- 周期性静水压对人软骨细胞IL-1β和MMP-3代谢的影响被引量：1
- 2014年
- 目的:以正常成人软骨细胞及OA软骨细胞为研究对象,探讨在静水压作用下正常软骨细胞IL-1β和MMP-3代谢的变化,以及与OA软骨细胞之间的差异。同时观察在力学信号刺激下软骨细胞的IL-1β和MMP-3代谢有无相关性。方法:将体外培养的正常成人膝关节软骨第3代软骨细胞随机分为加压组和对照组。甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色进行细胞鉴定。将加压组细胞放入高压恒温静水压加压系统,冲入含有95%的空气和5%的CO2混合气体,以10MPa进行加压2h,共加压5d。分别于加压前、加压第3天、加压第5天后取加压组、对照组和OA组细胞培养液检测IL-1β、MMP-3含量。同时采用MTT法分析3组细胞的增殖情况。对三组细胞中IL-1β与MMP-3的水平做双变量相关分析,采用方差分析对三组标本间的IL-1β、MMP-3含量进行比较。结果:各组细胞IL-1β与MMP-3两者间存在正相关关系。OA组细胞中IL-1β与MMP-3含量高于加压组和对照组,加压组高于对照组。加压组、OA组软骨细胞的生长曲线与对照组相比增殖高峰降低,平台时间缩短。结论:10MPa间歇性静水压加压可抑制软骨细胞增殖,增加IL-1β与MMP-3分泌。
- 肖春颜世举靳雷王鑫裘秀春范清宇马保安
- 关键词：IL-1ΒMMP-3
- 人microRNA-194过表达及抑制表达慢病毒载体的构建及对人骨肉瘤细胞系SOSP-9607生物学特性的影响
- 2014年
- 目的:通过构建携带针对microRNA-194的shRNA载体及过表达载体,包装慢病毒,感染人骨肉瘤细胞系SOSP-9607,改变细胞内microRNA-194基因的表达水平,研究microRNA-194对细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响,为探索microRNA-194作为骨肉瘤生物治疗的新靶点提供理论和实验依据。方法:构建沉默及过表达microRNA-194的慢病毒载体;获得稳定感染的细胞株,改变细胞增殖相关生物学特性。结果:PCR及测序结果证实重组慢病毒表达质粒构建正确,过表达及抑制过表达重组慢病毒的滴度分别为1.5×108TU/ml及4×108TU/ml;microRNA-194沉默的人骨肉瘤细胞系SOSP-9607细胞增殖速度相较于其对照组明显上升;过表达microRNA-194的SOSP-9607细胞增殖速度显著下降(P<0.01)。MicroRNA-194沉默的人骨肉瘤细胞系SOSP-9607细胞凋亡率相较于其对照组明显下降,过表达microRNA-194的SOSP-9607细胞凋亡率显著上升(P<0.01)。与对照组比较,过表达microRNA-194的SOSP-9607细胞周期G0/G1细胞比例显著增加,G2/M期细胞比例显著减少,S期细胞比例显著减少(P<0.01)。结论:成功构建了microRNA-194过表达及抑制过表达慢病毒表达载体;miR-194的表达水平对SOSP一9607细胞的增殖和凋亡造成显著影响。MicroRNA-194可能成为骨肉瘤治疗的潜在新靶点,但该基因对骨肉瘤发生发展的作用及其机制尚待进一步研究。
- 韩康赵廷宝卞娜蔡成魁颜世举王鑫肖春孙聪杨静杨彤涛周勇马保安
- 关键词：慢病毒骨肉瘤
- 人工腰椎间盘置换研究应用进展被引量：1
- 2014年
- 椎间盘病变是脊柱外科的常见疾病,是成年人疼痛和致残的常见原因,常常给人带来沉重的肉体和经济负担。经过长时间的发展与脊柱外科手术的进步,常规手术治疗在临床上虽然取得了一定的疗效,但是没有保留脊柱的生理运动功能,对临近阶段的椎间盘的退变起到促进作用,并且腰椎运动节段的融合加快了邻近节段椎间盘和小关节的退变。腰椎独特的解剖学特点和生物力学的研究及不同材质和特点的人工椎间盘材料的发展使人工椎间盘手术成为可能。与常规手术方式相比,人工椎间盘假体设计与人生理的解剖结构更加吻合。术后可以保持瞬时和长期的稳定性,从而对邻近的椎间盘的退变起到抑制作用。取得了较好的疗效。人工椎间盘置换术作为治疗腰椎间盘除腰椎融合之外的另一合理选择,目的是使退变导致的疼痛可以稳定长期缓解,并重建椎间隙高度以保护神经,从而避免晚期关节突关节及邻近节段的病变,恢复脊柱的运动学和载荷特性。目前人工腰椎间盘有了长远的发展,适应症不断扩大,但仍有较多限制。期待在将来能够找出更加符合人体生物力学特点的材料和设计,使之成为一种更为有效的治疗腰椎疾病的治疗方式。现就人工椎间盘的类型、疗效、适应证、禁忌证以及术后并发症等方面予以综述。
- 韩康赵廷宝卞娜蔡成魁颜世举王鑫肖春沙浩董川杨彤涛周勇马保安
- 关键词：人工椎间盘疗效并发症
- 利用慢病毒载体观察microRNA-194对人骨肉瘤细胞系U2-OS生物学特性的影响被引量：3
- 2014年
- 目的:通过构建携带针对microRNA-194的shRNA载体及过表达载体,包装慢病毒,感染人骨肉瘤细胞系U2-OS,改变细胞内microRNA-194基因的表达水平,研究microRNA-194对细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响,为探索microRNA-194作为骨肉瘤生物治疗的新靶点提供理论和实验依据。方法:PCR扩增pri-miR-194及miR-194-5成熟体,克隆于慢病毒载体plent-i GFP中,转染大肠杆菌感受态细胞,收获并浓缩慢病毒颗粒,感染人骨肉瘤细胞系U2-OS。进行MTT,流式,平板克隆等试验。结果:1.重组慢病毒表达质粒构建正确,过表达及抑制过表达重组慢病毒的滴度分别为1.5×108TU/ml及4×108TU/ml;2.microRNA-194过表达的人骨肉瘤细胞系U2-OS细胞增殖速度,凋亡率及细胞周期相较于其它实验组都有明显变化(P<0.01)。结论:成功构建了microRNA-194过表达及抑制过表达慢病毒表达载体;miR-194的表达水平对U2-OS细胞的增殖和凋亡造成显著影响。microRNA-194可能成为骨肉瘤治疗的潜在新靶点,但该基因对骨肉瘤发生发展的作用及其机制尚待进一步研究。
- 韩康赵廷宝卞娜蔡成魁颜世举王鑫肖春沙浩董川杨彤涛周勇马保安
- 关键词：慢病毒骨肉瘤
- miR-152影响NK细胞对JEG-3细胞的杀伤效应
- 2013年
- 目的:研究miR-152分子对NK细胞杀伤JEG-3细胞效应的影响。方法:在滋养细胞肿瘤细胞系JEG-3细胞中分别转染pre-miR-152(实验组),Cy3标记的pre-miRNA-control(阴性对照),空白对照(NC)为未转染的JEG-3细胞。转染48h进行NK细胞的细胞毒测定,观察各组NK细胞对JEG-3细胞的杀伤效应。结果:与对照组相比,实验组NK细胞对JEG-3细胞的平均杀伤率显著增高(P<0.05),且随着效靶比的增高,杀伤率也增大。空白对照组与阴性对照组之间的NK细胞杀伤能力无显著差异(P>0.05)。结论:miR-152可以提高NK细胞对滋养细胞的杀伤作用。
- 朱晓明韩涛王华王鑫刘成娟师增增黄剑磊
- 关键词：JEG-3细胞细胞毒
- 高强度周期性静水压对人软骨细胞超微结构及Ⅱ型胶原分泌的影响被引量：1
- 2016年
- 目的体外观察高强度周期性静水压对人膝关节软骨细胞形态和超微结构及其Ⅱ型胶原分泌水平的影响。方法取正常成人膝关节软骨组织,采用两步酶消化法体外分离培养软骨细胞,分为2组:对照组,不施加压力;高压实验组,应用多功能恒温体外细胞培养中高压静水压力加载装置施加10.0 mPa压力,共5天,每日2 h。甲苯胺蓝染色法鉴定软骨细胞;倒置相差显微镜观察加压后软骨细胞形态的变化;利用透射电镜观察加压后软骨细胞内超微结构的变化。Ⅱ型胶原免疫组织化学染色法检测并半定量分析加压后软骨细胞Ⅱ型胶原分泌水平的变化。结果经高强度压力作用后,与对照组相比,高压实验组软骨细胞从形态上由多边形或不规则形变为长梭形,胞膜、胞质回缩,细胞量明显减少,生长稀疏;透射电镜观察显示,高压实验组软骨细胞出现染色体分布不均、染色体边集等细胞凋亡指征;Ⅱ型胶原免疫组织化学染色及半定量分析显示,高压实验组软骨细胞染色面积(43.76±5.61)%,较对照组染色面积(61.64±6.19)%相比,大小和程度均明显降低(P<0.05)。结论超过人生理范围的高强度压力作用,可视为一种机械应力损伤,会引起软骨细胞形态和细胞内超微结构的改变,并导致软骨细胞的凋亡和蛋白分泌的下降,以上实验数据的获取,为进一步研究压力损伤与骨关节炎发病机制的联系奠定了实验基础。
- 王鑫白倩徐奎裘秀春范清宇马保安
- 关键词：软骨细胞超微结构透射电镜
- 影响DF钢板治疗腰椎滑脱症手术疗效的原因分析
- 2006年
- 目的 探讨椎弓根固定系统内固定手术治疗腰椎滑脱症疗效未达到预期效果的原因。方法用椎弓根固定系统对95例腰椎滑脱症进行手术复位内固定，术后随访1年以上，对Ⅰ级（差），Ⅱ级（可）的临床资料进行分析。结果按sfeffee分级：Ⅰ级（差）1例，Ⅱ级（可）4例、Ⅲ级（良）36例、Ⅳ级（优）54例。对Ⅰ级Ⅱ级大概原因分析，Ⅰ级1例椎弓根螺丝松动，Ⅱ级2例是椎板减压不充分，另2例是滑脱椎体复位程度过大。结论严格把握手术适应证，对椎管狭窄减压应彻底，充分的植骨融合，重度滑脱椎体复位程度不可过大，是手术成功的关键。
- 陈峰陈兴王鑫冀振亮崔和平李增怀王宝明常富军刘旭剑崔丽华
- 关键词：腰椎滑脱手术影响因素
- 牙源性多孔双相生物陶瓷的制备和性能研究
- 2014年
- 收集临床上离体牙,经高温煅烧去除有机成分,将其与(NH4)2HPO4溶液混合后再次煅烧,制得以羟基磷灰石(HA)和β-磷酸三钙(β-TCP)为主要成分的双相陶瓷,磨碎过200目筛,用有机泡沫浸渍法制备多孔生物陶瓷,对材料进行物相分析、扫描电镜、孔隙率、元素分析和抗压强度检测。牙源性多孔陶瓷材料呈白色,主要物相为HA和β-TCP,为大孔/微孔多孔网状结构,孔隙率为74.85%,Ca/P为1.62,抗压强度应为(3.483±0.321)MPa。
- 康林吴海珍王鑫陆钰甘朝兵王生杰杨晓勇
- 关键词：羟基磷灰石Β-磷酸三钙生物陶瓷
- microRNA-15a模拟物对人关节软骨细胞增殖与凋亡的影响被引量：7
- 2013年
- 目的:近年来研究表明,关节软骨细胞凋亡在骨关节炎发病过程中起到了重要的作用,本文旨在探讨microrna-15a模拟物对于原代人膝关节软骨细胞增殖与凋亡的影响。方法:取人外伤性截肢后的膝关节软骨,采用双酶消化法分离获得人膝关节软骨细胞,并进行体外培养,通过甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色进行软骨细胞鉴定。将培养的软骨细胞传代后取第1代细胞,分为实验组和对照组,实验组采用mir-15a模拟物(has-mir-15a mimics)转染软骨细胞,上调软骨细胞内mir-15a的表达量;对照组分为阴性对照组、空白对照组。采用MTT法测定细胞增殖曲线,流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果:原代细胞中细胞呈多角形、圆形与梭型,贴壁生长;甲苯胺蓝染色胞质呈深蓝色,Ⅱ型胶原染色胞质呈黄褐色,为特异性染色。经统计学分析,实验组与对照组相比增殖速率明显下降(P<0.05)。实验组凋亡率(7.13%±0.57)与阴性对照组凋亡率(2.66%±0.15)相比明显增高(P<0.05)。结论:采用双酶消化法成功分离并培养具有生物学特性的原代人膝关节软骨细胞,通过转染mir-15a模拟物外源性增加关节软骨细胞内mir-15a表达量可显著促进其凋亡并抑制其增殖,为阐明骨关节炎发病机制提供了新的理论依据,为临床治疗提供了新的靶点。
- 颜世举靳雷肖春王鑫孙聪张开亮裘秀春马保安范清宇
- 关键词：软骨细胞骨关节炎细胞增殖
- MMT法评价多孔纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架材料的细胞毒性被引量：4
- 2011年
- 目的制备多孔纳米羟基磷灰石/壳聚糖(nHA/CS),对其进行细胞毒性检测。方法采用共沉淀法和粒子沥滤法制备多孔nHA/CS。分离培养大鼠成骨细胞,碱性磷酸酶(ALP)染色进行成骨细胞进行鉴定,倒置显微镜下观察培养过程中细胞的形态和增殖情况。MTT检测多孔nHA/CS支架材料对成骨细胞增殖的影响,评价细胞毒性。结果细胞可在多孔nHA/CS周围贴壁生长,并且附着、增殖,其生长及功能不受抑制。结论多孔nHA/CS无细胞毒性,有利于细胞的黏附和增殖,可以用于骨组织工程支架材料。
- 陆钰徐培甘朝兵王鑫赵玫吴海珍
- 关键词：成骨细胞细胞毒性MTT比色法
