李豫皖
- 作品数：25 被引量：93H指数：6
- 供职机构：遵义医学院附属医院更多>>
- 发文基金：贵州省科学技术基金武汉市卫生局科研项目湖南省教育厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学农业科学更多>>
- 人脱细胞羊膜在构建组织工程支架中的应用及研究方向被引量：1
- 2017年
- 背景:人脱细胞羊膜是一种良好的具有生物相容性及生物活性的细胞外基质材料,因其免疫原性低、排异反应小、取材容易等优点,被广泛用于临床研究。目的:综述人脱细胞羊膜在皮肤、血管、角膜、软骨及骨等组织工程中的应用。方法:由第一作者检索中国知网(2005年1月至2017年5月)、中国生物医学文献数据库(2005年1月至2017年5月)、PubMed数据库(1990年1月至2017年5月)及Elsevier数据库(1990年1月至2017年5月),有关人脱细胞羊膜在骨、软骨、皮肤、血管等组织工程中应用的文章,中文关键词为"脱细胞羊膜,支架,组织工程,细胞外基质",英文关键词为"acelluar amniotic membrane,scaffold,material,tissue engineering,ECM"。结果与结论:人脱细胞羊膜具有天然的细胞外基质结构及功能,与不同来源干细胞复合后经诱导可向不同的组织和器官分化,例如骨、软骨、皮肤、血管及角膜组织等。人脱细胞羊膜作为组织工程支架具有良好的生物相容性、可降解性及低免疫原性等优点,但其也存在一些不足,包括强度欠佳、植入后可能存在排异反应等。缩短细胞与人脱细胞羊膜支架的黏附时间,增加人脱细胞羊膜的自身机械强度,优化细胞生长微环境,将人脱细胞羊膜与其他组织工程支架相互结合,是今后研究的主要方向。
- 杨继滨熊华章李豫皖刘毅
- 关键词：干细胞脱细胞羊膜细胞外基质生物相容性免疫
- TGF-β_1联合VEGF对人羊膜间充质干细胞向韧带成纤维细胞体外分化作用的研究被引量：5
- 2017年
- 目的探讨人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,h AMSCs)是否具有MSCs特性,以及经TGF-β_1和VEGF联合诱导后是否具有向韧带成纤维细胞分化的能力。方法取自愿捐赠的足月产妇胎盘,采用胰蛋白酶胶原酶联合消化法分离培养h AMSCs,流式细胞术检测h AMSCs表型分子,免疫荧光染色检测h AMSCs其角蛋白-19(cytokeratin-19,CK-19)和波形蛋白表达情况。取第3代h AMSCs,分别使用含TGF-β_1和VEGF的L-DMEM/F12成韧带或纤维细胞诱导培养基(实验组)和普通L-DMEM/F12培养基(对照组)培养,细胞增殖-毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测两组细胞增殖能力;培养5、10、15 d分别采用免疫荧光染色及实时荧光定量PCR检测韧带及血管生成相关特异性蛋白和基因表达。结果倒置相差显微镜观察示h AMSCs呈单层贴壁生长;流式细胞术结果示h AMSCs表达MSCs表型分子;免疫荧光染色示h AMSCs高表达波形蛋白、低表达CK-19;h AMSCs具有向成骨、成软骨及成脂细胞分化的能力。CCK-8法检测示,7 d时两组细胞均达增殖高峰,实验组细胞增殖能力于7 d后显著高于对照组(P<0.05)。免疫荧光染色示,培养5、10、15 d时实验组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白(Fibronectin)、细胞连接素(Tenascin-C)表达染色均较对照组增强。实时荧光定量PCR结果示,随时间延长实验组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Fibronectin、α-肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、VEGF m RNA相对表达量均逐渐上调(P<0.05)。除培养5 d两组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、VEGF m RNA相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)外,其余各时间点实验组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Fibronectin、α-SMA和VEGF m RNA相对表达量均显著高于对照组(P<0.05)。结论 h AMSCs具有MSCs特征,且体外增殖能力良好,可作为组织工程种子细胞来源;体外诱导后韧带成纤维细胞及血管生成相关特异性基因表达上调,韧带成纤维细�
- 邹刚李豫皖金瑛朱喜忠杨继滨王胜民尤奇熊华章刘毅
- 关键词：人羊膜间充质干细胞VEGF组织工程韧带
- Scleraxis慢病毒基因感染人羊膜间充质干细胞向肌腱细胞的定向分化被引量：6
- 2017年
- 背景:Scleraxis作为肌腱细胞特异性表达分子,不仅参与肌腱祖细胞的聚集及分化,还影响肌腱细胞外基质的形成。人羊膜间充质干细胞具有多向分化潜能,在体外不同诱导条件下可分化为骨、软骨及其他结缔组织。目的:探讨Scleraxis慢病毒基因感染人羊膜间充质干细胞能否向肌腱细胞定向分化并观察其分化效果。方法:取足月产胎盘羊膜组织,两步酶消化法分离人羊膜间充质干细胞并采用倒置相差显微镜观察和流式细胞鉴定。取第3代细胞分3组进行培养,单纯人羊膜间充质干细胞培养组为空白组,人羊膜间充质干细胞经Slclerxis基因慢病毒感染后为过表达组,人羊膜间充质干细胞经不携带Scleraxis基因慢病毒感染后为空质粒组。细胞培养7 d内CCK-8法检测各组细胞增殖能力细胞。细胞培养后3 d和7 d,分别进行实时荧光定量PCR和Western Blot检测评价各组细胞向肌腱细胞定向分化的效果。结果与结论:(1)CCK-8检测显示:培养7 d内,过表达组、空质粒组与空白组细胞在增殖能力上无明显差异(P>0.05);(2)Westen blot检测显示:过表达组Scleraxis蛋白表达水平明显高于空质粒组和空白组(P<0.05);(3)实时荧光定量PCR显示:3 d时,过表达组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、纤连蛋白及肌腱蛋白C m RNA表达水平明显高于空质粒组(P<0.05),而腱调蛋白的表达与空质粒组无明显差异(P>0.05);7 d时,Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、纤连蛋白、肌腱蛋白C及腱调蛋白的表达水平明显高于空质粒组(P<0.05);(4)结果提示:人羊膜间充质干细胞经Scleraxis慢病毒基因感染后可向肌腱细胞定向分化。
- 朱喜忠刘子铭吴术红熊华章杨继滨李豫皖尤奇金瑛左晨刘毅
- 关键词：干细胞分化人羊膜间充质干细胞SCLERAXIS慢病毒感染肌腱细胞定向分化慢病毒转染
- 《病原生物学与免疫学》课程实验教学改革实践被引量：3
- 2013年
- 《病原生物学与免疫学》实验课是基础医学实验教学的重要组成部分,从构建实验教学新体系、改革实验教学方法、完善实验考核评定手段及实验室开放管理运行机制等方面探讨了如何进行切实可行、效果显著的教学改革的实践活动。
- 高劲松龚灿李豫皖符清明吴海军李万峰张东亮
- 关键词：实验教学改革
- 人羊膜间充质干细胞与人脱细胞羊膜支架的生物相容性被引量：6
- 2018年
- 背景:前交叉韧带损伤越来越多见,传统治疗方式主要是前交叉韧带重建,随着组织工程研究在临床广泛运用,韧带组织工程治疗前交叉韧带损伤已成为目前研究的热点。目的:探讨人羊膜间充质干细胞和人脱细胞羊膜支架的体外生物相容性。方法:采用酶消化法获得人羊膜间充质干细胞并对其进行鉴定。采用酶消化法和化学去污法对新鲜人羊膜进行脱细胞处理,以苏木精-伊红染色以及免疫荧光染色检测细胞成分移除情况以及细胞外基质破坏情况。取第3代人羊膜间充质干细胞,分别使用人脱细胞羊膜浸提液(实验组)与普通L-DMEM/F12培养基(对照组)培养,CCK-8法检测两组细胞增殖能力。人羊膜间充质干细胞与人脱细胞羊膜共培养14 d后,扫描电镜与倒置显微镜观察人脱细胞羊膜上的细胞黏附及生长情况。结果与结论:①倒置相差显微镜观察显示人羊膜间充质干细胞呈漩涡状、贴壁生长,高表达波形蛋白,低表达CK-19,具有成骨、成脂、成软骨诱导分化能力;②苏木精-伊红染色显示人脱细胞羊膜上皮细胞及间充质干细胞已完全移除,细胞外基质成分无明显破坏;免疫荧光染色显示Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原均呈阳性表达;③人脱细胞羊膜浸提液对人羊膜间充质干细胞无细胞毒性,不影响其增殖活性;④倒置相差显微镜及扫描电镜均显示人脱细胞羊膜可以促进人羊膜间充质干细胞增殖及黏附,二者具有良好的生物相容性。
- 杨继滨朱喜忠熊华章李豫皖金瑛刘毅
- 关键词：人羊膜间充质干细胞干细胞生物相容性韧带损伤前交叉韧带
- 体外诱导人羊膜间充质干细胞向韧带细胞分化的实验研究被引量：20
- 2016年
- 目的探讨人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,h AMSCs)是否具有MSCs的特性及经诱导后在体外能否向韧带细胞分化。方法取产妇胎盘通过酶消化法获得h AMSCs,流式细胞术鉴定h AMSCs表型特征。取第3代h AMSCs分别加入含不同诱导液的L-DMEM/F12培养基:A组TGF-β1+b FGF,B组透明质酸(hyaluronic acid,HA),C组TGF-β1+b FGF+HA,D组为空白对照组。倒置相差显微镜观察诱导后21 d各组细胞形态学变化;磺酰罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)比色法检测各组细胞生长活性;诱导后7、14、21 d分别采用免疫组织化学染色及实时荧光定量PCR检测韧带特异性蛋白和基因Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、肌腱蛋白C(tenascin C,TNC)表达。结果流式细胞术鉴定结果表明h AMSCs表达MSCs表型。倒置相差显微镜观察示诱导21 d A、B、C组细胞均呈长梭形纤维细胞样生长,C组细胞形态更单一、有明显方向性且较A组排列更紧凑。SRB比色法检测示各组细胞于培养6 d左右达增殖高峰,6 d时A、B、C组细胞活性均显著高于D组。免疫组织化学结果示:诱导培养7 d,各组均未检测到TNC表达;7、14、21 d A、B、C组Ⅰ型胶原表达均显著高于D组,14、21 d A、B、C组Ⅲ型胶原表达显著高于D组,差异均有统计学意义(P<0.001)。B组Ⅰ型胶原表达以及A、C组Ⅲ型胶原、TNC表达随时间增加均呈逐渐增高趋势,各时间点间比较差异均有统计学意义(P<0.001)。实时荧光定量PCR结果示:诱导培养21 d,C组Ⅰ型胶原、TNC m RNA相对表达量显著高于A、B组,B组Ⅲ型胶原m RNA相对表达量显著高于A、C组,差异均有统计学意义(P<0.05)。A、C组Ⅰ型胶原、TNC以及C组Ⅲ型胶原m RNA相对表达量随时间增加呈逐渐上调趋势,各时间点间比较差异均有统计学意义(P<0.001)。结论 h AMSCs具有MSCs的特性,有良好增殖能力,经体外诱导后韧带特异性基因表达上调,韧带特异性蛋白合成增加,可作为韧带组织
- 金瑛李豫皖张承昊吴术红陈代雄刘毅
- 关键词：人羊膜间充质干细胞TGF-Β1BFGF
- 组织工程支架材料:特征及在组织工程中的应用被引量：7
- 2018年
- 背景:支架材料是组织工程中的关键因素,通过支架使种子细胞在上面黏附并通过一定的手段诱导种子细胞增殖分化成特定的细胞,从而促进组织的损伤修复。目的:对近几年不同支架材料包括天然材料、生物可降解材料和复合材料的优势和劣势及在组织工程中的应用进行综述,重点介绍石墨烯复合支架在组织工程中的应用。方法:以"组织工程,韧带,支架材料,天然材料,生物可降解材料,复合材料,研究进展,Tissue engineering;Ligament,Scaffold material,Biodegradable material,Composite materials,Progress in research"为关键词,检索CNKI、Pub Med、Elsevier ScienceD irect、Engineering Village、Web of Science等数据库1990至2018年发表的文献,将所有文章进行初筛后,对保留的文献进一步的归纳和总结。结果与结论:目前组织工程中常用的支架材料有天然材料、生物可降解材料和复合材料,这些材料目前在骨、软骨、韧带、皮肤等组织工程方面有了广泛应用。大多数天然材料无毒,生物相容性、细胞亲和性较好,可被完全吸收,但缺点是机械强度较差。生物可降解材料具有良好的可降解性、组织相容性、生物相容性、无细胞毒性等优点,缺点是疏水性强、细胞黏附能力差。石墨烯具有良好的稳定性、导电性、导热性、机械强度,但单纯石墨烯质地较薄,很难塑形,且其生物相容性和水溶性较差。复合材料结合了单一材料的特点,并且将各自的特点整合,使其功能更加全面,因而复合支架材料成为当前组织工程研究的重点。
- 葛振邹刚邹刚刘毅刘毅张骏
- 关键词：石墨烯生物材料
- 骨形态发生蛋白9基因修饰人羊膜间充质干细胞体外向韧带成纤维细胞分化研究被引量：1
- 2018年
- 目的:探讨骨形态发生蛋白9(BMP9)基因修饰对人羊膜间充质干细胞(h AMSCs)在体外向韧带成纤维细胞(LFs)分化是否有促进作用,并研究其分子机制。方法:体外分离培养h AMSCs及LFs,观察并比较两种细胞形态学差异。经Ad MAX系统体外构建BMP9基因腺病毒载体,经提纯及荧光法病毒滴度测定后转染P3代h AMSCs。实验分为三组,A组:携带绿色荧光蛋白(GFP)的空腺病毒载体转染h AMSCs(h AMSCs-GFP);B组:携带BMP9基因的腺病毒载体转染h AMSCs(h AMSCs-BMP9);C组:韧带成纤维细胞组(LFs)。于体外分别培养7天后使用荧光定量PCR检测并比较各组韧带相关基因Scleraxis(Scx)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、细胞连接素(TNC)、纤维连接蛋白(Fib)及腱调蛋白(Tnmd)m RNA的表达量。使用免疫荧光检测并比较三组细胞体外培养7天后ColⅠ的表达量。结果:在倒置相差显微镜下,h AMSCs原代呈多角形贴壁生长,传代后呈长梭状漩涡状生长。LFs原代呈长梭状贴壁生长,传代后呈漩涡状集落样生长。A、B组细胞转染8 h、24 h后,生长增殖缓慢,轮廓清晰,细胞形态未发生变化。荧光显微镜观察显示A组在转染8 h后可见GFP荧光表达,24 h后表达荧光的数量和强度均增多。实时荧光定量PCR显示,转染7天时B组SCX、Tnmd、ColⅠ、Fib及TNC的表达量均高于A组(P<0.05),而SCX、Fib、TNC及Tnmd的表达量低于C组(P<0.05),ColⅠ的表达量高于C组(P<0.05)。荧光免疫组化显示,转染7天后,B组ColⅠ的表达量均高于A组和C组。结论:BMP9基因可促进h AMSCs向LFs定向分化,并促进韧带特异性基因的表达和细胞外基质的产生,为h AMSCs作为韧带组织工程种子细胞提供了实验基础。
- 朱喜忠刘子铭吴术红熊华章金瑛李豫皖杨继滨尤奇刘毅
- 关键词：人羊膜间充质干细胞细胞分化基因工程
- 湖北籍汉族强直性脊柱炎患者白细胞介素1受体拮抗剂基因的多态性
- 2012年
- 背景:白细胞介素1是强直性脊柱炎易感基因之一,其多态性与疾病易感性相关,不同人群的研究结果不尽相同。目的:分析中国湖北汉族人群中白细胞介素1受体拮抗剂基因多态性与强直性脊柱炎的相关性。方法:自140名强直性脊柱炎患者及130名健康对照者外周血中提取DNA,采用PCR方法检测白细胞介素1受体拮抗剂基因第二内含子VNTR复等位基因多态性。所有受试者均为3代或3代以上居住于湖北的汉族人。结果与结论:强直性脊柱炎患者中白细胞介素1受体拮抗剂基因*2等位基因频率显著高于健康对照者(P<0.05)。提示强直性脊柱炎与白细胞介素1受体拮抗剂基因*2等位基因相关联。
- 游浩程翠年张卉李佳森李豫皖胡孝洪扈凤平周世力高劲松
- 关键词：强直性脊柱炎基因多态性汉族
- 细胞膜片技术在软骨组织工程中的研究进展被引量：2
- 2018年
- 细胞膜片技术保留了大量自体细胞分泌的细胞外基质,为细胞的增殖和分化提供与体内极度相似的微环境,通过获取完整的膜片而用于修复软骨缺损。同传统的软骨缺损修复方法相比,细胞膜片技术展现了巨大的临床应用潜力,目前细胞膜片技术已经用于临床眼角膜和食道缺损的修复。近年来,对于脱细胞基质膜片和静电纺丝膜片的研究也日益增多,脱细胞基质膜片克服了传统的脱细胞组织块的缺点,有利于细胞的迁移增殖和分化,而且具有免疫耐受的特点。静电纺丝膜片具有纳米结构,类似于天然的软骨细胞外基质,机械特性好,易于操作,利于物质的交换。现阶段,应用膜片技术修复软骨缺损还主要处于实验研究中,临床应用的报道还很少,其中膜片技术还面临着一些不可忽视的问题需要解决。随着生物医学和材料学的发展,未来还需应用更多的创新技术成果不断改进膜片技术,以期早日用于临床软骨缺损的修复。
- 尤奇段小军杨柳金瑛金瑛李豫皖刘毅
- 关键词：软骨组织工程
