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体细胞核移植生产转TLR4基因绵羊: 本研究构建TLR4基因表达载体，优化绵羊体细胞克隆胚胎激活方式，在体内培养转基因绵羊克隆胚胎，利用转基因克隆技术生产转TLR4基因绵羊。; 邓守龙姚玉昌崔茂盛刘国世连正兴; 关键词：绵羊体细胞核移植转基因技术胚胎培养克隆技术

利用体内外成熟卵母细胞生产转TLR4基因抗病克隆绵羊的研究: 2013年; 研究旨在提高羊的抗病性能、生产培育高抗病力的转基因羊。本实验分别利用绵羊超数排卵获得的体内卵母细胞和体外成熟培养的卵母细胞作为核受体进行转基因克隆羊的生产。体内超排共获卵2 431枚,其中可用卵77.29%(1 879/2 431);体外成熟培养共获卵3 292枚,其中可用卵70.90%(2 334/3 292)。体内外核移植实验分别获得体内重构胚1 879枚、体外重构胚1 786枚。结果表明:体内核移植重构胚融合率(81.12%)显著性高于体外核移植重构胚(68.88%)(P<0.05);将部分体内、外重构胚以手术法分别移植于89只及72只受体,体内重构胚移植妊娠率为10.11%,显著高于体外重构胚移植妊娠率(2.78%)。体内、外重构胚移植后各产羔1只,PCR检测均为转TLR4阳性。本实验初步建立了一套较有效的体内外核移植生产转基因克隆羊的方法,并比较了不同来源卵母细胞对核移植效率的影响,发现体内超数排卵所获取的成熟卵母细胞数量、质量均优于体外成熟培养获卵。; 徐静卓志勇邓守龙张运海刘国世连正兴张金龙; 关键词：超数排卵 IVM 转基因克隆绵羊

转基因山羊抑制口蹄疫病毒3D基因: 2013年; 利用shRNA与高效的"睡美人"(sleeping beauty,SB)转座子系统生产抑制口蹄疫病毒3D基因复制的山羊.对口蹄疫病毒基因(2B,3D)shRNA抑制靶点进行筛选,构建了3条含靶基因shRNA的pLL3.7表达载体,与含靶基因的psiCheck2载体(双荧光素标记)共转染293FT细胞,对合成的shRNA进行筛选.获得的抑制效果好的3D1shRNA(干扰3D基因)插入到SB转座子载体上,将含3D1shRNA的SB转座子与转座酶(2:1,5:1,10:1)通过原核显微注射生产转基因山羊.出生羔羊进行Southern blot与整合位点鉴定,对阳性个体耳成纤维细胞转染含3D基因的pisCheck2载体,观察其抑制率.结果共获得了7只阳性山羊.SB转座子与转座酶的比例为10:1时,生产转基因山羊的效率为21.05%.阳性个体耳成纤维细胞对口蹄疫病毒3D基因有显著抑制效果.; 邓守龙于坤李文婷姚玉昌鲁涛赵雅琳袁三平富俊才连正兴; 关键词：山羊 SHRNA

外源Toll样受体2转基因绵羊的构建与鉴定被引量：3: 2013年; Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)是识别革兰氏阳性细菌如引起羊乳腺炎、炭疽病、破伤风等病原体的一种重要受体,而TLR2过表达转基因羊为研究TLR2在防卫细菌侵染中的作用提供了一个理想的模型。因此,研究首先通过显微注射TLR-2过表达载体3S-Loxp-TLR2的方法对绵羊进行外源基因TLR2整合,然后采用PCR和Southern blot方法对其进行鉴定、拷贝数验证和表达量分析。结果表明,注射148个受精卵,共产下15只小羊,其中8只小羊检测为阳性,转基因率为53.3%;Southern杂交结果发现转TLR2小羊的基因组中外源TLR2基因均为单拷贝;且转基因羊TLR2 mRNA表达高于对照。说明成功构建了转TLR2基因羊。; 张弘韬潘求真冯国兴邓守龙连正兴; 关键词：绵羊 TLR-2 转基因

优化克隆抗病绵羊胚胎技术的研究: 体细胞介导的核移植技术是目前转基因动物研究者备受青睐的方法。以休细胞介导的核移植技术中，外源基因首先通过转染进入体细胞，然后通过药物筛选得到永久性地整合到细胞染色体组上的阳性细胞克隆。本研究旨在应用体细胞核移植技术生产抗...; 邓守龙冯国兴连正兴; 关键词：转基因动物体细胞核移植绵羊胚胎; 文献传递

TLR4基因上调iNOS的表达引起绵羊单核巨噬细胞的氧化应激: 本文以绵羊为研究对象，研究TLR4基因上调iNOS的表达引起绵羊单核巨噬细胞的氧化应激机理结果表明：过表达TLR4绵羊单核巨噬细胞在LPS刺激下，ROS与RNS的表达显著增强，进行强烈的氧化应激反应。单核巨噬细胞中，NO...; 邓守龙韩红兵连正兴刘以训; 关键词：绵羊基因表达单核巨噬细胞氧化应激; 文献传递

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邓守龙