目的:探讨补肾益髓生血法再生障碍性贫血(AA)大鼠含药血清通过SDF-1/CXCR4介导的PI3K/AKT信号通路对骨髓间充质干细胞(BMSCs)与骨髓单个核细胞(BMNCs)共培养BMNCs增殖能力的影响。方法:60Co-γ联合CTX建立再障大鼠模型,各组按文献方法分离血清冻存备用。在分别建立粒系和红系BMSCs与BMNCs共培养体系基础上,用补肾益髓生血法再障大鼠含药血清进行干预。实验分为空白对照组、正常对照组、模型组、康力龙组、滋肾生血组、益髓生血组和温肾生血组。于第4、8、10天分别计数红系集落形成单位(CFU-E)、粒-单核细胞系集落形成单位(CFU-GM)、红系爆式集落形成单位(BFU-E)。共培养10d后,提取细胞总RNA,RT-PCR检测SDF-1、CXCR4、PI3K、AKT与m TOR m RNA的表达。结果:补肾益髓生血法含药血清促进了共培养BMNCs的增殖分化,其集落形成数目显示各治疗组CFU-E、BFU-E、CFU-GM集落形成数量较模型组增加(P<0.05,P<0.01);RT-PCR结果显示康力龙组、滋肾生血组、益髓生血组、温肾生血组SDF-1、CXCR4、PI3K、AKT、m TOR表达较模型组显著升高(P<0.05,P<0.01),集落形成与基因表达均显示,滋肾生血组优于温肾生血组和益髓生血组(P<0.05,P<0.01)。结论:补肾益髓生血法AA大鼠含药血清可以促进BMSCs与BMNCs共培养体系中BMNCs的增殖分化,这可能与SDF-1/CXCR4介导的PI3K/AKT信号通路有关,其中滋肾生血法优于益髓生血法和温肾生血法。
目的:本研究主要探讨糖肾平对糖尿病肾病(DKD)KK-Ay小鼠肾脏保护作用及其对TGF-β_1/Samd6/BMP7信号通路的影响。方法:10只雌性C57BL/6J小鼠作为对照组。雌性10周龄KK-Ay小鼠60只,KK鼠料诱导10周后建立糖尿病肾病动物模型。模型小鼠按体质量和血糖区组分层随机法分为模型组、厄贝沙坦组与糖肾平小、中、大剂量组。厄贝沙坦组,糖肾平小、中、大剂量组均灌胃给药,正常组、模型组用等体积去离子水灌胃。每4周称体质量和测24 h尿蛋白定量。实验第26周,眼球取血并处死小鼠,称肾脏质量、测血糖,分离血清测BUN、Scr、TG、MDA、NO和SOD;HE染色和Mallory染色观察肾组织病理形态;原位杂交、免疫组化、Western blot检测肾组织TGF-β_1、Samd6、BMP7、α-SMA、E-Cadherin m RNA及蛋白表达。结果:与模型组比较,各治疗组体质量、肾质量/体质量、尿蛋白降低,其中糖肾平中、大剂量组有显著性差异(P<0.01);肾脏病理损害明显减轻,FBG、血清BUN、Scr、TG和MDA含量明显降低(P<0.01),NO、SOD含量明显增加(P<0.01),Samd6、BMP7和E-Cadherin m RNA及蛋白的表达量增加,TGF-β_1和α-SMA m RNA及蛋白的表达量减少,其中糖肾平大剂量组有显著性差异(P<0.01),糖肾平的治疗效果呈剂量依赖关系。结论:糖肾平对DKD KK-Ay小鼠肾脏保护及逆转肾小管上皮细胞转分化的作用,可能与下调氧化应激水平及调节TGF-β_1/Samd6/BMP7信号通路有关,这为DKD"肾痿"学说提供了新的实验依据。
