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VD_3羟化酶及其电子传递链的体外构建及活性研究被引量：5: 2016年; 活性维生素D_3具有广泛生理活性及药用价值,利用分子操作技术,在大肠杆菌细胞中重组表达VD_3羟化过程的关键酶体系,是实现活性维生素D_3生物法合成的有效手段。构建了来源于自养无枝酸菌(Pseudonocardia autotrophica)VD_3羟化酶(Vdh,EC 1.14.13.159)及来源于不动杆菌(Acinetobacter sp.OC4)的铁氧还蛋白Fdx及铁氧还蛋白还原酶FdR的重组表达载体p ET28b-Vdh、p ET28b-FdR-Fdx,以大肠杆菌为宿主细胞,体外诱导表达并通过镍柱纯化三种蛋白质,通过CO差光谱法评价羟化酶Vdh体外活性,并利用2,6-二氯靛酚钠(DCIP)和细胞色素c作为电子受体评价电子传递链FdR-Fdx对NADH和NADPH的氧化活性及与羟化酶Vdh的偶联作用,最后利用Vdh及其电子传递链催化维生素D_3的选择性羟化合成25(OH)VD_3。; 柯霞丁冠军孙骏王露郑裕国; 关键词：电子传递链生物催化

VD3羟化酶及其电子传递链的活性表达和在催化合成25-羟基VD3中的应用: 维生素D3（VD3）是一类脂溶性维生素,作为重要的激素前体,具有广泛的生理活性。VD3母核结构中若C1或C25发生羟基化,可形成活性VD3,相应的生理活性显著提高,是体内VD3发挥生理作用的基本形式。利用选择性羟化酶实现...; 孙骏; 关键词：维生素D3 电子传递链; 文献传递

生物法制备活性维生素D_3的现状简述被引量：3: 2016年; 活性维生素D_3(VD_3)是一种人体内不可或缺的脂溶性维生素,它具有调节人体钙磷代谢以及控制骨骼细胞生长分化的重要生理功效。综述了目前针对生物法制备活性VD_3的限制性因素及其解决对策,从重组基因工程菌的表达、人工电子传递链的构建、全细胞辅酶再生体系的建立、底物细胞膜通透性的改善4个方面进行阐述。; 孙骏柯霞郑裕国; 关键词：活性维生素D3 生物法制备辅酶再生

P450酶系中高效电子传递链的构建及应用被引量：4: 2015年; 细胞色素P450作为单加氧酶的主要成员,能够在多种化合物中引入氧分子,催化包括羟化在内的多种反应。在级联的氧化还原反应中,需特定的电子传递链将氧原子中的电子传递至P450单加氧酶的亚铁红素结构中,并最终催化底物氧化,而电子传递体系的低效性往往成为整个反应的限速步骤。本文在介绍P450单加氧酶电子传递链基本结构的基础上,着重阐述对于细胞色素P450酶系中电子传递链未知或者内源性电子传递效率较低的情况下,利用DNA重组技术构建高效的电子传递链从而提高P450单加氧酶的催化效率相关研究进展,主要从细菌及真核细胞线粒体电子传递链(ClassⅠ)及真核生物细胞色素C还原酶CPR(ClassⅡ),天然融合电子传递链及人工融合蛋白电子传递链的构建及其应用展开。; 柯霞孙骏郑裕国; 关键词：电子传递链 DNA重组融合蛋白

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孙骏