陶思佳
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 供职机构：江苏大学临床医学院更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金江苏省博士后科研资助计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 弓形虫表面抗原1、棒状体蛋白18真核表达载体的构建与体外表达被引量：1
- 2015年
- 目的:构建刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)表面抗原1(surface antigen 1,SAG1)及棒状体蛋白18(rhoptry protein 18,ROP18)的真核表达重组质粒,并在真核细胞中表达目的蛋白。方法:设计SAG1、ROP18的特异引物,采用RCR技术从弓形虫RH株基因组DNA中扩增编码SAG1、ROP18基因片段,经克隆至p TG19-T载体后,亚克隆至真核表达载体p3×FLAG-Myc-CMVTM-24,构建真核表达重组质粒p3×FLAG-Myc-CMVTM-24-SAG1和p3×FLAG-MycCMVTM-24-ROP18。将构建好的真核表达重组质粒转染人肾上皮细胞系293-T细胞,分析转染细胞的表达情况。结果:PCR扩增弓形虫SAG1和ROP18基因片段分别为1 011 bp和1 665 bp,与预期大小相符。重组质粒经PCR、酶切和测序鉴定结果均正确,通过RT-PCR和蛋白质印迹技术鉴定出重组质粒p3×FLAG-Myc-CMVTM-24-SAG1和p3×FLAG-Myc-CMVTM-24-ROP18在293-T细胞中表达。结论:成功构建了真核表达质粒p3×FLAG-Myc-CMVTM-24-SAG1和p3×FLAG-Myc-CMVTM-24-ROP18,该重组质粒能够在真核细胞中表达目的蛋白。
- 吴腊梅吴婷吴亮王晓苏丹华刘原陶思佳魏逸青姜旭淦陈盛霞曹建平
- 关键词：刚地弓形虫SAG1真核表达质粒
