高维强
- 作品数：11 被引量：16H指数：3
- 供职机构：上海交通大学医学院附属仁济医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市教育委员会创新基金全球变化研究国家重大科学研究计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Notch信号报告系统在前列腺肿瘤细胞系中的建立被引量：1
- 2016年
- 目的在前列腺肿瘤细胞系LNCa P中建立Notch信号报告系统。方法采用In-Fusion酶系统将巨细胞病毒(CMV)启动子和Notch蛋白胞内结构域(ICD)细胞核内DNA结合蛋白CSL的8拷贝串联DNA序列克隆入p LVX-ac GFP-N1慢病毒载体,构建Notch信号报告重组慢病毒表达质粒(p LVX-8XCSL-ac GFP)。在人胚肾293T细胞中转染p LVX-8XCSL-ac GFP质粒或对照质粒p LVX-ac GFP,6 h后再转染Notch受体的细胞内结构域(NICD)的表达质粒p ETP-NICD(过表达NICD)或对照质粒p ETP。转染48 h后用荧光显微镜观察GFP的表达,用流式细胞仪进行荧光定量分析。然后将p LVX-8XCSL-ac GFP质粒及对照质粒包装成慢病毒转导前列腺癌细胞系LNCa P,72 h后荧光显微镜观察绿色荧光,用流式细胞仪分选出GFP荧光强度最强5%及最弱5%的细胞。提取这两部分细胞的RNA,采用qRT-PCR方法检测细胞中Notch1、Notch2以及Notch信号通路下游靶基因Hey1的表达。结果在转染p LVX-8XCSL-ac GFP的293T细胞中,转染p ETP-NICD的细胞荧光强度较转染p ETP对照质粒的细胞增加了约10倍;而在转染p LVX-ac GFP的293T细胞中,转染p ETP-NICD的细胞与转染p ETP对照质粒的细胞荧光强度无明显差异。根据p LVX-8XCSL-ac GFP荧光强度分选出的LNCa P细胞,荧光强度高的细胞Notch1、Notch2、Hey1表达高于荧光强度弱的细胞(P均<0.05)。结论在LNCa P细胞中p LVX-8XCSL-ac GFP可以作为报告Notch信号水平的有效工具。
- 秦丽霞崔剑申海莲高维强
- 关键词：前列腺肿瘤NOTCH基因
- 下调转录因子KLF4抑制前列腺癌细胞上皮-间质转化及细胞迁移和侵袭被引量：5
- 2017年
- 目的:探讨下调Krüppel样因子4(Krüppel-like factor 4,KLF 4)对前列腺癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)和细胞迁移及侵袭能力的影响。方法:构建稳定敲降KLF 4的前列腺癌LNCaP-shKLF4细胞和对照组LNCaP-con细胞。应用实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测LNCaPshKLF4和LNCaP-con细胞中KLF4 mRNA和蛋白的表达,以及稳定敲降KLF 4的前列腺癌PC3-shKLF4细胞、对照组PC3-con细胞、LNCaPcon细胞和LNCaP-shKLF4细胞中EMT相关分子mRNA和蛋白的表达。Transwell小室法检测PC3-con、PC3-shKLF4、LNCaP-con和LNCaPshKLF4细胞的迁移及侵袭能力。结果:成功构建LNCaP-shKLF4和对照组LNCaP-con细胞。LNCaPshKLF4细胞中KLF4 mRNA及蛋白表达水平均低于对照组LNCaP-con细胞(P<0.01,P<0.05)。PC3-shKLF4和LNCaP-shKLF4细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)mRNA的表达水平分别高于对照组的PC3-con和LNCaP-con细胞(P值均<0.01),而PC3-shKLF4和LNCaPshKLF4细胞中N-钙黏蛋白(N-cadherin,N-cad)、锌指E-盒结合同源异体框1(Zinc finger E-box-binding homeobox 1,Zeb1)、Snail1、波形蛋白(vimentin,Vim)和基质金属蛋白酶1(matrix metallopeptidase 1,MMP1)mRNA的表达水平均分别低于对照组的PC3-con和LNCaP-con细胞(P值均<0.05)。PC3-shKLF4和LNCaP-shKLF4细胞中E-cad的表达水平分别高于对照组的PC3-con和LNCaP-con细胞(P值均<0.05),而PC3-shKLF4和LNCaP-shKLF4细胞中N-cad、Zeb1、Snail1、Vim和MMP1蛋白的表达水平均分别低于对照组的PC3-con和LNCaP-con细胞(P值均<0.05)。PC3-shKLF4和LNCaP-shKLF4细胞的迁移和侵袭能力均分别低于对照组PC3-con和LNCaP-con细胞(P<0.01,P<0.05)。结论:下调前列腺癌细胞中KLF4表达可促进上皮相关基因的表达,抑制间质相关基因的表达,从而在体外抑制前列腺癌细胞的迁移和侵袭。
- 魏莲子方煜翔高维强
- 关键词：前列腺肿瘤上皮-间质转化肿瘤侵润
- 干细胞对称和不对称分裂在哺乳动物发育及肿瘤发生和发展中的研究进展被引量：2
- 2013年
- 干细胞具有自我更新和分化的潜力,在组织发育、再生和修复中起着重要的作用。干细胞通过对称和不对称分裂来维持自我更新和分化之间的平衡。一旦对称和不对称分裂的精密调控被破坏,不仅会导致干细胞数量的改变,还可能促使肿瘤的发生。因此阐明干细胞对称和不对称分裂的调控机制对于了解肿瘤的发生和发展、寻找治疗肿瘤的新方法十分重要。本文就干细胞不对称分裂在哺乳动物发育和肿瘤发生及发展中的研究进展作一综述。
- 张晨璐高维强朱鹤
- 关键词：肿瘤干细胞
- 沉默TMEM45A基因表达可促进肾癌CAKI-1细胞的体外增殖和迁移被引量：1
- 2017年
- 目的:探讨跨膜蛋白45A(transmembrane protein 45A,TMEM45A)基因表达对肾癌细胞CAKI-1体外增殖和迁移能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:构建特异性针对TMEM 45A基因的TMEM45A-shRNA慢病毒载体,并制备为慢病毒后感染CAKI-1细胞,沉默CAKI-1细胞中TMEM 45A基因的表达。分别采用实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测TMEM45A mRNA及蛋白在CAKI-1细胞中表达水平的改变。通过CCK-8法和平板克隆法检测TMEM 45A基因沉默对CAKI-1细胞增殖和克隆形成能力的影响。通过Transwell小室迁移实验检测TMEM 45A基因沉默对CAKI-1细胞迁移能力的影响。采用蛋白质印迹法检测TMEM 45A基因沉默对CAKI-1细胞中蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称为Akt)及磷酸化Akt(phospho-Akt,p-Akt)蛋白表达的影响。结果:成功构建了LV-TMEM45A-shRNA慢病毒载体,并感染CAKI-1细胞株。携带有TMEM45A-shRNA的慢病毒载体转入CAKI-1细胞后,TMEM45A mRNA及蛋白的表达水平均被明显下调(P值均<0.01);CAKI-1细胞的增殖能力明显增强(P值均<0.01);CAKI-1细胞的迁移能力明显增强(P<0.01)。沉默TMEM 45A基因表达后,CAKI-1细胞中Akt蛋白的表达水平无明显变化(P>0.05),而p-Akt蛋白的表达水平明显升高(P<0.01)。结论:沉默TMEM 45A基因的表达可增强人肾癌细胞CAKI-1的增殖和迁移能力,其机制可能与磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/Akt信号转导通路的活化有关。
- 杨琼王明磊徐辉明高维强
- 关键词：肾肿瘤慢病毒感染细胞运动
- 前列腺癌细胞中CD44、TRA-1-60、E-钙黏蛋白和N-钙黏蛋白的表达及意义被引量：3
- 2014年
- 目的 :探讨干细胞相关标志物和上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关基因在雄激素敏感和雄激素抵抗的前列腺癌细胞膜上的表达及前列腺癌干细胞中EMT相关基因的表达。方法 :应用FCM法检测前列腺癌雄激素敏感的LNCaP细胞和雄激素抵抗的DU145、PC3和C42B细胞膜上CD44、TRA-1-60、E-钙黏蛋白和N-钙黏蛋白的表达。实时荧光定量PCR法检测流式分选获得的TRA-1-60+和TRA-1-60-的DU145、PC3和C42B细胞中E-钙黏蛋白和N-钙黏蛋白mRNA的表达。结果 :雄激素抵抗的DU145、PC3和C42B细胞膜上CD44、TRA-1-60和N-钙黏蛋白的阳性表达率[(93.23±2.14)%、(85.54±1.52)%和(92.52±1.69)%,(0.95%±0.23)%、(0.59±0.31)%和(0.99±0.16)%,(2.23±0.53)%、(15.31±1.13)%和(19.33±1.58)%]高于雄激素敏感的LNCaP细胞[(0.11±0.03)%、(0.07±0.01)%和(0.11±0.02)%],而E-钙黏蛋白的阳性表达率[(55.23±2.57)%、(41.64±0.96)%和(59.72±1.36)%]低于雄激素敏感的LNCaP细胞[(96.31±1.98)%],差异均有统计学意义(P<0.01)。TRA-1-60+的前列腺癌细胞中N-钙黏蛋白mRNA的表达水平高于TRA-1-60-的前列腺癌细胞,而E-钙黏蛋白mRNA的表达水平低于TRA-1-60-的前列腺癌细胞,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 :雄激素抵抗的前列腺癌细胞中CD44、TRA-1-60和N-钙黏蛋白的阳性表达率较高,TRA-1-60+的前列腺癌干细胞中N-钙黏蛋白mRNA的表达水平较高。
- 郭艳靓朱鹤高维强
- 关键词：生物学标记上皮-间质转化
- 4种化学小分子联合诱导鼠胚胎成纤维细胞转化为施旺细胞效果观察
- 2016年
- 目的观察转化生长因子-β抑制剂SB431542、骨形态发生蛋白抑制剂Noggin、腺苷酸环化酶抑制剂FSK、组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠联合诱导鼠胚胎成纤维细胞(MEF)转化为施旺细胞的效果。方法将孕13.5 d雌鼠处死后取胎鼠分离MEF细胞,分为观察组和对照组;观察组置于含10 ng/m L碱性成纤维细胞生长因子、20 ng/m L表皮细胞生长因子、20 ng/m L胶质细胞源性神经营养因子、5μmol/L全反式维甲酸、10μmol/L SB431542、200 ng/m L Noggin、10μmol/L FSK、0.2 mmol/L丁酸钠的neurobasal培养基中诱导培养,隔天换液,共诱导3周,对照组不处理。在倒置相差显微镜下观察并记录两组转化细胞的形态,采用Q-PCR法检测两组施旺细胞标志物S100β、人蛋白脂质蛋白抗体(PLP)mRNA。结果诱导培养3周后可见部分MEF细胞变成梭形,胞体较小,两侧突起纤长,呈旋涡状排列。观察组S100β、PLP mRNA相对表达量分别为34.100±5.657、18.980±2.031,对照组分别为0.985±0.015、0.995±0.005(P均<0.05)。结论 SB431542、Noggin、Forskolin和丁酸钠联合可诱导鼠胚胎MEF转化为施旺细胞。
- 王永辉杨琼徐辉明高维强
- 关键词：胚胎成纤维细胞转化生长因子-Β骨形态发生蛋白腺苷酸环化酶组蛋白去乙酰化酶
- FABP4对人主动脉内皮细胞分泌MMP2的影响
- 2015年
- 目的:探究脂肪酸结合蛋白4(FABP4)对人主动脉内皮细胞分泌基质金属蛋白酶2(MMP2)的影响。方法:体外培养的人主动脉内皮细胞分别用转化生长因子-β(TGF-β)及TGF-β加FABP4抑制剂HTS01037处理,检测处理前后内皮标志物CD31、VE-钙黏蛋白(VE-Cad)的mRNA表达,以及FABP4、MMP2的mRNA表达。结果:人主动脉内皮细胞用TGF-β处理后,内皮标志物CD31与VE-Cadherin mRNA表达升高,FABP4与MMP2的mRNA表达也升高(均P<0.05);用TGF-β加HTS01037处理后,与单用TGF-β处理相比,CD31、VE-Cad及FABP4、MMP2的表达均降低(均P<0.05)。结论:FABP4与TGF-β促进内皮细胞分泌MMP2的病理过程正相关。
- 胡晓娟伍婷王晨曦高维强李军
- 关键词：基质金属蛋白酶2
- 与泌尿生殖窦间质细胞共培养诱导hUC-MSCs定向分化为前列腺上皮样细胞被引量：1
- 2014年
- 目的研究人的脐带间充质干细胞(h UC-MSCs)与特异性的组织细胞在体外共培养,观察h UC-MSCs是否能够被诱导定向分化。方法原代培养h UC-MSCs和SD大鼠的泌尿生殖窦的间质细胞(r UGSSs)。将细胞消化传代、扩增、鉴定。将两种细胞混合在鼠尾胶中进行三维体外共培养,加雄激素诱导两周后将含有细胞的鼠尾胶做冰冻切片免疫荧光分析前列腺细胞特异性的标志物。结果将h UC-MSCs联合r UGSSs在体外诱导培养两周后,一些细胞表达前列腺上皮的标志物。包括基底细胞的标志物细胞角蛋白5(CK5)和P63蛋白、腔细胞的标志物细胞角蛋白8(CK8)染色阳性。结论 UC-MSCs与r UGSSs在体外共培养后,可以诱导为前列腺上皮样细胞。
- 李望高维强
- 关键词：分化
- 复合心肌补片对小鼠梗死心肌的修复效果观察
- 2015年
- 目的探讨以人心脏瓣膜组织脱细胞基质作为支架的复合骨髓c-kit+干细胞心肌补片(以下称复合心肌补片)对小鼠梗死心肌的修复效果。方法制作复合心肌补片。采用结扎左冠状动脉前降支法制作30只心肌梗死小鼠模型并随机分为复合补片组、补片组及对照组各10只。造模成功3 d时各组小鼠予异氟烷麻醉、固定,开胸暴露心脏。复合补片组将复合心肌补片移植于梗死心肌周边;补片组采用同样方法将脱细胞基质移植于梗死心肌周边;对照组不采取修复措施。采用心脏超声检测移植4周时三组心移植左室射血分数、左室短轴缩短率、心梗面积。结果移植4周时,复合补片组左室射血分数、左室短轴缩短率明显高于补片组及对照组,心梗面积明显小于补片组及对照组,P均<0.05。结论复合心肌补片用于修复梗死心肌效果满意。
- 万龙陈瑶高维强李军
- 一种嵌合型调控元件在肿瘤靶向基因治疗中的应用
- 2015年
- 肿瘤靶向基因治疗成功的关键是调控治疗基因在肿瘤细胞中特异、高效地表达。首次构建一种嵌合型表达调控元件,旨在转录水平、转录后水平和翻译水平上实现联合调控目的基因在肿瘤细胞中特异性表达。体外实验表明,在前列腺癌细胞系LNCa P中,该调控元件可将报告基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和荧光素酶(luciferase)的肿瘤表达特异性分别提高420%和480%。体外细胞存活实验表明,运用该元件调控单纯疱疹病毒-1胸腺激酶(HSV-1 TK)的表达能特异性杀伤LNCa P细胞,验证了该元件可成功用于治疗基因的肿瘤靶向表达。
- 周培杰高维强方煜翔
- 关键词：绿色荧光蛋白前列腺癌
