许淼
- 作品数：10 被引量：6H指数：2
- 供职机构：卫生部更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项上海市教育委员会重点学科基金全球变化研究国家重大科学研究计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学化学工程更多>>
- 人凝血因子FⅧ BD区缺失载体对血友病A小鼠基因治疗效果的研究
- 龚秀丽许淼任晓叶郭歆冰陈雁雯曾凡一
- 优化反向PCR法对hTF转基因小鼠整合位点旁侧序列分析
- 2011年
- 自1982年世界上首次通过转基因动物技术获得＂巨鼠＂[1]以来,转基因动物的研究发展迅速。随着多种转基因动物的成功获得,研究者设想利用动物表达外源基因,以动物个体作为一个反应器来生产有价值的蛋白质。
- 谢俊许淼龚秀丽曲立娟颜景斌黄英
- 关键词：转基因小鼠整合位点转基因动物技术外源基因
- 人转铁蛋白转基因克隆牛整合位点检测被引量：1
- 2012年
- 为检测外源基因整合在转基因克隆牛染色体上的定位情况,通过优化染色体荧光原位杂交技术,成功对4头人转铁蛋白转基因克隆牛的整合位点进行定位。每头牛分析中期分裂相40个以上,杂交率在53.1%～86.8%之间,且杂交信号分别位于转基因克隆牛的11号、15号和19号染色体的相应位置;另外采用定量PCR方法对杂交信号强弱不同的转基因克隆牛个体进行整合位点拷贝数的检测,结果显示拷贝数的多少与杂交信号强弱直接有关。
- 刘宇朱怡文许淼黄英
- 关键词：荧光原位杂交整合位点拷贝数
- 人凝血因子FVⅢ BD区缺失载体对血友病A小鼠基因治疗效果的研究
- 目的:血友病A是由于人凝血因子Ⅷ(hFVIII)缺乏所导致的遗传病。本研究旨在探究血友病A基因治疗载体对血友病A小鼠的治疗效果。方法构建带有CMV启动子的hFVIIIBD质粒载体,使用受精卵原核显微注射技术制备转基因小鼠...
- 龚秀丽许淼任晓叶郭歆冰陈雁雯曾凡一
- 文献传递
- 牛绝对端粒长度测定及DNA提取造成的影响
- 2023年
- 目的:端粒是真核生物染色体末端的一种高度保守的负责维持染色体稳定的特殊结构,其DNA序列长度即端粒长度,会随着年龄增长或疾病发生发展而逐渐缩短,检测端粒长度可以为评估机体衰老和健康状况提供参考,但目前缺乏测定微量牛DNA样本绝对端粒长度的方法;通过实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)实现微量牛DNA样本绝对端粒长度的测定并评估DNA提取方法对牛绝对端粒长度测定结果的影响,为进行端粒长度研究时选择合适的DNA提取方法和端粒长度分析方法提供参考。方法:利用标准曲线对检测样本的端粒和内参Ct值进行转换,通过qPCR测定牛端粒长度绝对值;采用膜吸附法、苯酚-氯仿法和磁珠法3种方法分别提取相同样本的DNA,分别用端粒末端限制性片段(terminal restriction fragment,TRF)分析法和qPCR法分析端粒长度,比较不同DNA提取方法对牛绝对端粒长度测定的影响。结果:(1)qPCR可以测定纳克级别DNA样本的绝对端粒长度,检测结果重复性良好,并且和“金标准”TRF测定结果的相关性良好。(2)不同方法提取的DNA用TRF分析法和qPCR法测定端粒长度时,结果有显著差异,其中磁珠法提取的DNA在用2种不同方法进行端粒长度测定时,测定结果的一致性最好。结论:qPCR法是较TRF分析法更加灵敏的端粒长度绝对值测定方法,适合微量DNA样本的测定,且方便快捷;DNA提取方法会影响端粒长度的测定结果,在测定时应统一样本的DNA提取方法,磁珠法是相对更优的选择。
- 鲍莉雯蔡勤周一叶许淼舒娟许淼舒娟李华曾凡一
- 关键词：端粒长度TRFDNA提取方法
- 应用实时荧光定量PCR测定牛体细胞端粒长度被引量：2
- 2010年
- 本研究为了验证应用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative PCR,Q-PCR)测定牛基因组端粒长度的可行性,选取18个不同来源牛耳成纤维细胞抽提基因组DNA为样本,对Q-PCR和经典的Southern印迹法进行了相关性分析。结果显示,Q-PCR测定端粒长度相对T/S为1.16±0.24,Southern印迹法测量端粒平均TRF值为16.99 kb±0.85 kb,两种方法获得的结果相关性分析R2=0.5612(P<0.01),因此实时荧光定量PCR是一种测定牛基因组端粒长度的可靠的方法。
- 吕昆林丹许淼朱怡文黄英
- 关键词：荧光定量聚合酶链式反应印迹法牛体细胞端粒长度
- 外源基因转染山羊体细胞的整合效率研究被引量：1
- 2013年
- 为了探讨影响山羊体细胞中外源基因整合效率的因素,采集胎羊和小羊皮肤并制备成纤维细胞,采用"Lipofectamine LTX"脂质体转染试剂包埋外源基因,分别导入上述细胞中,比较同一种外源基因载体(人凝血因子Ⅸ)转染至不同个体和类型的羊细胞,以及不同载体(人凝血因子Ⅸ、人转铁蛋白和牛催乳素)转染至同一个体羊细胞的整合效率的差异.通过药物筛选得到单细胞簇,经定量PCR计算外源基因的整合效率.同一种外源目的基因载体转染小羊成纤维细胞的整合效率显著高于胎羊成纤维细胞(P<0.05);而不同目的基因载体转染同一个体羊细胞,其细胞的整合效率与转染载体的片段大小有关.由此可知,小羊成纤维细胞外源基因整合频率优于胎羊细胞,且载体片段的大小影响外源基因转染的整合频率.
- 蔡琳琳蔡勤许淼黄英
- 关键词：基因转染体细胞核移植技术
- 常见遗传病基因诊断技术体系的建立及应用
- 曾溢滔黄淑帧任兆瑞曾凡一颜景斌陈美珏黄英许淼王娟龚秀丽
- 基因诊断即分子诊断，对实现精准医疗和个体化医疗、有效干预遗传病的发生和保障国民身体健康具有重要意义。30多年来，该项目始终瞄准国际上基因诊断的最新态势，系统地开展了多种常见遗传病基因诊断的研究，推动了中国基因诊断学科的进...
- 关键词：
- 关键词：遗传病基因诊断发病机制
- 超声引导下宫内移植制备人／山羊干细胞嵌合体的方法建立被引量：2
- 2009年
- 目的建立超声引导下的干细胞山羊宫内移植的方法。方法首先获得胎羊腹部横断面的超声图像，然后在超声引导下将7号穿刺针快速刺入妊娠45～55d的胎羊腹腔内，将外源干细胞注射入胎羊腹腔中，并定期观察受体胎羊在移植后的生长发育和流产情况以及出生后外源细胞的嵌合比例。结果通过超声引导能准确安全地进行外源干细胞的宫内移植，在移植的49头胎羊中，有36头胎羊顺利出生，其余13头流产（流产率26．5％，13／49），与非移植组流产率相当，明显低与剖腹手术移植组（流产率6％）。结论超声引导下的干细胞宫内移植是一种简便和安全的方法，能有效避免剖腹手术方法带来的高流产率，非常适用于宫内移植嵌合体模型的制备，从而为研究干细胞在体内生物学特征和干细胞宫内移植的临床应用提供了技术手段。
- 许淼黄文英胡伟熊灿盛敏曾凡一黄淑帧
- 关键词：超声引导干细胞
- 一种快速检测CLN6模型小鼠基因型的方法——高分辨率熔解曲线分析法
- 2012年
- 目的建立利用高分辨率熔解曲线（HRM）分析快速鉴定CLN6（神经元蜡样脂褐质沉积症，ceroid—lipofuscinosis，neurona16）小鼠（c2硒基因移码突变）基因型的方法。方法根据NCBI公布的小鼠cln6序列（NC00075）设计HRM引物和测序引物，然后采用HRM技术获得高分辨熔解曲线鉴定实验小鼠基因型，同时通过直接测序法进行验证，评价其灵敏性和准确性。结果181只实验小鼠经HRM检测，共有野生型11只、Cln6基因突变杂合子73只和纯合子97只，HRM结果和直接测序结果完全一致，准确性为100％。结论HRM方法检测DNA微小突变时具有操作简便、快速、灵敏，单管避免污染以及准确度高等优点，值得推广。
- 许淼王娟龚秀丽蔡勤颜景斌Nanbert Zhong曾凡一黄淑帧
