刘静
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 供职机构：中国科学院上海生命科学研究院生物化学研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 抑制血小板衍生生长因子基因表达的三链形成寡核苷酸及其应用
- 本发明提供了一类用于抑制PDGF－B基因(c－sis原癌基因)表达的五种三链形成寡核苷酸。通过凝胶阻滞实验、DNasel印迹、体外转录抑制、核蛋白结合抑制实验、瞬时表达抑制实验和稳定转染抑制实验证明了这些化合物可与靶位点...
- 金由辛刘静
- 文献传递
- 人线粒体tRNA^(Leu(UUR))及其突变体的基因克隆、表达和纯化被引量：2
- 2000年
- 将化学法合成的人线粒体tRNALeu(UUR)及其突变体(tRNALeu(M))基因分别连接到载体pGEM-9zf (?)中, 并转化到大肠杆菌JM109中得到两个转化体分别为Leu-W和Leu-M. 在IPTG的诱导下, tRNALeu(UUR)和tRNALeu(M)的表达量可达总小分子RNA的19.10%和17.76%. 经DEAE-sepherose CL4B柱层析可使它们的纯度提高3倍. 最后用15%的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化, 并用大肠杆菌亮氨酰tRNA合成酶(LeuRS)分别测定了它们的氨酰化反应动力学常数. 结果显示, mtRNALeu(M)的Kcat / Km值约为mtRNALeu(UUR) 的1/5, 提示该突变可使mtRNALeu(UUR)的氨基酸接受能力明显下降.
- 韩伟国陈莉刘静查锡良金由辛王德宝
- 关键词：突变体基因克隆纯化
- 毛细管电泳技术分析PDGF-B基因启动子与蛋白质的复合物被引量：3
- 2001年
- 利用 1.0 %T ,0 %C的线性聚丙烯酰胺 (即丙烯酰胺和双丙烯酰胺的总质量分数是 1.0 % ,交联度为 0 % )作为筛分介质 ,对人体血小板长生因子 (PDGF) B基因启动子与核蛋白形成的复合物进行了分析。结果显示主要有两种核蛋白与PDGF B基因启动子具有较强的结合能力 ,能形成DNA蛋白质复合物。所得结论与传统凝胶电泳相似。该方法具有较高的分离度和良好的重现性 ,整个分析可在 5 0min内完成。该方法不失为一种基于PDGF为研究目标、用于PDGF与蛋白质复合物形成及抑制行为分析的快速、准确的实用方法。
- 樊兴君刘静金由辛王德宝
- 关键词：毛细管电泳DNA结合蛋白核蛋白复合物
- 抑制血小板衍生生长因子基因表达的三链形成寡核苷酸及其应用
- 本发明提供了一类用于抑制PDGF-B基因(c-sis原癌基因)表达的五种三链形成寡核苷酸。通过凝胶阻滞实验、DNaseI印迹、体外转录抑制、核蛋白结合抑制实验、瞬时表达抑制实验和稳定转染抑制实验证明了这些化合物可与靶位点...
- 金由辛刘静
- 文献传递
- 一种体内高效表达反义RNA、三链形成RNA及Ribozyme的新载体被引量：4
- 2000年
- 为了在体内高效表达反义RNA、三链形成RNA及Ribozyme ,通过PCR克隆技术构建了一种全新载体 pBSKneorU 6’。该载体利用hsnRNAU6基因表达单元的特性 ,保留了U 6RNA分子 5’端维持分子稳定性的发夹和帽式结构的序列 ,缺失了其中间参与mRNA前体剪切的部分 ,取而代之的是 3个限制性内切酶位点。Hela细胞核抽提物体外转录实验证明该载体可有效地表达U6变体RNA分子。该载体携带新霉素抗性基因neor ,因而可用于真核细胞稳定转染的筛选。
- 刘静金由辛王德宝
- 关键词：基因治疗SNRNA
