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高迁移率族蛋白B1通过Toll样受体4介导肾小管上皮细胞的炎性反应被引量：3: 2015年; 目的观察高迁移率族蛋白B1（hiigh mobility groupp rotein box1，HMGB1）介导肾小管上皮细胞功能的变化并探讨其机制。方法体外培养大鼠肾小管上皮细胞（NRK52E），分为空白对照组、HMGB1刺激组以及HMGB1＋红假单胞菌脂多糖（Lipopolysaccharide from Rhodobactersphaeroides，LPSRS）刺激组，采用免疫荧光及Western印迹检测Toll样受体4（Toll-likereceptor4，TLR4）表达，流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期变化，Westem印迹检测MAPK信号通路及NF—KB激活情况，实时荧光定量PCR检测细胞IL-1、IL-6及组织金属蛋白酶2抑制因子（tissue inhibitor of metalloprUteinases2，TIMP2）mRNA表达水平，蛋白芯片检测IL-1、IL-6及TIMP2蛋白表达水平。结果NRK52E细胞表达TLR4。与对照组比较，HMGB1刺激组细胞周期G1期阻滞率高，MAPK信号通路及NF-kB激活，IL-1、IL-6及TIMP2 mRNA及蛋白表达水平均显著升高（均P〈0．05）。TLR4特异性阻断剂LPSRS可以显著抑制HMGB1所介导的效应（均P〈0．05）。结论 HMGB1与NRK52E细胞上TLR4的相互作用介导肾小管上皮细胞炎性反应，主动合成并释放炎性介质。; 郑世翔杨倩杨红霞张勤丁国华; 关键词：炎症 TOLL样受体4 肾小管上皮细胞

靶向IgA肾病Gd-B细胞HPV16 L1重组病毒样颗粒基因载体的构建与表达: 2017年; 目的:构建并表达靶向IgA肾病分泌糖基化缺陷IgA1分子B细胞(Gd-B)的人乳头瘤病毒16型(HPV16)L1重组蛋白病毒样颗粒(VLPs)基因载体。方法:PCR定点突变技术构建HPV16L1-PH嵌合基因片段并与pPIC9K载体连接获得重组表达质粒;将上述质粒通过电转化形式转入毕赤酵母GS115,并在甲醇诱导下表达HPV16L1-PH嵌合蛋白;对Ni柱纯化后获得的目的蛋白分别进行SDS-PAGE和LC-MS/MS鉴定;加入解组装及组装缓冲液对目的蛋白进行包装,透射电镜观察病毒样颗粒的结构及形态。结果:纯化后的重组蛋白经SDSPAGE和LC-MS/MS鉴定确定所检测胶点中的蛋白质为与目的蛋白预测值相同。透射电镜分析粒径分布和结构与预测值相同。病毒样颗粒在组装及解组装缓冲液作用下通过电镜可观察到发生组装及解组装。结论:本研究成功获得了靶向IgA肾病患者异常Gd-B细胞的嵌合HPV16L1-PH嵌合蛋白,为IgA肾病下一步实验研究与靶向性治疗奠定了基础。; 陈朝威颜奇张勤付强王惠明丁国华; 关键词：人乳头瘤病毒16型 IGA肾病基因载体

支架蛋白JLP在单侧输尿管梗阻小鼠肾间质纤维化中的作用及其机制探讨被引量：9: 2016年; 目的观察支架蛋白JLP基因缺失对单侧输尿管梗阻（UUO）小鼠肾间质纤维化的影响，探讨JLP在梗阻性肾病肾纤维化形成中的作用和可能机制。方法将jlp＋/＋生型（jlp＋/＋）小鼠和jlp敲除（jlp＋/＋）小鼠分为4组：jlp“假手术组（jlp＋/＋-Sham）；jlp＋/＋假手术组（jlp＋/＋-Sham）；jlp＋/＋模型组（jlp＋/＋-UUO）和jl旷模型组（jlp-／-UUO）。分别于术后7d和14d处死小鼠。Masson染色观察肾间质纤维化改变；免疫荧光、免疫组化及Western印迹法观察JLP在各组小鼠肾组织的表达与分布；免疫组化法检测肾组织α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、I型胶原纤维（COL-I）、Ⅲ型胶原纤维（COL-Ⅲ）、转化生长因子β1（TGF-B1）表达；Western印迹检测肾组织α-SMA、COL-I、COL-Ⅲ、TGF-β1、p-Smad2及p-Smad3蛋白表达。结果jlp＋/＋小鼠肾组织表达JLP，主要分布于肾小管。Masson染色结果显示，与jlp＋/＋．UUO组比较，jlp-／-UUO组肾间质胶原纤维增加，纤维化程度加重（均P〈0．05）。免疫组化结果显示，与jlp＋/＋-UUO组比较，jlp＋/＋．UUO组小鼠肾皮质α-SMA、COL-I、COL-Ⅲ和TGF-β1表达明显升高（均P〈0．05）。Western印迹结果显示，与jlp＋/＋．UUO组比较，jlp＋/＋-UUO组α-SMA、COL-I、COL-Ⅲ和TGF-β1蛋白表达明显升高（均P〈0．05），p-Smad2和p-Smad3蛋白表达也明显升高（均P〈0．05）。结论支架蛋白JLP在预防。肾纤维化的形成中起重要作用，这一作用可能是通过抑制TGF-β1的表达和肌成纤维细胞生成来实现的。; 付强王惠明颜奇陈朝威张勤丁国华; 关键词：转化生长因子Β1 输尿管梗阻单侧肾间质

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张勤

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