胡金
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- HSV-1碱性脱氧核糖核酸酶在毕赤酵母中的表达、纯化和活性鉴定
- 目的在毕赤酵母中表达HSV-1复制的关键酶——碱性脱氧核糖核酸酶（alkaline deoxyribonuclease,AN）,检测其核酸外切酶活性,从而进一步研究AN的抑制剂。方法以GenBank发表的HSV-1的17...
- 胡金陈恬张文秋张燕王永洪兰婉莹
- 关键词：HSV-1毕赤酵母酶活性
- 文献传递
- HSV-1碱性脱氧核糖核酸酶AN在毕赤酵母中的表达、纯化和活性鉴定
- 2016年
- 目的在毕赤酵母中表达HSV-1复制的关键酶——碱性脱氧核糖核酸酶(alkaline deoxyribonuclease,AN),检测其核酸外切酶活性,从而进一步研究AN的抑制剂。方法以Gen Bank发表的HSV-1的17株UL12基因为模板,在不改变UL12氨基酸序列的情况下选择毕赤酵母偏好密码子,设计合成新的基因UL12-2,定向克隆进毕赤酵母表达载体p PIC9K中,经酶切和测序鉴定证明重组载体构建成功。线性化的重组载体p PIC9K-UL12-2,电转化至毕赤酵母菌GS115,用组氨酸缺陷平板选择His+转化子,并进行表型测定,筛选出高抗性转化子。采取甲醇诱导表达,对诱导表达96h的上清进行离子交换层析,SDS-PAGE检测经纯化的AN,并对AN进行核酸外切酶活性检测。结果重组质粒p PIC9K-UL12-2在GS115中成功分泌表达,表达产物纯化后经SDS-PAGE检测可见目的蛋白条带,目的蛋白显示出核酸外切酶活性。结论毕赤酵母成功表达了具有核酸外切酶活性的碱性核酸酶AN,为抗HSV-1新药的研发奠定了基础。
- 胡金陈恬张文秋张燕王永洪兰婉莹
- 关键词：HSV-1AN毕赤酵母
- HSV-1碱性核酸酶AN在毕赤酵母中的表达、纯化和活性鉴定
- 碱性脱氧核糖核酸酶(alkaline deoxyribonuclease,AN)由HSV-1的ul12基因编码,在碱性条件下同时拥有核酸外切酶活性和核酸内切酶活性,理论分子量为68.3kD,AN是HSV-1的复制关键酶。...
- 胡金
- 关键词：HSV-1AN毕赤酵母酶活性
- 文献传递
