陈晶
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 供职机构：重庆理工大学药学与生物工程学院更多>>
- 发文基金：重庆市科技攻关计划博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白的原核表达及单克隆抗体制备被引量：1
- 2013年
- 目的获得原核表达的PRRSV N蛋白,并制备N蛋白的单克隆抗体。方法将已构建的含有PRRSV N蛋白基因的重组表达载体阳性菌,在37℃条件下,用终浓度1 mmol/L的IPTG诱导表达4 h。经SDS-PAGE分析,表明N基因在大肠杆菌中得到了高效表达。经镍柱亲和层析纯化,以此蛋白作为抗原采用长程免疫法免疫Balb/c小鼠,取4次免疫后的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞用PEG-1500进行细胞融合。结果获得了纯度较高、免疫学活性较好的N蛋白,细胞融合率为81.3%。建立间接ELISA,用于检测杂交瘤细胞上清中的单克隆抗体。初检阳性率为17.3%,经2次亚克隆反复筛选获得了2株分泌抗PRRSV单抗的杂交瘤细胞株,命名为4G10和2F9。ELISA证实所获得的单抗是特异性针对PRRSV共同的抗原表位,4G10和2F9经反复冻存、复苏及多次传代,仍能分泌高效价抗体。结论成功制备出高效价的抗PRRSV N蛋白的单克隆抗体,为建立一种快速、特异的PRRSV检测方法奠定了基础。
- 吴胜昔邵烈刚曾政陈晶刘人菊袁丽萍熊仲良蔡家利
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白单克隆抗体
