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用噬菌体表面表达技术筛选及表达抗重组人促红细胞生成素单链抗体ScFv被引量：4: 1998年; 目的获得抗重组人红细胞生成素（ｒｈＥＰＯ）的单链抗体（ＳｃＦｖ），为得到纯度高、活力强的重组人红细胞生成素（ｒｈＥＰＯ）产品和制备红细胞生成素（ＥＰＯ）检测试剂盒奠定基础。方法采用噬菌体表面表达和重组抗体技术，从已建立的鼠抗ｒｈＥＰＯ杂交瘤细胞株Ｄ３中克隆出抗ｒｈＥＰＯ单链抗体ＳｃＦｖ基因片段，经噬菌体表面呈现，与固相抗原ｒｈＥＰＯ结合，“吸附—洗脱—富集”，酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测，酶切鉴定及ＰＣＲ扩增鉴定，将阳性克隆重组质粒转化非抑制型Ｅ．ｃｏｌｉＨＢ２１５１，诱导表达抗ｒｈＥＰＯ单链抗体，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和Ｄｏｔ－ｂｌｏｔ杂交检测其抗原特异性。最后对阳性克隆进行序列测定，进行序列分析。结果挑选出了噬菌体表面表达抗ｒｈＥＰＯ单链抗体的阳性克隆，可溶性表达的单链抗体主要分布于细菌培养上清中，并且保留了亲本单抗对ｒｈＥＰＯ的抗原特异性和免疫活性。表达产物分子量约为３２ｋＤ左右。结论本实验成功地获得了抗ｒｈＥＰＯ抗体的可变区ＶＨ、ＶＬ基因，并表达出单链抗体ＳｃＦｖ片段。; 钟凌文吴淑华杨翔梁米芳侯云德; 关键词：噬菌体促红细胞生成素

痘苗病毒增强子样序列的特性研究: 1999年; 利用带有氯霉素乙酰转移酶报道基因的检测载体，从痘苗病毒基因组ＤＮＡ中筛选到一个增强子样片段。序列分析表明，该片段长２８３ｂｐ，是痘苗病毒ＤＮＡ依赖性ＲＮＡ聚合酶的一部分，具有两段２４ｂｐ长的重复序列。采用带有β－半乳糖甘酶报道基因的载体检测发现，该片段正向可以使报道基因表达增强１０９倍，反向可以增强３８倍。ＲＮＡｄｏｔｂｌｏｔ实验证实，它对基因的增强活性表现在转录水平上。; 秘晓林吴淑华朱民何建新杨翔侯云德; 关键词：痘苗病毒染色体

融合蛋白Epo-Tpo(C)的表达及初步活性检测被引量：4: 2001年; 目的　进一步研究促血小板生成素Tpo的功能 ,探讨新型Epo的可能性。方法　构建了融合蛋白Epo Tpo(C)的真核表达载体 ,在CHO细胞中表达融合蛋白 ,染料亲合柱Blue SepharoseCL 6B初步纯化 ,网织红细胞计数法体内测活并测定了体内半衰期和融合蛋白对大鼠肾衰模型的疗效。结果　初步纯化的融合蛋白体内活性比ELISA结果高 2 0 % ,半衰期为 12h ,比标准Epo长近5 0 % ,对大鼠肾衰模型有良好的疗效。结论　Tpo富糖基化的C端结构域能显著延长Epo的半衰期 ,融合蛋白Epo Tpo(C); 汪治清侯云德杨翔佟玉品杨新科; 关键词：血小板生成素红细胞生成素融合蛋白质类

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杨翔

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