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黏蛋白1基因敲除小鼠模型的构建: 2014年; 黏蛋白1(MUC1)属黏蛋白家族成员,分布于上皮细胞膜表面,由于在免疫炎症反应以及肿瘤发生中的重要作用而日益受到重视.为了进一步深入研究MUC1的生物学功能,构建了Muc1基因敲除小鼠模型.首先,根据小鼠Muc1基因组序列设计基因剔除策略,将2个loxP位点分别插在外显子2和3两侧,构建基因剔除载体Muc1-ABRLFn-pBR322.以电穿孔方法将载体导入胚胎干细胞(ES细胞),用G418和更昔洛韦进行正负筛选获得4个同源重组的ES细胞克隆.挑选其中一个阳性ES克隆行囊胚显微注射,获得16只嵌合率大于50%的雄鼠;其次,利用嵌合雄鼠与C57BL/6J野生型雌鼠交配后获得11只floxP杂合子小鼠(10雄1雌),通过杂合子小鼠回交,并进一步与EⅡa-Cre小鼠交配,最终成功得到Muc1全身敲除小鼠,其中纯合子小鼠未出现胚胎致死现象.初步表型观察未发现Muc1基因敲除相关器官组织结构的异常改变.本研究为MUC1的生物学功能的挖掘,尤其是MUC1在肿瘤发生转移中的作用机制的揭示提供了实验平台.; 程布凯杨杰茅文莹石吉晶靳伟廖晓东匡颖赵克温黄雷; 关键词：黏蛋白1 小鼠生物学功能

WWP1通过溶酶体途径降解癌蛋白MUC1抑制肿瘤及其应用: 本发明提供了WWP1通过溶酶体途径降解癌蛋白MUC1抑制肿瘤及其应用。本发明中，揭示了WWP1与MUC1相互作用，WWP1促进MUC1的泛素化，通过溶酶体途径发挥降解作用，从而抑制肿瘤。WWP1其本身或其上调剂能够用于抑...; 黄雷廖春华邓华云廖晓东陈国强

人食管鳞癌细胞系RJEC-2的建立及其生物学特性分析: 2012年; 目的:建立新的人食管鳞状细胞癌细胞系并分析其生物学特性,为食管癌分子机制和治疗干预的研究提供新的实验模型。方法:采用组织块培养法,从病人食管癌组织中分离纯化鳞状上皮癌细胞并建立细胞系。对细胞系的形态特点、细胞角蛋白表达、生长特征、细胞周期分布、细胞遗传特征和致瘤能力进行了研究分析。结果:建立了食管鳞状细胞癌细胞系RJEC-2,已在体外持续传代4个多月,传至46代,生长稳定;该细胞系具有鳞状上皮细胞的形态和特点:单层贴壁生长,免疫组化显示细胞角蛋白表达阳性,电镜下可见明显的胞质内张力纤维束和细胞间桥粒;群体倍增时间为46.5 h,细胞培养至90%汇合时,细胞周期分析显示G0/G1期平均占56.72%,S期平均占33.96%,G2/M期平均占9.32%;细胞染色体结构和数量异常,呈现肿瘤细胞特性;细胞呈克隆性生长,平板克隆平均形成率为13.93%,裸鼠移植瘤实验表明细胞具有致瘤能力,病理分析显示移植瘤与病人肿瘤病理形态特征相似,均为中、高分化鳞状细胞癌。结论:成功建立的人食管鳞癌细胞系RJEC-2,为食管癌发病机制和治疗方案的研究提供了新的研究实验模型。; 杨杰廖晓东闫铮张丽君叶清徐明黄雷; 关键词：食管鳞状细胞癌生物特性移植瘤

WWP1通过溶酶体途径降解癌蛋白MUC1抑制肿瘤及其应用: 本发明提供了WWP1通过溶酶体途径降解癌蛋白MUC1抑制肿瘤及其应用。本发明中，揭示了WWP1与MUC1相互作用，WWP1促进MUC1的泛素化，通过溶酶体途径发挥降解作用，从而抑制肿瘤。WWP1其本身或其上调剂能够用于抑...; 黄雷廖春华邓华云廖晓东陈国强; 文献传递

GST-H2AX表达载体的构建及融合蛋白的纯化: 2013年; H2AX属组蛋白H2A家族成员,其磷酸化是细胞对DNA损伤做出反应的早期事件之一,在启动DNA修复过程中发挥重要功能.利用原核表达载体pGEX-4T-1构建了GST-H2AX融合蛋白表达载体,导入大肠杆菌DE3后经IPTG诱导和GST(Glutathione S-transferase)磁珠纯化获得GST-H2AX融合蛋白.进一步利用GST和H2AX抗体对融合蛋白进行了验证.既建立了高效、稳定的GST蛋白纯化方法,也为进一步研究H2AX结构及生物学功能奠定了基础.; 张亮黄雷廖晓东; 关键词：H2AX 原核表达融合蛋白

MUC1在食管癌成瘤中的作用被引量：1: 2014年; 目的:研究黏蛋白1(mucin1,MUC1)在食管癌发生中的作用,寻找食管癌发病的新机制。方法 :采用MUC1-siRNA和CTL-siRNA质粒转染Ec1.71细胞获得MUC1稳定沉默细胞系,分别通过MTT法、软琼脂克隆形成实验和裸小鼠移植瘤模型检测下调MUC1对鳞状上皮细胞食管癌细胞生长、克隆形成能力和体内成瘤能力的影响。结果:建立Ec1.71/MUC1-siRNA-A/B稳定沉默MUC1细胞系和Ec1.71/CTL-siRNA-A/B对照组细胞系各两株。与对照组Ec1.71/CTL-siRNA-A/B细胞系相比,MUC1沉默组Ec1.71/MUC1-siRNA-A/B细胞的生长速度显著减慢,软琼脂克隆数目明显减少,移植瘤的生长速度明显减慢、肿瘤体积更小。结论:MUC1与食管癌的形成密切相关,抑制其表达,可显著降低食管癌细胞的恶性程度。本研究为食管癌的发病机制研究和临床治疗提供了重要参考。; 邓华云杨杰赵克温黄雷廖晓东; 关键词：黏蛋白1 食管癌移植瘤

EGFR抑制剂在制备治疗MUC1阳性肿瘤药物中的应用: 本发明公开EGFR抑制剂在制备治疗MUC1阳性肿瘤药物中的应用，涉及靶向MUC1‑EGFR‑ABCB1信号通路的抑制剂与ABCB1底物化疗药物联合用药在制备治疗MUC1阳性肿瘤药物中的应用。本发明揭示了在宫颈癌和肺黏液表...; 黄雷靳伟廖晓东吕亚平叶清陈国强

EGFR抑制剂在制备治疗MUC1阳性肿瘤药物中的应用: 本发明公开EGFR抑制剂在制备治疗MUC1阳性肿瘤药物中的应用，涉及靶向MUC1‑EGFR‑ABCB1信号通路的抑制剂与ABCB1底物化疗药物联合用药在制备治疗MUC1阳性肿瘤药物中的应用。本发明揭示了在宫颈癌和肺黏液表...; 黄雷靳伟廖晓东吕亚平叶清陈国强; 文献传递

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廖晓东