王鹏
- 作品数：2 被引量：7H指数：2
- 供职机构：华南理工大学生物科学与工程学院更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学更多>>
- 编码米曲霉果糖基转移酶基因在大肠杆菌中的重组表达被引量：3
- 2014年
- 为了大量获得果糖基转移酶,本文通过RT-PCR扩增获得米曲霉果糖基转移酶基因,连接到大肠杆菌pEASY-E1质粒上,并转化到大肠杆菌BL21-DE3菌株中成功表达,通过对重组菌诱导表达条件的优化,最终确定在诱导温度为25℃,诱导剂异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)浓度为1.0μmol/mL的条件下,该重组酶可以顺利表达。利用重组质粒PEASY-S1上的6×组氨酸标签,用亲和层析的方法纯化能够得到较高纯度的果糖基转移酶。以蔗糖为底物,用该酶进行果糖基转化生产低聚果糖的实验结果表明:重组果糖基转移酶具有一定催化能力,其酶活力达到59.0 U/g,且在低温诱导时稳定表达,具备一定的潜在开发利用价值。本实验成功在大肠杆菌中重组表达出果糖基转移酶,并且能够短时间内、大量表达具有催化活性的果糖基转移酶,可望为果糖基转移酶的工业化提供理论基础。
- 王玉海岳娟王鹏林晓珊张毅
- 关键词：果糖基转移酶大肠杆菌蛋白表达
- CCD响应面设计优化米曲霉产果糖基转移酶的发酵工艺被引量：4
- 2016年
- 本文用蔗糖、豆粕粉、玉米粉作为基础培养基,对产果糖基转移酶的米曲霉诱变融合菌株RⅢ-7进行发酵实验,通过Plackett-Burman优化实验,得到影响其发酵的3个显著因素,分别为蔗糖浓度、豆粕粉浓度、转速;再通过中心复合设计(CCD)响应面设计进一步优化米曲霉产果糖基转移酶的发酵工艺,实验结果表明,蔗糖、豆粕粉和转速之间存在着交互作用,其中豆粕粉浓度与转速之间的交互作用显著,得到最优工艺参数为:蔗糖浓度为5.95%、豆粕粉浓度为1.60%、转速为165 r/min。经验证,在最优发酵工艺条件下,米曲霉产果糖基转移酶酶活力达到870.21 U/g,与预测值895.68 U/g接近,误差为0.028%。
- 王鹏蒋波王圣海范森林晓珊张毅
- 关键词：米曲霉果糖基转移酶响应面设计
