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尖吻蝮毒腺cDNA文库的构建、金属蛋白酶基因克隆和序列分析(英文)被引量：1: 2006年; 目的构建非标准化尖吻蝮（五步蛇，Agkistrodon acutus）毒腺cDNA文库，随机挑取克隆测序，分析金属蛋白酶基因。方法以Tnzd试剂提取新鲜尖吻蝮毒腺总RNA，以superscript Ⅱ反转录酶合成cDNA第一链并以DNA聚合酶Ⅰ连续合成第二链。双链DNA经过含EcoRⅠ酶切位点接头加接，末端磷酸化并以XhoⅠ内切酶酶切，按照〈0．25kb，0．25-0．5kb，0．5-1kb，1-2kb和〉2kb5个片段大小分别回收，随后与pBluescriptⅡSK（＋）载体相连转化E.coli DH10B，构建成尖吻蝮毒腺cDNA文库。随机挑取克隆5’端测序，共获得8696条高质量表达序列标签，经过序列拼接和聚类，这些序列在经过功能注释后最终被聚类成2855个基因聚类。其中，发现一个由74个克隆组成的基因聚类（Agkihagin）为新的金属蛋白酶基因。经反转录和巢式PCR扩增该基因并对其进行结构分析。结果构建好的文库含有2．048×10^6个重组子，新的金属蛋白酶开框读码序列全长1827个核苷酸，编码608个氨基酸，属于PⅢ型金属蛋白酶。其Zn^2＋结合模序HEMGHNLGIDH和去整合素模序DECD在进化上高度保守。结论该文库符合建库标准库容要求，为构建尖吻蝮毒腺基因表达谱和筛选新的目的基因提供了有效平台；克隆的金属蛋白酶基因与GenBank中其他蛇毒金属蛋白酶氨基酸序列同源性最高达87％，为研究蛇毒金属蛋白酶结构与功能的关系奠定了良好基础。; 刘清华胡松年银巍苏兴文张晓伟李晨吉邱鹏新颜光美; 关键词：基因文库

西洋参cDNA文库构建及表达序列标签(EST)分析被引量：18: 2008年; 为研究西洋参根的基因表达谱和挖掘其功能基因,采用表达序列标签(EST)技术首次建立了四年生西洋参根的EST文库。通过BLAST与Gene Ontology分析获得与人参皂苷生物合成相关、编码P450和糖基转移酶等的基因序列11个,与生长素调节生长发育相关、编码生长素响应因子4和生长素调节蛋白等的基因6个,与水分胁迫相关、编码蛋白dehydrin和DC2.15 like蛋白等的基因7个,与编码抗氧化酶如peroxidase和catalase相关的基因6个。另外,从西洋参根的EST文库获得抗病基因12个,分别编码转录因子WRKY家族蛋白和ribonuclease蛋白家族,62个EST是其他物种尚未报道的新基因。可见,EST技术作为功能基因组研究的重要手段可在西洋参功能基因的开发与研究中发挥重要作用,这些基因的发现为进一步克隆基因全长、研究基因功能、改良西洋参品质、阐明西洋参生长缓慢的分子机制等方面奠定了基础。; 陈士林孙永巧宋经元李滢李晨吉胡松年李西文姚辉张晓伟; 关键词：表达序列标签功能基因西洋参

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李晨吉

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