徐行
- 作品数：11 被引量：6H指数：2
- 供职机构：上海海洋大学更多>>
- 发文基金：教育部留学回国人员科研启动基金上海市教育委员会创新基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学轻工技术与工程更多>>
- 斑马鱼notch2基因突变体的制备方法
- 本发明公开了涉及一种斑马鱼notch2基因突变体的制备方法；包括如下步骤：确定notch2基因敲除的靶点位置；以pUC19‑gRNA scaffold质粒为模板，使用引物T7‑notch2‑sfd、tracr rev进行...
- 张庆华岳倩文徐行季策李伟明
- 文献传递
- 斑马鱼myd88和traf6真核表达载体的构建被引量：2
- 2021年
- 髓样分化因子88 (myeloid differentiation primary response gene 88, MYD88)和TNF受体相关因子6(TNF receptor associated factor 6, TRAF6)均属于Toll样受体(Toll-like receptors, TLR)家族成员中的关键衔接分子。斑马鱼是研究先天免疫应答的独特模式生物,为了构建myD88和traf6的真核表达载体,用于免疫应答机制的研究,克隆了斑马鱼myd88和traf6基因的编码区CDS全长序列,分别是855 bp和1 629 bp。结构分析表明,斑马鱼MYD88存在2个保守结构域为死亡结构域和TIR结构域,TRAF6存在4个保守结构域分别为RING结构域、2个锌指结构域、环-环(coiled-coil)结构域以及TRAF同源结构域(meprinand TRAF-homology, MATH),并与其他物种氨基酸序列一致性较高。系统进化树分析发现斑马鱼myd88和traf6基因与硬骨鱼类亲缘关系较近,说明斑马鱼myd88和traf6基因的同源性符合其在物种进化上的地位并且具有很高的结构同源性。将斑马鱼myd88和traf6基因的CDS全长序列连接至pCMV-Tag2B表达载体。通过对重组质粒进行双酶切检测发现,成功克隆了斑马鱼pCMV-myd88和pCMV-traf6真核表达载体。为了验证这2个真核表达载体的生物学功能,本研究在HEK293T细胞中进行NF-κB的报告基因活性检测。结果表明,过表达myd88和traf6基因后,斑马鱼NF-κB家族nfκb1启动子的转录活性显著升高,分别约为空载对照组的2.5倍和8倍。鉴于MYD88和TRAF6在天然免疫功能等方面的重要作用,实验结果为以后研究斑马鱼的先天免疫信号传导过程提供了有力的研究工具。
- 徐行徐行刘何奕张颖任建峰张颖任建峰
- 关键词：斑马鱼真核表达载体
- 斑马鱼notch3基因突变体的制备方法
- 本发明公开了涉及一种斑马鱼notch3基因突变体的制备方法；包括如下步骤：确定notch3基因敲除的靶点位置；以pUC19‑gRNA scaffold质粒为模板，使用引物T7‑notch3‑sfd、tracr rev进行...
- 张庆华岳倩文季策徐行张秋月李伟明
- 斑马鱼(Danio rerio)mapk1基因对tp53基因调控研究被引量：3
- 2021年
- 旨在研究斑马鱼(Danio rerio)mapk1基因对tp53基因的调控作用。通过生信网站分析斑马鱼tp53启动子序列与mapk1基因CDS序列,构建斑马鱼tp53启动子荧光素酶报告基因质粒pGL3-tp53-Luc和mapk1表达质粒pCMV-Tag2B-mapk1。利用Luciferase实验验证tp53启动子报告基因的活性,以及mapk1基因对tp53基因的活性影响。结果显示,斑马鱼tp53基因启动子区无CpG岛位点,包含Oct-1(TATGTAAAGC)、Sp-1(AGATCCCGCC)、c-Jun(CTGACGTCAC)、CREB(CTGACGTCAC)、CREBP1(CTGACGTCAC)、NF-kappa B1(AGGGGAATCC)和RAR-alpha1(TTGAACTTTT)共7个转录因子结合位点;斑马鱼与人和小鼠MAPK1氨基酸的一致性分别为91.33%和90.79%。pGL3-tp53-Luc在哺乳动物细胞系和鱼类细胞系中均具有很高的活性,分别是对照组的17倍和9倍。在HEK293T细胞中过表达pCMV-Tag2B-mapk1质粒后pGL3-tp53-Luc的luciferase活性是对照组的3倍左右。实验验证了斑马鱼mapk1基因可促进tp53基因的表达。
- 包林珠时灿卢玲儿徐行徐行任建峰任建峰张庆华
- 关键词：斑马鱼TP53报告基因
- 一种海藻珍珠粉圆的制备方法
- 本发明属于食品技术领域，特别涉及一种海藻珍珠粉圆的制备方法，其步骤包括：将质量浓度为0.6‑0.8％的海藻酸钠和海萝藻多糖混合液，搅拌、静置，形成胶体溶液；在65‑75℃条件下，将胶体溶液加入到木薯淀粉中，并不断搅拌、糊...
- 柯异芸周洪鑫徐行
- 文献传递
- 斑马鱼notch3基因突变体的制备方法
- 本发明公开了涉及一种斑马鱼notch3基因突变体的制备方法；包括如下步骤：确定notch3基因敲除的靶点位置；以pUC19‑gRNA scaffold质粒为模板，使用引物T7‑notch3‑sfd、tracr rev进行...
- 张庆华岳倩文季策徐行张秋月李伟明
- 文献传递
- 一种海藻珍珠粉圆的制备方法
- 本发明属于食品技术领域，特别涉及一种海藻珍珠粉圆的制备方法，其步骤包括：将质量浓度为0.6-0.8％的海藻酸钠和海萝藻多糖混合液，搅拌、静置，形成胶体溶液；在65-75℃条件下，将胶体溶液加入到木薯淀粉中，并不断搅拌、糊...
- 柯异芸周洪鑫徐行
- 斑马鱼notch3基因真核表达载体的构建及其表达分析被引量：1
- 2022年
- 为了进一步研究notch3基因在斑马鱼中的功能,构建了斑马鱼notch3真核表达载体并在真核细胞中成功表达。其中斑马鱼notch3基因编码序列(coding sequence,CDS)从NCBI的在线数据库中获得,根据序列克隆其胞内段(notch intracellular domain,NICD),接着利用同源重组技术构建pCMV-N3ICD表达载体。再通过双酶切和测序筛选阳性重组载体,借由脂质体法转染至HEK293T细胞中,最后经细胞免疫荧光技术和蛋白质印迹法验证N3ICD的表达。结果显示,重组质粒经酶切电泳片段及测序比对均与预期结果一致。在蛋白质印迹实验中N3ICD蛋白可正常表达,且大小与预测结果一致。细胞免疫荧光显示重组质粒可以在HEK293T细胞的细胞核中表达。同时,构建的N3ICD真核表达载体能够明显增强NF-κB(nuclear factor-кB)家族中rela和nfκb1启动子的活性。成功构建了pCMV-N3ICD真核表达载体。
- 吴坤坤徐行徐行季策李伟明任建峰
- 关键词：斑马鱼NOTCH3免疫荧光真核表达载体
- 斑马鱼notch2基因突变体的制备方法
- 本发明公开了涉及一种斑马鱼notch2基因突变体的制备方法；包括如下步骤：确定notch2基因敲除的靶点位置；以pUC19‑gRNA scaffold质粒为模板，使用引物T7‑notch2‑sfd、tracr rev进行...
- 张庆华岳倩文徐行季策李伟明
- 斑马鱼Notch1a和Notch3分子的天然免疫功能研究及其对鱼鳔发育的影响
- Notch信号通路是细胞与细胞之间交流的重要信号通路,于1919年首次发现,由于该基因的缺失会导致黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)翅膀边缘出现缺口(notch)而得名。Notch受体在不同物种以...
- 徐行
- 关键词：斑马鱼NOTCH3鱼鳔NF-ΚB信号通路天然免疫
- 文献传递
