贾义
- 作品数：6 被引量：10H指数：3
- 供职机构：贵州医科大学生物与工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金贵州省卫生厅科学技术基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 金黄色葡萄球菌疫苗候选分子StbA主要抗原表位区的表达及重组蛋白抗血清的制备被引量：4
- 2015年
- 通过生物信息学软件分析金黄色葡萄球菌转铁蛋白结合蛋白(StbA)的主要抗原表位区,PCR扩增StbA主要抗原表位区的编码序列;将该序列插入表达载体pGEX-4T-1中,测序验证后转化大肠杆菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达。结果表明,重组菌能表达出分子质量约为54 000u的重组融合蛋白。表达产物经亲和层析纯化后可获得较高纯度的目的蛋白。Western-blot检测证实该重组蛋白能与乳腺炎患病奶牛恢复期血清发生阳性反应。ELISA结果显示,重组蛋白免疫新西兰大白兔能产生高效价的抗血清,提示StbA主要抗原表位区能刺激机体产生强大的免疫应答,StbA是一个有潜力的保护性抗原候选分子。
- 刘丽娜张洁周静钟乃凤胡祖权贾义谭承建
- 关键词：金黄色葡萄球菌抗血清制备
- 转化生长因子-β_1对人成熟树突状细胞生物物理特性和迁移能力的影响被引量：3
- 2014年
- 目的:研究转化生长因子β1(TGF-β1)对人成熟树突状细胞(m DCs)生物物理特性与迁移能力的影响。方法:用不同浓度TGF-β1(1μg/L、3μg/L、5μg/L、7μg/L)处理m DCs 24 h,按TGF-β1浓度将m DCs分为4组和对照组(未加入细胞因子);采用细胞渗透脆性实验检测m DCs的渗透脆性(未破碎细胞百分率),通过细胞电泳实验测定m DCs电泳率,荧光偏振实验和微吸管系统分别测定m DCs荧光片振度和被吸入管内的长度,以反映m DCs细胞膜的流动性和变形性,利用Transwell系统检测m DCs跨内皮细胞迁移百分率。结果:与对照组相比,(1)细胞渗透脆性,在1μg/L组m DCs破碎百分率增加,5μg/L组m DCs破碎百分率降低,差异有统计学意义(P<0.05);(2)细胞电泳率,1μg/L和3μg/L组m DCs电泳率下降,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);(3)细胞膜流动性和细胞变形性,细胞膜流动性在5μg/L组增加;变形能力在5μg/L和7μg/L组增加,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05);(4)细胞迁移能力,1μg/L和3μg/L组m DCs跨内皮细胞迁移率下降,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:TGF-β1通过影响m DCs的生物物理特性从而抑制其跨内皮细胞迁移的能力。
- 郑勤妮许筱莉胡祖权贾义张春林邱炜宋萍萍赵远波曾柱
- 关键词：成熟树突状细胞转化生长因子-Β1生物物理特性肿瘤微环境
- Gi蛋白真核表达载体的构建及表达检测
- 2014年
- 目的:克隆抑制腺苷酸环化酶G蛋白(Gi蛋白)3个亚基α、β和γ基因,构建p EYFP-N-Giα1和p ECFP-C-Giβ1-γ2真核表达载体,完成其在真核细胞中的表达检测。方法:培养肝癌细胞Hep G2,提取总RNA后反转录成c DNA,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增α、β和γ的编码基因,在α亚基两端添加酶切位点,在β和γ亚基两端分别添加酶切位点和连接肽,经酶切和连接得到Giα1和Giβ1-γ2,再将Giα1和Giβ1-γ2基因分别构建到荧光蛋白报告载体p EYFP-N1和p ECFP-C1中,利用脂质体法将真核表达载体转染到肝癌细胞中,激光共聚焦显微镜观察分析其表达活性。结果:PCR扩增获得Gi蛋白α、β和γ亚基的编码基因,在两端添加酶切位点和连接肽后获得的Giα1和Giβ1-γ2基因,成功构建了p EYFP-N-Giα1和p ECFP-C-Giβ1-γ2真核表达载体,并在肝癌细胞中实现其真核细胞表达。结论:成功构建Gi蛋白的真核表达载体,并鉴定其在活细胞中具有表达活性。
- 胡祖权何天军贾义宋萍萍邱炜赵远波曾柱
- 关键词：脂质体转染荧光蛋白真核表达载体
- 单核细胞与未成熟树突细胞的细胞骨架相关的核心差异基因表达的生物信息学分析被引量：1
- 2017年
- 为进一步深入理解不同分化阶段树突状细胞(dendritic cells,DCs)的生物物理学特性和免疫学功能的差异。从CEO数据库获得CD14^+单核细胞(monocytes,mon)及其诱导而成的未成熟DCs(immature DCs,im DCs)的m RNA表达数据(芯片编号:GSE15076),利用R语言软件(RGui 3.2.3)解析原始数据并筛选差异基因。进一步利用STRING online工具筛选核心差异基因(可信度≥0.4),Cytoscape软件构造蛋白质相互作用网络图。对STRING online工具筛选核心差异基因进行京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)分析。实时荧光定量PCR技术检测mon及im DCs部分核心差异基因CCNB1、CDK5、IL-6和TNF在基因水平上的表达情况。im DCs相对于mon表达的差异的基因共3 371个(im DCs与mon对比,表达变化倍数≥2,p值<0.05),其中上调基因为2 396个,下调基因为975个,通过进一步筛选后获得上调基因655个,下调基因110个,主要涉及m TOR信号通路、细胞代谢、细胞粘附等功能。其中上调基因中CDK5、CCNB1等差异基因与细胞骨架改变密切相关,而下调基因中IL-6、TNF、CXCR4等差异基因与细胞骨架改变密切相关,这对进一步深入理解im DCs独特的生物物理学特性和免疫学功能来说具有重要意义。
- 谭诚胡祖权龙金华邱伟刘丽娜贾义曾柱
- 关键词：单核细胞未成熟树突状细胞基因芯片分析生物信息学细胞骨架
- 金黄色葡萄球菌SirH主要抗原表位区的表达及其抗血清制备被引量：1
- 2014年
- 为在大肠埃希菌中表达金黄色葡萄球菌SirH主要抗原表位区并制备相应纯化重组蛋白的抗血清,通过生物信息学软件分析SirH的主要抗原表位区,PCR扩增SirH主要抗原表位区的编码序列,插入表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达载体pGEX4T1-sirH。该载体经酶切和DNA测序鉴定正确后,转化大肠埃希菌BL21,IPTG诱导表达,GST亲和层析纯化获得重组蛋白后,采用Western blot方法检测目的蛋白的反应原性。用纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,间接ELISA检测抗血清效价。结果显示,PCR扩增的SirH主要抗原表位区的编码序列长度约759bp,SDS-PAGE初步测定表达蛋白的分子质量约为54ku,与理论值相符。亲和层析纯化获得了目的蛋白,Western blot结果证实该纯化蛋白能与乳房炎患病奶牛恢复期的血清发生反应。应用纯化蛋白免疫新西兰大白兔后制备的抗血清效价在1∶409 600以上。结果表明,SirH主要抗原表位区能刺激机体产生较强的体液免疫应答,SirH是一个有潜力的疫苗候选抗原。
- 刘丽娜张洁周静胡祖权贾义钟乃凤谭承建
- 关键词：金黄色葡萄球菌抗原表位蛋白表达抗血清制备
- 不同分化阶段树突状细胞肌动蛋白微丝结合蛋白的表达变化被引量：4
- 2017年
- 研究不同分化阶段树突状细胞(dendritic cells,DCs)重要肌动蛋白微丝结合蛋白的表达变化。人外周血经密度梯度离心和免疫磁珠法分离获得CD14+单核细胞,用细胞因子将单核细胞(monocytes,MOs)诱导分化为未成熟DCs(immature DCs,im DCs)和成熟DCs(mature DCs,m DCs)。分别提取不同分化阶段DCs的总蛋白和总RNA,实时定量PCR和蛋白质芯片检测部分细胞骨架微丝(filament actin,F-actin)结合蛋白的在基因和蛋白水平的表达变化。单核细胞经im DCs向m DCs分化的过程中,一些F-actin的单体隔离蛋白、加帽蛋白、交联蛋白、解聚蛋白和成核蛋白在基因和蛋白水平发生了不同程度的上调或下调。一些重要的F-actin结合蛋白在DCs不同分化阶段具有不同的表达水平,DCs的结构和功能受到这些蛋白的协同作用和精密调控,是细胞形态发生显著变化的结构基础,这对于深入理解DCs的免疫调节功能来说具有重要意义。
- 孙见飞胡祖权龙金华贾义邱炜雷霆雯岳萍吴宁曾柱
- 关键词：树突状细胞基因水平蛋白水平
