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HEPS对MDRV感染雏番鸭肠道修复作用与MAdCAM-1关系的初探: 目的:研究猴头菇多糖(HEPS)对番鸭呼肠孤病毒(MDRV)感染雏番鸭肠道修复作用与黏膜地址素细胞黏附分子1(MAd CAM-1)分泌量的关系。方法:将200只1日龄番鸭随机分为空白对照组(BCG)、猴头菇多糖对照组(H...; 孙雪宁陈景杰黄诗杭黄丽娜姜慧慧李宇辰吴异健黄一帆; 关键词：番鸭呼肠孤病毒; 文献传递

猴头菇多糖对MDRV感染RAW264.7细胞TLR3/TRIF诱导表达及病毒复制的影响被引量：3: 2021年; 试验旨在探究猴头菇多糖(HEP)预处理RAW264.7细胞对番鸭呼肠孤病毒(MDRV)复制的影响及其机制,从Toll样受体3/β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TLR3/TRIF)信号通路解析HEP在调节MDRV所致的雏番鸭机体免疫抑制中的作用机制并提供体外试验参考。试验设空白对照组(BCG)、病毒感染对照组(VCG)、HEP对照组(HCG)和HEP预防病毒感染组(HPG),RAW264.7细胞在MDRV感染12和24 h后,通过Western blotting检测各组细胞中TLR3、TRIF和肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)的蛋白表达量;病毒感染24 h后,用ELISA法检测各组细胞培养液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-10(IL-10)、IL-6、IL-1β、干扰素-β(IFN-β)的含量。TCID50检测结果表明,MDRV病毒的TCID50为103.46。病毒感染后12 h,细胞未出现明显变化;病毒感染后24 h,细胞变圆;病毒感染后36 h,细胞大量死亡。MDRV在RAW264.7细胞中的复制结果显示,在感染病毒12~24 h内,σNS的表达量呈现上升趋势;在24~36 h,σNS的表达量维持在较高水平。Western blotting结果显示,与空白对照组相比,VCG组细胞TLR3、TRIF和TRAF6蛋白的表达量在感染后12和24 h均显著升高(P<0.05),HCG组TRIF蛋白的表达量均显著升高(P<0.05);与感染组相比,HPG组的σNS、TLR3、TRIF和TRAF6蛋白表达量在病毒感染12和24 h均显著降低(P<0.05)。ELISA检测结果显示,与空白对照组相比,VCG组细胞培养液中TNF-α、IL-6、IL-1β和IFN-β的含量均显著升高(P<0.05);与感染组相比,HPG组细胞培养液中TNF-α、IL-6、IL-1β含量均显著降低(P<0.05),IFN-β的含量显著升高(P<0.05)。结果表明,HEP可调节MDRV感染诱导RAW264.7细胞TLR3信号转导通路活化,抑制TLR3信号转导通路下游产物TNF-α、IL-10、IL-6和IL-1β的过度表达,同时上调IFN-β的表达,从而抑制MDRV在RAW264.7细胞中的复制。; 严萍林绍青李明慧孙雪宁李健黄一帆黄一帆; 关键词：番鸭呼肠孤病毒 TOLL样受体3 病毒复制

猴头菇多糖对MDRV感染雏番鸭肠道修复作用与MAdCAM-1分泌量关系的研究被引量：8: 2016年; 为研究猴头菇多糖(HEPS)对番鸭呼肠孤病毒(MDRV)感染雏番鸭肠道修复作用与黏膜地址素细胞黏附分子1(MAd CAM-1)分泌量的关系,将200只1日龄番鸭随机分为空白对照组(BCG)、猴头菇多糖对照组(HCG)、同居感染对照组(CICG)和猴头菇多糖预防组(HPG),其中后两组按建立MDRV自然感染发病模型进行同居感染;各组番鸭分别于同居感染3、6、10、15和21 d后取血液和十二指肠样品进行放射性免疫检测MAd CAM-1含量,并观察其肠道形态和淋巴细胞分布及数量变化。结果显示,HCG组番鸭肠道MAd CAM-1分泌量极显著高于HPG(P<0.01),且显著高于CICG(P<0.05),HEPS对MDRV感染番鸭血清中MAd CAM-1含量的调节作用不显著;HPG组与CICG组相比,肠道形态结构较完整,淋巴细胞的分布有向黏膜上皮移动的趋向,且分布在细胞顶端的数量增多。研究表明:HEPS可能通过调节MDRV感染番鸭肠道MAd CAM-1的分泌量,参与淋巴细胞归巢过程,起到修复和保护肠道黏膜,提高雏番鸭的黏膜免疫力的作用。; 孙雪宁陈景杰黄诗杭黄丽娜姜慧慧李宇辰吴异健黄一帆; 关键词：番鸭呼肠孤病毒黏膜免疫 MADCAM-1

HEPS对MDRV感染雏番鸭肠道修复作用与MAdCAM-1关系的初探: 目的:研究猴头菇多糖(HEPS)对番鸭呼肠孤病毒(MDRV)感染雏番鸭肠道修复作用与黏膜地址素细胞黏附分子1(MAdCAM-1)分泌量的关系. 方法:将200只1日龄番鸭随机分为空白对照组(BCG)、猴头菇多糖...; 孙雪宁陈景杰黄诗杭黄丽娜姜慧慧李宇辰吴异健黄一帆; 关键词：番鸭呼肠孤病毒

猴头菇多糖对MDRV感染RAW264.7细胞后病毒复制及TLR3诱导表达的影响被引量：2: 2019年; 本试验旨在探索猴头菇多糖(HEP)对番鸭呼肠孤病毒(MDRV)感染RAW264.7细胞中病毒复制及TLR3诱导表达的影响,为进一步解析HEP在调节MDRV所致的番鸭机体免疫抑制中的作用机制提供数据参考。本试验首先通过测定HEP在小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7细胞)上的安全浓度的基础上确定HEP的添加浓度;然后通过RT-qPCR方法和Western-blot方法分别检测各组细胞中TLR3 m RNA的转录水平和TLR3、病毒σNS的蛋白表达量,从基因和蛋白的分子层面分析HEP对MDRV感染RAW264.7细胞的免疫调节作用。结果显示:HEP在46.88~187.5μg/m L浓度范围内是可以促进RAW264.7细胞生长,浓度为93.75μg/m L时细胞相对增殖率最高,VCG细胞TLR3 m RNA的相对表达量和蛋白表达量均极显著(P<0.01)高于BCG组,HPG与HTG细胞TLR3 m RNA的相对表达量和蛋白表达量均极显著(P<0.01)低于VCG组。结论:HEP可从基因与蛋白水平抑制MDRV感染早期过度活化的TLR3的表达,从而起到抗病毒作用。; 林绍青骆钰李明慧孙雪宁吴宝成黄一帆黄一帆; 关键词：番鸭呼肠孤病毒 RAW264.7细胞

猴头菇多糖对MDRV感染RAW264.7细胞TLR3-TRIF-TRAF6信号转导通路的影响: 番鸭呼肠孤病毒感染是番鸭呼肠孤病毒(MDRV)引起的一种免疫抑制性传染病,给番鸭养殖业造成严重的经济损失。猴头菇多糖(HEP)是从猴头菇中提取的最重要的活性多糖,可以缓解MDRV对番鸭机体的免疫抑制,但其具体作用机制目前...; 孙雪宁; 关键词：番鸭呼肠孤病毒 TOLL样受体3 蛋白免疫印迹; 文献传递

番鸭呼肠孤病毒σA蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：6: 2016年; 为实现番鸭呼肠孤病毒（MDRV）σA蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备,采用RT-PCR扩增了MDRV-YB株σA基因的完整编码序列（CDS）,双酶切并连接至表达载体p ET-32a（＋）中,将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）,IPTG诱导蛋白表达,并对表达产物进行SDS-PAGE分析;随后对重组σA蛋白进行Ni2＋柱亲和层析纯化,用Western-blot鉴定纯化后重组蛋白的活性;最后以纯化后的包涵体蛋白为抗原免疫新西兰兔,制备多克隆抗体,并用ELISA法检测其效价,Western-blot鉴定其特异性。SDS-PAGE分析表明,成功表达出分子质量约为64.2 ku的融合蛋白,且主要以包涵体形式存在;其IPTG诱导最佳时间、浓度和温度分别为6 h、1.2 mmol/L和24~27℃;经Ni2＋柱纯化获得了高纯度重组σA蛋白;Western-blot结果显示,纯化前、后的重组蛋白均可以与MDRV阳性血清发生特异性识别,说明纯化后的重组σA蛋白依然保留良好的反应原性;ELISA测得多抗血清的效价大于1∶32 000,Western-blot鉴定进一步证实制备的多克隆抗体可与重组σA蛋白发生特异性反应,为MDRVσA蛋白生物学功能研究奠定了基础。; 吕小婷廖加磊孙雪宁胡万荣朱二鹏吴异健吴宝成; 关键词：番鸭呼肠孤病毒原核表达多克隆抗体

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孙雪宁

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