冯世明
- 作品数：4 被引量：8H指数：1
- 供职机构：河南大学更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 沉默TNFAIP8基因的方法及其在肿瘤治疗中的应用
- 本申请属于生物制药技术领域，具体涉及一种沉默<i>TNFAIP8</i>基因的方法及其在肿瘤治疗中提高顺铂(CDDP)治疗效果的应用。沉默TNFAIP8基因的方法具体包括：设计siRNA靶序列、设...
- 柴立辉马远方吴素霞张赛男杨菲李伟华冯世明顿国庆刘广超
- 沉默TNFAIP8基因对宫颈癌HeLa细胞生物学特性的影响被引量：8
- 2015年
- 目的 :通过沉默肿瘤坏死因子α诱导的蛋白8(tumor necrosis factor alpha induced protein 8,TNFAIP8,TIPE)的表达,研究其对宫颈癌He La细胞生物学特性的影响,并探讨TNFAIP8在He La细胞增殖、迁移及凋亡中可能的作用机制。方法 :构建特异性针对TNFAIP8基因的慢病毒载体,感染He La细胞后沉默TNFAIP8基因的表达,分别采用实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测TNFAIP8 m RNA及蛋白在He La细胞中的表达情况。划痕实验及平板克隆形成实验检测沉默TNFAIP8基因表达对He La细胞的迁移和增殖能力的影响。MTT法及锥虫蓝染色计数法检测血清饥饿处理后He La细胞的存活能力,FCM法检测血清饥饿状态下He La细胞的凋亡情况。结果 :实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测结果表明,TNFAIP8-shR NA转入HeL a细胞后,TNFAIP8 mR NA(P<0.05)及蛋白的表达水平均被明显下调。划痕实验和克隆形成实验结果显示,沉默TNFAIP8基因在HeL a细胞中的表达,明显抑制了HeL a细胞的迁移和增殖能力(P值均<0.05)。血清饥饿处理后的HeL a细胞中,TNFAIP8沉默组细胞的存活能力显著降低,而凋亡率显著增加(P值均<0.05)。结论 :TNFAIP8作为一种致癌基因能促进人宫颈癌He La细胞的迁移和增殖,并抑制He La细胞的凋亡。
- 吴素霞张赛男李伟华杨菲冯世明柴立辉
- 关键词：宫颈肿瘤
- 沉默TNFAIP8抑制小鼠巨噬细胞RAW264.7的迁移功能
- 2016年
- 目的：构建肿瘤坏死因子α诱导蛋白8（tumor necrosis factor alpha-induced protein 8, TNFAIP8）shRNA慢病毒表达载体,通过沉默TNFAIP8基因在小鼠巨噬细胞RAW264.7中的表达,探讨TNFAIP8基因沉默对巨噬细胞功能的影响。方法设计合成TNFAIP8的特异性shRNA序列,退火后连入pLKO.1-TRC载体构建TNFAIP8 shRNA慢病毒表达载体,双酶切和基因测序鉴定构建载体序列的正确性；转染293T细胞制备慢病毒颗粒,将慢病毒颗粒感染RAW264.7细胞,沉默TNFAIP8基因在该细胞中表达,荧光定量RT-PCR和Western blot检测TNFAIP8的基因及蛋白表达水平验证基因沉默效果。培养基因沉默的RAW264.7细胞和对照组细胞,平皿黏附试验及划痕愈合试验观察TNFAIP8沉默对 RAW264.7细胞黏附及迁移能力的影响。结果双酶切电泳结果表明,构建的shRNA慢病毒载体酶切片段相对分子质量大小正确,基因测序结果也表明插入序列正确。荧光定量RT-PCR和Western blot结果表明,基因沉默组细胞中TNFAIP8的基因及蛋白表达水平较对照组细胞均显著降低（P〈0.05）。平皿黏附试验结果发现,在接种15 min、30 min和2 h后,沉默组细胞黏附到培养皿底面上的细胞数量显著少于对照组细胞（P〈0.05）。培养12 h后,和对照组细胞相比,沉默TNFAIP8的RAW264.7细胞伪足数量较少,且突起不明显。划痕愈合试验结果表明,划痕24 h后,对照组细胞划痕面积明显缩小,划痕愈合率达到50%左右,而沉默组细胞划痕愈合率只有25%左右,显著低于对照组细胞（P〈0.05）。结论成功构建了 TNFAIP8 shRNA 慢病毒表达载体,该载体对TNFAIP8基因的表达具有良好的沉默效果；沉默TNFAIP8在小鼠巨噬细胞RAW264.7中的表达可以显著抑制巨噬细胞的黏附和迁移能力。
- 杨菲吴素霞冯世明刘广超柴立辉
- 关键词：巨噬细胞迁移
- 沉默TNFAIP8基因的方法及其在肿瘤治疗中的应用
- 本申请属于生物制药技术领域，具体涉及一种沉默<I>TNFAIP8</I>基因的方法及其在肿瘤治疗中提高顺铂(CDDP)治疗效果的应用。沉默TNFAIP8基因的方法具体包括：设计siRNA靶序列、设计并合成shRNA基因序...
- 柴立辉马远方吴素霞张赛男杨菲李伟华冯世明顿国庆刘广超
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