郭俊峰 作品数:4 被引量:15 H指数:2 供职机构: 第三军医大学新桥医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
降钙素基因相关肽通过降低炎性小体活性抑制巨噬细胞功能 被引量:8 2017年 目的探讨降钙素基因相关肽(CGRP)抑制巨噬细胞炎性反应的机制。方法使用不同浓度CGRP处理LPS活化/未活化的小鼠巨噬细胞(RAW264.7),实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测巨噬细胞内促炎细胞因子白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和还原型辅酶Ⅱ氧化酶-活性氧簇-NOD样受体蛋白3(NLRP3)mRNA表达水平;酶联免疫吸附法(ELISA)定量检测细胞上清分泌型IL-1β和TNF-α蛋白表达量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞内NLRP3蛋白表达水平。结果 CGRP显著降低LPS活化/未活化RAW264.7细胞内炎性因子IL-1β、TNF-α、NLRP3 m RNA水平与蛋白水平,同时,NLRP3下游调节分子Caspase-1的蛋白水平被显著下调。在mRNA水平,NLRP3随CGRP剂量变化而变化的趋势与IL-1β、TNF-α非常相似。结论CGRP抑制巨噬细胞炎性激活,其机制可能与CGRP抑制NLRP3表达与活性有关。 刘元 郭俊峰 蔡俊 杨阳 李鑫 张慧宇 张纲关键词:降钙素基因相关肽 炎性因子 巨噬细胞 降钙素基因相关肽对血清饥饿作用下MC3T3-E1成骨细胞凋亡和自噬的影响 被引量:7 2017年 目的研究血清饥饿条件下降钙素基因相关肽(CGRP)对小鼠MC3T3-E1成骨细胞凋亡、自噬的影响以及二者之间的关系,以进一步明确CGRP对成骨细胞的保护机制。方法体外培养小鼠MC3T3-E1成骨细胞。采用流式细胞术和蛋白质印迹检测正常血清、无血清(血清饥饿)、3-MA预处理+血清饥饿培养的成骨细胞的凋亡和微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白的表达。采用蛋白质印迹检测正常血清、血清饥饿、血清饥饿+不同浓度(10^(-10)、10^(-9)、10^(-8)、10^(-7) mol·L^(-1))CGRP培养的成骨细胞的LC3和P62蛋白表达;采用蛋白质印迹检测正常血清、血清饥饿、血清饥饿+10^(-8) mol·L^(-1) CGRP培养不同时间(2、6、12、24、48、72 h)的成骨细胞的LC3蛋白表达,流式细胞数检测细胞凋亡,MDC染色检测细胞自噬泡。采用流式细胞术检测正常血清、血清饥饿、血清饥饿+10^(-8) mol·L^(-1) CGRP、3-MA预处理+血清饥饿、3-MA预处理+血清饥饿+10^(-8) mol·L^(-1) CGRP培养24 h的成骨细胞的凋亡。结果血清饥饿培养时成骨细胞的LC3Ⅱ蛋白表达及细胞凋亡较正常血清时增加,3-MA预处理+血清饥饿培养时成骨细胞的凋亡较血清饥饿时增加(P<0.01)。与正常血清相比,血清饥饿、血清饥饿+CGRP培养时LC3Ⅱ蛋白表达增加,P62蛋白表达降低,以血清饥饿+10^(-8) mol·L^(-1) CGRP培养24 h时LC3Ⅱ/Ⅰ比值最高;血清饥饿+10^(-8) mol·L^(-1) CGRP培养能抑制成骨细胞的凋亡,促进自噬泡的合成。3-MA预处理后MC3T3-E1成骨细胞凋亡增加,CGRP部分逆转3-MA预处理所增加的成骨细胞凋亡。结论 CGRP能够增强血清饥饿下MC3T3-E1成骨细胞的自噬活性,并可能通过促进自噬抑制成骨细胞的凋亡。 安洋 张慧宇 郭俊峰 李鑫 杨阳 张纲 谭颖徽关键词:降钙素基因相关肽 成骨细胞 自噬 凋亡 降钙素基因相关肽对MC3T3-E1成骨细胞氧化损伤的保护作用研究 2016年 目的探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对MC3T3-E1成骨细胞氧化损伤的保护作用及其潜在机制。方法 1)构建细胞氧化损伤模型,将实验分为4组,H_2O_2组使用含不同浓度(10-1、10-2、10-3、10-4、10-5 mol·L^(-1))H_2O_2的培养液,CGRP+H_2O_2组使用含不同浓度(10-6、10-7、10-8、10-9、10-10 mol·L^(-1))CGRP的培养液预处理后再加入含10-4 mol·L^(-1) H_2O_2的培养液,对照组为常规培养液,空白组不接种细胞。培养12、24、36、48 h后,CCK-8法检测细胞增殖活性,筛选最佳建模浓度和CGRP对成骨细胞氧化损伤的最佳保护浓度。2)采用含10-4 mol·L^(-1) H_2O_2(H_2O_2组)、10-8 mol·L^(-1) CGRP(CGRP组)的培养液和10-8 mol·L^(-1) CGRP+10-4 mol·L^(-1) H_2O_2培养液(CGRP+H_2O_2组)、常规培养液(对照组)培养成骨细胞,测定超氧化物歧化酶(SOD)的活性、活性氧(ROS)的含量以及炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6的水平。结果 1)在10-4 mol·L^(-1) H_2O_2时细胞增殖开始出现抑制(P<0.01),并呈浓度和时间依赖性;10-8 mol·L^(-1) CGRP预处理后细胞增殖活性最高,与只加入10-4 mol·L^(-1) H_2O_2有统计学差异(P<0.01)。2)与H_2O_2组相比,CGRP+H_2O_2组SOD活性升高(P<0.01),TNF-α、IL^(-1)β、IL-6水平降低(P<0.05),ROS含量降低(P<0.01)。结论 H_2O_2会对MC3T3-E1成骨细胞造成氧化损伤,CGRP对MC3T3-E1成骨细胞氧化损伤具有保护作用。 郭俊峰 张慧宇 张纲 安洋 杨阳 王飞 谭颖徽关键词:降钙素基因相关肽 成骨细胞 超氧化物歧化酶 活性氧 成骨细胞中小凹和小凹蛋白在其增值分化等过程中的作用 2015年 近年来,小凹和小凹蛋白成为生物膜和细胞生物学领域的一个新热点,越来越受到国内外学者的关注。尤其是当今社会,科学技术飞速发展,交通工具日新月异,交通伤害防不胜防,颌面部创伤的诊治和修复显得越来越重要,学者们对颌面部成骨修复研究也越来越多。成骨细胞中的小凹和小凹蛋白在成骨过程中的作用也越来越受到关注,本文简要概括了成骨细胞中的小凹和小凹蛋白的相关作用。 郭俊峰 谭颖徽关键词:成骨细胞