文继锋
- 作品数：4 被引量：19H指数：3
- 供职机构：四川农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：成都大熊猫繁育研究基金长江学者和创新团队发展计划四川省科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 小熊猫感染肺炎克雷伯氏菌的检查及药敏试验被引量：9
- 2017年
- 目的为确诊导致一只6岁左右的雌性小熊猫死亡的病因。方法无菌采集死亡小熊猫的心、肝、脾、肺等样品并进行病原学检查。通过对多个内脏样本进行细菌平行分离鉴定(形态特征、生化特性和16SrDNA分析),对分离得到的一株优势菌(R1)进行小鼠人工感染及药敏试验。结果 R1被鉴定为肺炎克雷伯氏菌,且未检测到别的细菌;R1对小鼠具有较强致病力,LD_(50)为6.5×10~4 CFU/mL,且死亡小鼠与该小熊猫具有一致临床表现和病理剖解症状;R1对头孢噻肟等药物敏感,对丁胺卡那等药物敏感性为中介,对青霉素等耐药。结论该小熊猫死于肺炎克雷伯氏菌感染。该菌对青霉素类抗生素耐药较强,且耐药谱较广,对大环内酯类、多肽类抗生素均有耐受作用,对头孢菌素类和氨基糖苷类抗生素敏感。
- 杨锐文继锋龚永平王承东邓林华黄杰任露颜其贵
- 关键词：小熊猫肺炎克雷伯氏菌RDNALD50药敏试验
- 致林麝猝死的病原豚鼠气单胞菌的分离与鉴定被引量：6
- 2017年
- 为了确定引起两头圈养林麝猝死的主要病原菌,确定合理的临床用药和预防方案,本研究采用血平板对死亡林麝的心、肝、脾、肺、肾等组织器官中可疑病原进行分离,通过菌落形态学观察、革兰染色镜检、16S rDNA序列测定分析、生化试验、致病性试验及药敏试验(DST)进行鉴定。通过16S rDNA基因的系统进化研究发现,从猝死林麝体内分离的细菌与豚鼠气单胞菌S5-3株的同源性高达99.9%,结合生化试验结果进行综合分析,确定致林麝猝死的致病菌为豚鼠气单胞菌。药敏试验结果显示,该菌株对氨苄西林、卡那霉素、链霉素、环丙沙星、头孢哌酮较敏感,对头孢他啶、哌拉西林、庆大霉素、复方新诺明、四环素为中敏,对红霉素、青霉素、利福平、头孢拉定、呋喃妥因存在多重耐药性;通过PCR检测分析,发现该菌株携带耐药基因bla-OXA和bla-PER;动物试验表明,给予小鼠接种3.9×10~8 CFU/0.3 m L的剂量会导致小鼠全部死亡,说明该菌株具有较强致病性。本研究结果对林麝养殖生产中临床用药具有一定的指导意义。
- 龚永平王洪永杨光友郗立新陈珍容任露文继锋易可可颜其贵
- 关键词：林麝豚鼠气单胞菌RDNA致病性试验
- 壳寡糖对大熊猫轮状病毒VP6-VP7亚单位疫苗免疫作用的研究被引量：4
- 2019年
- 为研究壳寡糖(COS)对大熊猫轮状病毒(GPRV)重组蛋白VP6-VP7的免疫增强作用,以原核表达的重组VP6-VP7蛋白为抗原,添加浓度为2.0 mg·mL-1 COS作为免疫佐剂制成GPRV VP6-VP7-COS亚单位疫苗。选取SPF级昆明小鼠78只随机分为4组。PC组免疫纯化的重组VP6-VP7蛋白,A组免疫VP6-VP7-COS疫苗,B组免疫VP6-VP7氢氧化铝胶佐剂疫苗,NC组注射PBS(对照组)。在0、15、30 d进行免疫接种,每次接种完成后于每周每组随机挑选6只小鼠采血分离血清,分别检测小鼠血清IgG、IgA抗体效价、T淋巴细胞转化率、细胞因子的含量,评估COS对GPRV重组VP6-VP7蛋白诱导的免疫应答反应的调节作用。试验结束后,取各组小鼠注射部位的肌肉组织进行病理组织学分析,以评价COS作为免疫佐剂的安全性。结果表明,VP6-VP7-氢氧化铝胶佐剂组、VP6-VP7-COS组免疫小鼠血清中所产生的IgG均显著(P<0.05)高于其他各组。VP6-VP7-COS组小鼠产生的IgA抗体含量显著(P<0.05)高于其他各组,VP6-VP7-氢氧化铝胶佐剂组和VP6-VP7-COS物理混合组诱导T淋巴细胞增殖的能力显著(P<0.05)高于VP6-VP7蛋白组。VP6-VP7-COS组、VP6-VP7-氢氧化铝胶佐剂组中IL-2、IL-4、IL-5及IFN-γ的含量均显著(P<0.05)高于其他组,组织病理学分析结果表明,以COS作为佐剂的VP6-VP7亚单位疫苗免疫小鼠后注射部位的肌肉组织未出现病理变化。本研究表明,GPRV重组蛋白VP6-VP7能够显著诱导动物机体的免疫应答,壳寡糖对GPRV VP6-VP7蛋白呈现较好的免疫增强效果。本研究为研制安全、无副作用和高免疫保护力的GPRV亚单位疫苗提供了参考。
- 文继锋申欢欢阴文奇龚永平易可可邓英颜其贵
- 关键词：壳寡糖免疫增强作用亚单位疫苗
- 三种融合标签对大熊猫轮状病毒结构蛋白VP6-VP7可溶性表达的影响
- 2019年
- 大熊猫轮状病毒(giant panda rotavirus,GPRV)是引起幼龄大熊猫腹泻的主要病原,对圈养大熊猫产生了较大的危害。轮状病毒结构蛋白VP6是一种载体蛋白,可介导黏膜免疫反应。VP7是轮状病毒结构蛋白中主要的中和抗原。因此,VP6-VP7的融合表达作为候选抗原对该病的防治具有重要的意义。传统大肠埃希菌原核表达存在表达量低、可溶性差以及纯度低等弊端。本研究使用醛缩酶(EDA)、谷胱甘肽S-转移酶(GST)、麦芽糖结合蛋白(MBP)3种融合标签,以实现获得表达量高和纯度高的GPRV-VP6-VP7重组表达蛋白。将扩增的 VP 6、 VP 7基因片段利用同源重组酶构建到含3种融合标签的表达载体pET21b上,将重组质粒转化至大肠埃希菌Rosetta(DE3)感受态细胞中进行低温诱导表达。用Ni-柱亲和层析法纯化目的蛋白,SDS-PAGE和Image J分析蛋白表达量和可溶性,Western blot分析得到表达的重组表达蛋白正确且具有蛋白活性。实验结果证明,EDA标签能显著促进VP6-VP7蛋白的原核可溶性表达,提高VP6-VP7蛋白表达量。
- 文继锋申欢欢龚永平易可可杨智捷邓英颜其贵
- 关键词：融合标签醛缩酶
