周艳
- 作品数：51 被引量：17H指数：2
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金云南省科技计划项目中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 表达神经营养因子和酪氨酸羟化酶双顺反子重组腺病毒的构建方法
- 表达神经营养因子和酪氨酸羟化酶双顺反子重组腺病毒的构建方法，属于基因工程。步骤有：将NTN和TH基因分别插入双顺反子表达质粒pcDNA3.0BA多克隆位点，用筛选出的模板和引物PCR扩增得到双顺反子表达盒，插入腺病毒穿梭...
- 李鸿钧孙茂盛王文举严敏周艳
- 文献传递
- 一种包含miR-135b-5p的外泌体及在抗轮状病毒感染中的应用
- 本发明属于生物医药领域，尤其涉及轮状病毒外泌体及其应用。目前尚没有关于确认轮状病毒感染宿主细胞后是否分泌外泌体，以及外泌体在病毒复制过程中的调控机制的相关报道。本发明公开了一种包含miR‑135b‑5p的外泌体以及这种外...
- 周艳李鸿钧胡晓青陈蓉吴晋元
- 文献传递
- HPV31 L1 C端截短基因可在昆虫细胞表达体系中高水平制备L1 VLP疫苗被引量：1
- 2019年
- 目的利用昆虫细胞表达体系制备人乳头瘤病毒(HPV)31 L1病毒样颗粒(VLP)疫苗。方法化学合成法获得昆虫Sf9细胞偏性密码子优化的、C端删除27个氨基酸编码序列的HPV31 L1截短基因(HPV31 L1MΔC),构建重组杆状病毒,感染Sf9细胞进行表达;分别采用超声破碎、含离子型表面活性剂(1%SDS等)或含非离子型表面活性剂(0.5%TritonX-100)的裂解缓冲液,制备细胞裂解上清;氯化铯超速离心法纯化后经动态光散射及透射电子显微镜鉴定;0.1μg的HPV31 L1MΔC VLP于第0和2周肌肉免疫BALB/c小鼠,第4周采集血清分析中和活性。结果 3种裂解方法制备的上清均显示HPV31 L1MΔC蛋白的特异表达,其表达量约占裂解上清总蛋白的10%;采用非离子型表面活性剂获得的裂解上清纯化后,目的蛋白纯度高,产量达11.5 mg/L;纯化蛋白的水化分子直径为103.3 nm,均一性好;电镜分析为直径50～60 nm的VLP。免疫血清中HPV31中和抗体滴度为1 440。结论 HPV31 L1MΔC在昆虫细胞表达体系制备的VLP产量高、免疫原性好,可用于生产含HPV31 L1 VLP的多价疫苗。
- 郝亚茹张婷刘洪洋王志荣周艳夏百成许雪梅
- 关键词：病毒样颗粒中和抗体昆虫细胞
- 一种基于原核表达诺如病毒抗原表位的亚单位疫苗及其制备方法
- 本发明涉及生物医药领域，尤其是基于原核表达诺如病毒抗原表位亚单位疫苗的制备方法。本发明提供了一种原核表达的亚单位疫苗，用于刺激机体产生对抗诺如病毒的特异性抗体，其特征在于诺如病毒重组抗原序列为SEQ ID NO:1，来源...
- 李鸿钧刘洋林晓晨周艳吴晋元解裕萍
- 文献传递
- 一种lncRNA及其在调控轮状病毒复制中的应用
- 本发明提供了一种lncRNA及其在调控轮状病毒复制中的应用。所述lncRNA具有SEQ ID No.1所示序列。本发明发现该lncRNA的表达水平与轮状病毒感染相关，并且能够抑制轮状病毒增殖。
- 周艳李鸿钧胡晓青陈蓉吴晋元
- Ad-NTN-TH联合干细胞治疗帕金森氏病模型猴的研究
- 李鸿钧周艳孙茂盛吴晋元和占龙尹娜鲁帅尧
- 帕金森氏病（PD）是一种中老年常见的慢性神经系统退行性疾病。中国帕金森病患者总人数约在170万-200万之间。现在临床治疗方法在一定时间内可改善症状，但不能从根本上去除病因，也不能延缓疾病的进程。因此，寻找一种有效的治疗...
- 关键词：
- 关键词：帕金森氏病干细胞治疗细胞移植治疗神经系统退行性疾病
- 表达神经营养因子Neurturin的骨髓间充质干细胞的构建及体外活性检测被引量：1
- 2012年
- 研究神经营养因子Neurturin(NTN)在由于神经元损伤而造成的神经退行性疾病中对神经元的保护和修复作用。利用重组腺病毒载体将NTN基因转入恒河猴骨髓间充质干细胞(rMSC),通过RT-PCR、IF及Western blot方法检测NTN的转录和表达,并采用鸡胚背根神经节体外培养实验和胚胎大鼠中脑多巴胺能神经元存活实验对NTN进行体外活性检测。结果表明NTN在rMSC中稳定表达和分泌,并具有体外生物学活性,为由于神经元损伤造成的神经退行性疾病的干细胞移植治疗奠定了一定的基础。
- 王晚璞孙茂盛李鸿钧谢天宏严敏周艳尹娜
- 关键词：重组腺病毒神经营养因子NEURTURIN活性检测
- SHH/Lmx1a信号通路调控NTN修饰的rASCs分化多巴胺能神经元的方法
- SHH/Lmx1a信号通路调控NTN修饰的rASCs分化多巴胺能神经元的方法，属于生物医学方法。本发明通过PCR分别获得Lmx1a基因和嵌合NTN基因的编码序列，经同源重组在HEK-293细胞中分别包装重组腺病毒Ad-L...
- 李鸿钧周艳孙茂盛严敏吴晋元
- 文献传递
- 恒河猴miR-125a-3p慢病毒载体的构建、鉴定以及功能研究
- 2017年
- 构建携带miR-125a-3p过表达与抑制表达shRNA的慢病毒,研究miR-125a-3p对轮状病毒感染乳鼠导致的腹泻的影响,为进一步研究miR-125a-3p对轮状病毒增殖过程中的影响及探究其机制提供前期研究基础。设计miR-125a-3p前体序列及其反向互补序列,与慢病毒骨架质p LVshRNA-EGFP(2A)Puro载体进行酶切连接,构建过表达与抑制表达miR-125a-3p的慢病毒表达载体。利用HEK293Ta细胞包装慢病毒颗粒,测定病毒滴度后,将获得的miR-125a-3p过表达慢病毒颗粒感染MA104细胞和灌胃感染乳鼠,检测miR-125a-3p的表达。同时对乳鼠进行轮状病毒攻毒试验,观察腹泻情况。研究成功构建了过表达及抑制miR-125a-3p表达的慢病毒载体,获得高效的过表达及抑制miR-125a-3p的慢病毒颗粒,成功感染MA104细胞,以及在乳鼠小肠组织有表达。同时发现miR-125a-3p过表达慢病毒感染乳鼠后对轮状病毒引起的腹泻有明显的抑制作用。
- 刘雅琳周艳耿盼盼解裕萍乔洪图孙茂盛李鸿钧
- 关键词：慢病毒乳鼠
- 表达GⅡ.4型诺如病毒VP1复制缺陷型腺病毒构建与鉴定
- 2023年
- 人诺如病毒(norovirus,NoV)在体外难以培养,不宜采用经典疫苗的方式进行疫苗研发,以腺病毒为载体的重组腺病毒疫苗为诺如病毒疫苗的研发提供另一种路线选择。构建表达人GⅡ.4型诺如病毒VP1蛋白的重组腺病毒为该技术路线的疫苗研发奠定基础。首先使用PCR扩增诺如病毒VP1片段,通过酶切、连接、转化,克隆含VP1基因的pshuttle-CMV-VP1穿梭质粒,再与腺病毒骨架质粒进行同源重组,重组质粒鉴定正确后使用PacⅠ酶切线性化,转染至HEK293细胞进行病毒包装,包装成复制缺陷型的完整腺病毒颗粒命名为rAd-VP1,病毒传代后进行滴度测定,并感染HEK293细胞,通过Western Blot方法鉴定重组腺病毒外源蛋白VP1的表达情况。结果表明,包装传代后的重组腺病毒浓缩后滴度达到CCID_(50)=5×10^(9)/mL,并且能在HEK293细胞成功表达VP1蛋白。研究为rAd-VP1的动物免疫评价和诺如病毒的疫苗研发提供基础。
- 施鹏林晓晨周艳李娇春宋泽鑫鲁辰星谭银珍胡晓青陈蓉李鸿钧
- 关键词：诺如病毒腺病毒载体同源重组
