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巨细胞病毒重组抗原的制备纯化及鉴: 目的:应用生物信息学技术对人类巨细胞病毒(Human Cytomegalovirus,HCMV)分子进行抗原表位预测,构建并表达具有多表位的重组融合蛋白并进行免疫原性鉴定. 方法:GenBank中查询HCMV氨...; 王良梅李智洋许红攀夏艳艳庞露司进; 关键词：巨细胞病毒抗原蛋白纯化免疫反应性

卷曲蛋白跨膜受体7基因启动子的构建及其肝癌特异性转录调控活性研究: 2016年; 目的构建卷曲蛋白跨膜受体7（FZD7）基因启动子，并分析其肝癌特异性转录调控活性。方法构建FZD7启动子及FZD7启动子变异体（MutFZD7），并设计合成荧光报告载体pFZD7-绿色荧光蛋白（GFP）、MutpFZD7-GFP。将各重组质粒载体转染至肝癌细胞HepG2、SMMC7721及正常肝细胞1．02中，用荧光显微镜和流式细胞仪检测GFP的表达。在裸鼠肝癌移植瘤模型瘤体内注射各重组质粒后，制备肿瘤组织冰冻切片并在荧光显微镜下观察GFP表达。结果转染pFZD7-GFP的肝癌细胞HepG2和SMMC7721中均有高强度荧光，且GFP表达率分别为（45．1±3．1）％和（25．3±2．5）％，显著高于L02细胞的GFP表达率[（0．4±0．3）％，P〈0．05]；而转染MutpFZD7-GFP的HepG2、SMMC7721和L02细胞中荧光强度明显较弱，且GFP表达率分别为（21．5±2．7）％、（12．3±2．1）％和（0．2±0．1）％，均显著低于转染pFZD7-GFP的各对应组（P〈0．05）；对照组中，转染对照质粒pFZD7-Luc的肝癌细胞及L02细胞中未检测到GFP的表达，而转染对照质粒pEGFP-N1的各细胞株中均有大量细胞表达GFP。在裸鼠肝癌移植瘤中有相似的结果。结论FZD7启动子具有高度的肝癌特异性活性，T细胞因子／淋巴增强因子（TCF／LEF）转录因子结合位点在其转录调控中发挥关键作用。; 许红攀李智洋龚来玲夏艳艳庞露司进; 关键词：启动子肿瘤特异性转录调控

高尔基体蛋白GP73单克隆抗体的制备、鉴定及磁酶免检测技术的研究: 目的:肝细胞性肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是目前世界范围内位居第5位的致死性恶性肿瘤,也是近年来发病率上升最快的肿瘤之一.我国是肝癌的高发区,全球每年新发肝癌病例约56万,我国占1/2...; 夏艳艳李智洋司进

重组人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白线性多表位抗原肽的构建及鉴定: 2016年; 目的探讨应用生物信息学技术对人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）分子进行B细胞表位的预测的可行性，筛选出具有诊断价值的线性表位分子，构建并表达重组线性多表位抗原肽并进行免疫原性鉴定。方法2015年7月南京医科大学第二附属医院检验科查询GenBank中NGAL氨基酸序列，利用Predicted、ABCpred、BepiPred、BcePred及Lasergene软件进行B细胞线性表位预测，构建、原核表达预测出的可能表位，通过免疫印迹实验筛选出可与现有NGAL多克隆抗体反应的单表位抗原，最后将获得的单表位抗原构建、表达出多表位抗原肽，并对其进行免疫反应性鉴定。结果综合预测得出了8个可能的表位，通过构建pET32a-N1-N8原核表达载体，经表达、纯化、免疫印迹筛选，获得了3条具有较强抗原性的表位，随后构建出的多表位原核表达载体pET22b—NgM—MEP1，获得了可溶性表达的融合蛋白，通过Ni2＋亲和柱纯化，成功纯化出了融合蛋白。免疫印迹试验表明，该重组融合蛋白具有较强抗原性。结论构建的NGAL多表位线性抗原肽在原核表达系统中能获得高效可溶性表达，并具有较强免疫反应性，可用于后续抗体制备。; 章祥浩李智洋许红攀夏艳艳庞露司进; 关键词：B细胞成熟抗原表位免疫印迹法

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夏艳艳

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