目的:应用小发卡状RNA(shRNA)沉默TFF3基因表达,探索其对人甲状腺癌乳头状癌K1细胞增殖和侵袭的影响。方法:采用脂质体转染法将靶向TFF3基因的TFF3-shRNA瞬时转染人甲状腺乳头状癌K1细胞,使相应的基因沉默。实验设空白对照组、阴性对照组和实验组。分别采用逆转录PCR、蛋白质印迹法检测转染TFF3-shRNA后K1细胞中TFF3mRNA及其蛋白的表达;CCK-8实验检测3组细胞增殖能力的改变,细胞划痕试验检测K1细胞侵袭能力的变化。结果:1成功将携有TFF3-shRNA基因的重组质粒Ca#HSH018037-4-HIVmU6转染K1细胞;2RT-PCR检测TFF3mRNA的表达,TFF3基因沉默后TFF3mRNA表达降低,是空白对照组的(0.38±0.11)倍(P<0.01),阴性对照组是空白对照组的1.082倍(P>0.05);3 Western blot提示TFF3基因沉默后TFF3蛋白表达降低59.5%,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01);4细胞划痕检测K1细胞侵袭能力,实验组(TFF3-shRNA组)K1细胞的侵袭能力减弱,划痕宽度与空白对照组比较减少57.1%,差异有统计学意义(P<0.01);5CCK-8试剂盒检测细胞增殖能力,通过生长曲线分析干扰组K1细胞生长明显慢于空白对照组细胞(P<0.01);实验组(TFF3-shRNA组)K1细胞在6、12、24、36、48h的增殖抑制率分别为16.6%、26.6%、33.6%、33.8%、35.0%,与阴性对照组相比,K1细胞增殖能力减弱。结论:TFF3基因沉默后可引起mRNA的降解、蛋白翻译降低,并抑制K1细胞的侵袭与增殖能力。
