87。采用RT-PCR和流式细胞术分别在mRNA和蛋白水平的检测CD40基因沉默效率,进而采用细胞计数法和Transwell法观察下调CD40分子表达后的U87细胞在sCD40L作用下增殖能力和迁移能力的改变。结果成功构建了特异性沉默CD40基因的稳定细胞株U87/shRNA-CD40,可显著下调U87细胞CD40 mRNA和蛋白质表达水平(P<0.05)。采用sCD40L激发CD40信号,结果显示,与野生型U87和对照组U87/shRNA-control相比,U87/shRNA-CD40细胞株增殖速率和迁移能力明显下降(均P<0.01)。结论特异性沉默脑胶质瘤细胞CD40分子表达,可以有效削弱肿瘤微环境中CD40信号导致的脑胶质瘤细胞增殖和迁移能力,这为临床治疗脑胶质瘤提供了新的线索。
- 蔡文治王卓谢炜潘建忠居颂光葛彦
- 关键词：基因沉默CD40增殖迁移
- 虚拟实验室在免疫学实验教学中的应用被引量：10
- 2011年
- 虚拟实验室是一个计算机网络化的仿真实验环境,具有沉浸感和交互性的特点。将虚拟实验室引入免疫学实验教学,有助于将抽象的免疫学原理具体化、形象化,并可以拓展免疫学的实验条件,增强学生的学习兴趣,提高免疫学实验教学质量。
- 谢炜居颂光葛彦潘建忠
- 关键词：免疫学实验教学虚拟实验室
