李雅斐
- 作品数：10 被引量：14H指数：2
- 供职机构：四川大学华西第二医院更多>>
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- 地塞米松对脓毒症相关性脑病大鼠海马区星形胶质细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白表达的影响
- 2016年
- 目的探讨地塞米松对脓毒症相关性脑病(SAE)大鼠海马区星形胶质细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)表达的影响。方法 90只30日龄健康雄性Wistar大鼠被随机分为假手术组(10只)和盲肠结扎穿孔术(CLP)组(80只)。CLP组采用CLP建立脓毒症大鼠模型。CLP后12 h时如大鼠出现神经行为学评分降低、脑电图和体感诱发电位(SEP)异常,则诊断为SAE。再将SAE大鼠随机分为脑病未治疗组和地塞米松组。地塞米松组行尾静脉注射地塞米松(1 mg/kg),隔天1次,共3次;脑病未治疗组注射同剂量的生理盐水。大鼠40日龄时再次行神经行为学评分、脑电图和SEP检查,然后统一处死大鼠,取大鼠海马组织,蛋白质印迹法检测海马区神经细胞m TOR蛋白的表达,免疫荧光检测海马区星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和m TOR的表达,图像分析系统软件统计阳性表达的细胞数量。结果 80只CLP大鼠在术后12 h内死亡6只,CLP后12 h时检查发现存活74只大鼠中有28只出现神经行为学评分降低,脑电图和SEP异常,诊断为SAE,其发病率为37.84%(28/74)。大鼠40日龄时,与脑病未治疗组比较,地塞米松组大鼠神经行为学评分降低,脑电图的α波明显减少、δ波增加,SEP的P1振幅下降、P1和N1潜伏期延长(P<0.05)。GFAP免疫荧光染色提示:假手术组大鼠海马区星形胶质细胞胞体小,突起细;而脑病未治疗组星形胶质细胞胞体和突起肥大,与假手术组比较,细胞数量明显增多(P<0.05);与脑病未治疗组比较,地塞米松组星形胶质细胞胞体小,突起细,细胞数量也明显减少(P<0.05)。与假手术组比较,脑病未治疗组表达m TOR的星形胶质细胞数量明显增多(P<0.05),与脑病未治疗组比较,地塞米松组表达m TOR的星形胶质细胞数量明显减少(P<0.05)。结论 SAE时大鼠海马区星形胶质细胞被激活,存在反应性增生,m TOR表达上调,而地塞米松对其具有抑制作用。
- 陈斌李雅斐苏云洁李熙鸿
- 关键词：海马胶质纤维酸性蛋白哺乳动物雷帕霉素靶蛋白
- 地塞米松对脓毒症幼年大鼠大脑皮质神经元LC3表达的影响被引量：1
- 2016年
- 目的探讨地塞米松对脓毒症幼年Wistar大鼠大脑皮质细胞和神经元LC3表达的影响。方法阑尾结扎穿孔术（CLP）建立幼年Wistar脓毒症大鼠模型。60只30日龄健康雄性Wistar大鼠按随机数字表法随机分为假手术组（10只）、脓毒症未治疗组（25只）和地塞米松组（25只）。地塞米松组在CLP后12h时行尾静脉注射地塞米松（1mg／kg），隔天1次，共3次，脓毒症未治疗组注射同剂量的9g／L盐水。定期对大鼠进行神经行为学评分。大鼠40日龄时被统一处死，取大鼠大脑皮质组织，免疫荧光检测大脑皮质细胞LC3和神经元核抗原（NeuN）的表达，图像分析系统软件统计表达阳性的细胞数量，Westernblot检测LC3-I和LC3-II蛋白的表达。结果CLP后3h时Wistar大鼠开始出现蜷缩少动、竖毛、寒战等表现，脓毒症未治疗组大鼠神经行为学评分低于假手术组（t=9．895，P=0．000）。CLP后10d（即大鼠40日龄），地塞米松组25只大鼠死亡12只，死亡率48％，脓毒症未治疗组25只大鼠死亡8只，死亡率32％，2组死亡率差异无统计学意义（χ2=1．333，P=0．248）。免疫荧光染色和图像分析提示：与假手术组和地塞米松组比较，脓毒症未治疗组大鼠大脑皮质LC3阳性细胞的比例明显增多（0．6067±0．0301比0．3533±0．0258，t=15．644，P=0．000；0．6067±0．0301比0．2703±0．0194，t=22．450，P=0．000）。Westernblot检测表明：脓毒症未治疗组大鼠大脑皮质细胞LC3．II表达上调，LC3-II／LC3-I比值明显高于假手术组和地塞米松组（0．4133±0．0225比0．2050±0．0152，t=18．802，P=0．000；0．4133±0．0225比0．1850±0．0235，t=17．206，P=0．000）。假手术组和地塞米松组大鼠大脑皮质LC3阳性神经元较少，与假手术组和地塞米松组比较，脓毒症未治疗组大鼠大脑皮质LC3阳性神经元明显增多（0．5800±0．0200比0．2983±0．0147，t=27．783，P=0．000
- 肖东琼李雅斐杨欣屈艺李熙鸿
- 关键词：脓毒症神经元
- 免疫相关GTP酶M1在脓毒症诱导脑损伤小鼠皮质神经元细胞自噬中的作用
- 黄群陈斌李雅斐潘玲丽高沪李熙鸿
- 脓毒症相关性脑病大鼠海马区神经细胞自噬被引量：6
- 2016年
- 目的:探讨脓毒症相关性脑病(sepsis-associated encephalopathy,SAE)大鼠海马区神经细胞自噬现象及微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达。方法:盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP)建立脓毒症大鼠模型。60只30日龄健康雄性Wistar大鼠被随机分为假手术组(10只)和CLP组(50只)。CLP后12 h监测大鼠脑电图(electroencephalogram,EEG)及体感诱发电位(somatosensory evoked potential,SEP),并进行神经生物学评分。根据大鼠是否发生SAE将CLP组大鼠再分为SAE(+)组和SAE(–)组。HE染色观察大鼠海马区病理学改变;电子显微镜观察大鼠海马区神经细胞自噬的超微结构;Western印迹检测LC3-I和LC3-II蛋白的表达。结果:50只大鼠在CLP后12 h内死亡5只,存活45只大鼠中有16只出现神经行为学、EEG及SEP改变,诊断为SAE,其发病率为35.56%(16/45)。与假手术组和SAE(–)组比较,SAE(+)组大鼠在CLP后12 h时α波的频率明显减少,δ波增加,P1振幅下降,P1波和N1波潜伏期延长(P<0.05)。CLP后12 h时SAE(+)组大鼠海马区细胞明显水肿,锥体细胞明显减少,甚至溶解,细胞排列紊乱,而假手术组和SAE(–)组大鼠海马区细胞形态正常、层次清楚。透射电子显微镜观察表明:SAE(+)组大鼠海马区细胞结构紊乱,可见自噬泡、颗粒状基质和方形或长方形晶体,自噬泡内含有溶酶体等细胞器,假手术组和SAE(–)组大鼠海马区组织细胞无自噬泡形成。SAE(+)组大鼠在CLP后12 h,海马区神经细胞LC3-II/LC3-I值明显高于假手术组和SAE(–)组(P<0.05)。结论:SAE大鼠海马区神经细胞存在细胞自噬现象,LC3-II/LC3-I值明显升高。
- 李雅斐苏云洁屈艺母得志李熙鸿
- 关键词：海马自噬
- 免疫相关GTP酶M1在脓毒症诱导脑损伤小鼠皮质神经元细胞自噬中的作用被引量：5
- 2017年
- 目的:探讨免疫相关GTP酶M1(immune-related GTPase M1,IRGM1)在脓毒症诱导脑损伤(sepsis-induced brain injury,SIBI)小鼠皮质神经元细胞自噬中的作用。方法:将野生型和IRGM1基因敲除小鼠各60只分为野生型假手术(sham-operated wild-type,SWT)组、野生型模型(model wild-type,MWT)组、基因敲除假手术(sham-operated knockout,SKO)组和基因敲除模型(model knockout,MKO)组。模型组行小鼠盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP),CLP后6 h行神经行为学评分,如神经生物学低于6分,诊断为SIBI;假手术组只打开腹腔,未行CLP。采用HE染色观察小鼠大脑皮质区病理学改变;电子显微镜下观察小鼠皮质神经元细胞自噬的超微结构;实时定量PCR检测IRGM1和INF-γm RNA在小鼠大脑皮质组织中的表达;Western印迹检测小鼠大脑皮质组织微管相关蛋白1轻链3(LC3)-II,LC3-I,SQSTM1,IRGM1的蛋白相对表达量;免疫荧光法观察IRGM1在小鼠大脑皮质神经元中的表达。结果:电子显微镜显示,与SWT组比较,MWT组在CLP后12或24 h小鼠皮质神经元内质网扩张、线粒体肿胀、自噬体数量增加。Western印迹结果显示,CLP后6 h小鼠大脑皮质组织LC3-II表达开始增加,高表达维持至CLP后96 h,相反,SQSTM1在CLP后6 h开始下降。与SWT组比较,MWT组在CLP后12 h小鼠大脑皮质组织中IRGM1的m RNA和蛋白表达水平明显上调,同时,IFN-γ的m RNA表达也明显增加(P<0.05)。双色免疫荧光检测结果显示,CLP后24 h,与SWT组比较,MWT组小鼠皮质神经元中IRGM1表达明显上调。SWT组和SKO组小鼠大脑皮质细胞中自噬活性的基线水平相当低,几乎无LC3-II的表达,而SQSTM1表达均很高。但是,CLP后12 h,MWT组LC3-II表达明显升高,SQSTM1表达下调(P<0.05),而IRGM1基因敲除的MKO组小鼠大脑皮质组织中几乎无LC3-II,SQSTM1的表达明显上调。CLP后6 h,MWT组SIBI发生率90%(27/30),MKO组发生率96.67%(29/30)。CLP后12 h,MKO组小鼠神经生物学评分明显低于MWT组(4
- 黄群陈斌陈斌李雅斐
- 关键词：小鼠
- 氯化锂对脓毒症大鼠大脑皮质Caspase-3蛋白表达的影响
- 2016年
- 目的观察氯化锂(LiCl)对脓毒症大鼠大脑皮质半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达的影响,探讨其对脓毒症脑损伤的保护作用机制。方法 2015年2—6月于四川大学华西第二医院进行实验,将Wistar大鼠60只按随机数字表法分为假手术组(S组,n=20)、模型组(CLP组,n=20)、氯化锂干预组(CLP+LiCl组,n=20),采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症模型。CLP+LiCl组于CLP手术后立即给予腹腔注射LiCl溶液(50mg/kg),S组和CLP组给予等量生理盐水腹腔注射。CLP术后8 h、16 h、24 h每组取5只大鼠进行神经功能行为学评分的比较,而后采用断头法将大鼠处死取出脑组织皮质部分,采用Western blot法检测大鼠大脑皮质Caspase-3蛋白的表达;每组再于术后24 h各取5只大鼠断头取脑行免疫荧光法检测Caspase-3蛋白的表达。结果与S组比较,CLP组及CLP+LiCl组术后8、16、24 h大鼠神经功能行为学评分均有降低(F_(8h)=6.07,P=0.015;F_(16h)=14.10,P=0.001;F_(24h)=25.54,P=0.000),免疫荧光法检测大脑皮质Caspase-3蛋白的表达均增加,3组比较差异有统计学意义(分别为0.019 5±0.001 2、0.027 2±0.001 0、0.023 8±0.001 6,F=44.67,P<0.05);Western Blot法检测Caspase-3蛋白表达情况,3组差异有统计学意义(F¨=12.81,P=0.001;F_(16h)=33.01,P=0.000;F_(24h)=107.28,P=0.000);与CLP组同时间点比较,CLP+LiCl组神经功能行为学评分升高(除8 h外),而大脑皮质Caspase-3蛋白的表达下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论氯化锂可能通过抑制大脑皮质神经元Caspase-3蛋白的表达而起到提高脓毒症大鼠神经行为学评分的作用。
- 杨欣李熙鸿鲁利群黄莉李雅斐
- 关键词：氯化锂脓毒症脑损伤半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3
- 脓毒症脑损伤对新生大鼠脑组织HMGB1表达的影响
- 目的 探讨脓毒症脑损伤对新生大鼠脑组织HMGB1表达的影响.方法 选用100只10日龄雄性Wister大鼠,随机分为对照组(sham)和脓毒症组(LPS).sham组腹腔内注射生理盐水,LPS组则腹腔内注射脂多糖(LPS...
- 李雅斐陈斌胡娟许敏王海萍翼文瑶李熙鸿
- 关键词：脓毒症脑损伤新生大鼠HMGB1
- 组蛋白乙酰化调控对新生大鼠大脑皮层损伤的保护作用被引量：2
- 2017年
- 目的研究组蛋白乙酰化调控对新生大鼠缺氧缺血大脑皮层损伤的保护作用。方法将90只3日龄新生大鼠分为假手术组、缺氧缺血模型组以及组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠组。模型组及丁酸钠组大鼠腹腔注射LPS(0.05 mg/kg)2 h后行右侧颈总动脉结扎并置于低氧舱中(6.5%氧浓度)90 min;假手术组腹腔注射生理盐水后仅分离暴露右侧颈总动脉,但不予结扎和低氧处理;丁酸钠组在建模后立即腹腔注射丁酸钠(300 mg/kg),每天1次,共治疗7 d,假手术组及模型组注射等体积生理盐水。模型建立后第7天,采用Western blot方法检测各组大脑皮层组蛋白H3(HH3),乙酰化组蛋白H3(AH3),B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化型半胱天冬酶-3(CC3),以及脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达;采用免疫荧光法检测皮层细胞增殖指标Brd U表达。结果丁酸钠组HH3/AH3比值显著低于模型组(P<0.05),提示丁酸钠组HH3乙酰化程度增加;丁酸钠组凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax比值较模型组显著增高(P<0.05),CC3表达显著减少(P<0.05),BDNF表达显著增加(P<0.05);丁酸钠组较模型组皮层Brd U阳性细胞数显著增加(P<0.05),主要表达在神经元。结论组蛋白乙酰化水平增加可通过减少细胞凋亡及促进神经元再生保护新生大鼠大脑皮层损伤,其机制可能与BDNF表达增加相关。
- 黄骥翀李雅斐赵凤艳屈艺母得志
- 关键词：组蛋白去乙酰化酶脑源性神经营养因子新生大鼠
- HDAC抑制剂对新生大鼠脑皮层损伤的保护作用
- 黄骥翀李雅斐赵凤艳屈艺母得志
- 脓毒症脑损伤对新生大鼠大脑皮层组织HMGB1表达的影响
- 李雅斐陈斌黄骥翀朱婷婷屈艺母得志李熙鸿
