张鹏翼
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- 应用优化的双向电泳技术建立纤维堆囊菌So0157-2蛋白质组数据库(英文)
- 2012年
- 堆囊菌丰富的次级代谢产物是新药的重要来源,而蛋白质组学分析是研究代谢调控的有效方法.然而堆囊菌含有大量的胞外多糖以及黏液,干扰了蛋白质组学分析中蛋白质的溶解度、分辨率及重现性.为了高通量地筛选Sorangium cellulosumSo0157-2表达的特异性蛋白,实验优化了S.cellulosum So0157-2双向电泳方法.首先,S.cellulosum So0157-2蛋白在裂解液中有更好的溶解度.pH 3～10非线性胶条和1 mg的蛋白上样量适用于第一向等电聚焦,分别提高了蛋白质点的分辨率和低丰度蛋白质的表达.15%SDS-PAGE改善了S.cellulosum So0157-2蛋白分离的分辨率和重现性.最终,通过优化的双向电泳方法获得了S.cellulosum So0157-2在M26培养基中培养3天的全蛋白质表达谱,并检测到552个蛋白质点.进而对表达蛋白通过MALDI-TOF-MS进行质谱鉴定,其中474个蛋白质得到鉴定,鉴定率85.9%.得到鉴定的蛋白质包括细胞结构和功能组分,以及细胞代谢合成酶类,其中8个蛋白质与糖类的转化和代谢相关,这有助于糖基化埃博霉素A的深入研究.该优化方法为进一步建立纤维堆囊菌So0157-2在各种培养条件下的蛋白质组表达数据库打下基础.
- 张鹏翼李越中吴志红刘红徐培培熊娟
- 关键词：双向电泳蛋白质组
